Impacto da carne bovina em metabólitos e inflamação

A abordagem para este estudo é inscrever uma população de indivíduos saudáveis ​​(n = 10; 5 homens e 5 mulheres) em um estudo duplo-cego, de dois braços (Organic Grass-fed e Convencional-fed), randomizado, cruzado, no qual cada participante individual serve como seu próprio controle para comparar as respostas dos ácidos biliares séricos pós-prandiais entre as refeições de bife, uma alimentada organicamente com capim (OGF) e a outra alimentada convencionalmente (CONVF). Os participantes consumirão uma refeição de bife de 6 onças grelhada a 158 ° F, a temperatura recomendada pelo USDA. O design cruzado aleatório com metade dos participantes começando no braço OGF e a outra metade começando no braço CONVF eliminará os possíveis efeitos de ordem. Será criada a randomização de blocos com 2 blocos (total de 5 por bloco). Fazer com que cada pessoa sirva como seu próprio controle em um estudo cruzado eliminará a influência da variação interindividual. A equipe de Pesquisa em Nutrição da MSU tem vasta experiência com protocolos de teste pós-prandial e manipulação dietética e utilizará essa experiência para executar o protocolo proposto com padronização pré-teste apropriada, uniformidade de preparação de refeições, tempo preciso de coleta de sangue e procedimentos estabelecidos para processamento e análise amostras de sangue. Os ácidos biliares, incluindo todas as formas primárias e secundárias, serão analisados ​​a partir de amostras coletadas antes da refeição e em intervalos de 30 minutos por 4 horas após a refeição. Métodos estabelecidos nas Instalações de Proteômica, Metabolômica e Espectrometria de Massa da MSU serão usados ​​para comparar os ácidos biliares totais e individuais entre as condições OGF e CONVF.

Procedimentos:

Durante a Visita 1, os participantes serão submetidos a consentimento informado, serão solicitados a preencher uma série de questionários escritos e medições antropométricas. Haverá um período mínimo de 72 dias antes da Visita 2, durante o qual os participantes serão solicitados a seguir certas orientações dietéticas, como não comer carne vermelha. A segunda (Visita 2) e a terceira (Visita 3) levarão aproximadamente 5 horas cada e incluirão um total de 9 coletas de sangue por meio de um cateter de amostragem, com cada coleta de sangue coletando cerca de 2-3 colheres de chá de sangue. O sangue será coletado antes de uma refeição de bife fornecida e, em seguida, a cada trinta minutos por 4 horas após o consumo da refeição. Há um mínimo de 72 horas entre as visitas 1 e 2 e 7 dias entre as visitas 2 e 3. Durante esse período mínimo de 72 horas e 7 dias, os participantes serão solicitados a seguir as instruções de dieta e atividade física fornecidas. Além disso, os participantes serão solicitados a preencher um questionário de histórico alimentar de um mês e um recordatório alimentar de 24 horas.

Intervenção dietética: Um especialista em ciência da carne selecionará e preparará os bifes que serão entregues aos participantes. Os participantes serão convidados a consumir uma refeição de bife de 6 onças, cozida a 158 ° F que é OGF ou CONVF, mas será codificada e rotulada para garantir a cegueira.

A cinética (medidas ao longo do tempo) e a metabolômica não direcionada e direcionada (uma técnica analítica avançada para medir 1000 moléculas em uma única amostra) serão usadas como uma ferramenta para diferenciar os impactos potenciais à saúde dos testes de refeição separados para investigar a influência da grama orgânica. carne alimentada versus consumo de carne alimentada convencionalmente em jejum e respostas pós-prandiais em adultos saudáveis. Os pesquisadores esperam identificar uma série de diferenças metabólicas entre as amostras de carne bovina e identificarão os impactos conhecidos dessas diferenças na saúde para fornecer uma comparação substantiva e fornecer uma base para pesquisas futuras.

Análise metabolômica e lipidômica: Quando todas as amostras tiverem sido coletadas, as amostras de soro serão descongeladas e uma fração de metabólito será extraída. Após a extração, as amostras serão exploradas por espectrometria de massa. Uma análise direcionada inicial se concentrará em ácidos biliares, lipídios e aminoácidos. Os analitos visados ​​serão quantificados usando curvas padrão e as concentrações resultantes serão comparadas usando várias ferramentas de análise estatística. As amostras de metabólitos serão analisadas usando um Waters Synapt G2Si QTOF (Waters Corporation). Este instrumento tem capacidade de mobilidade iônica e pode diferenciar compostos intimamente relacionados, como ácidos biliares, em misturas complexas com base em sua área de seção transversal e massa. A alta sensibilidade e a variedade de modos de varredura tornam o Synapt QTOF a escolha ideal para análises não direcionadas de amostras biológicas complexas.

Análise dietética: Este estudo usará a versão mais recente (2018) do Questionário de Histórico de Dieta (DHQ III) baseado na web, um questionário de frequência alimentar projetado para adultos de 19 anos ou mais, desenvolvido pela equipe do Ramo de Métodos e Monitoramento de Fatores de Risco ( RFMMB) do NIH National Cancer Institute. As saídas do DHQ III incluem constituintes de carboidratos, carotenóides e tocoferóis, constituintes dietéticos de suplementos, gorduras, ácidos graxos e colesterol, macronutrientes e energia, minerais, constituintes de proteínas e vitaminas são constituintes dietéticos e grupos de alimentos disponíveis nos arquivos de saída do DHQ III . Além disso, o consumo alimentar agudo será determinado usando o questionário automatizado automatizado de 24 horas (ASA24®) baseado na web.