Impacto de la carne de res en los metabolitos y la inflamación

El enfoque para este estudio es inscribir a una población de individuos sanos (n=10; 5 hombres y 5 mujeres) en un ensayo cruzado, aleatorizado, doble ciego (alimentado con pasto orgánico y convencional), en el que cada participante individual sirve como su propio control para comparar las respuestas de ácidos biliares séricos posprandiales entre comidas de bistec, una alimentada con pasto orgánico (OGF) y la otra alimentada convencionalmente (CONVF). Los participantes consumirán un bistec de 6 onzas asado a la parrilla a 158 °F, la temperatura recomendada por el USDA. El diseño cruzado aleatorio con la mitad de los participantes comenzando en el brazo OGF y la otra mitad comenzando en el brazo CONVF eliminará los posibles efectos de orden. Se creará una aleatorización de bloques con 2 bloques (un total de 5 por bloque). Hacer que cada persona actúe como su propio control en un ensayo cruzado eliminará la influencia de la variación interindividual. El equipo de investigación de nutrición de MSU tiene una amplia experiencia con protocolos de pruebas posprandiales y manipulación dietética y utilizará esta experiencia para realizar el protocolo propuesto con la estandarización previa a la prueba adecuada, la uniformidad de la preparación de las comidas, el momento preciso de la extracción de sangre y los procedimientos establecidos para el procesamiento y el análisis. muestras de sangre. Los ácidos biliares, incluidas todas las formas primarias y secundarias, se analizarán a partir de muestras recolectadas antes de la comida ya intervalos de 30 minutos durante 4 horas después de la comida. Se utilizarán métodos establecidos en el Centro de Proteómica, Metabolómica y Espectrometría de Masas de MSU para comparar los ácidos biliares totales e individuales entre las condiciones OGF y CONVF.

Procedimientos:

Durante la Visita 1, los participantes se someterán a un consentimiento informado, se les pedirá que completen una serie de cuestionarios escritos y medidas antropométricas. Justo antes de la Visita 2, habrá un período de preparación mínimo de 72 horas, durante el cual se les pedirá a los participantes que sigan ciertas pautas dietéticas, como no comer carne roja. La segunda (Visita 2) y la tercera (Visita 3) durarán aproximadamente 5 horas cada una y cada una incluirá un total de 9 extracciones de sangre a través de un catéter de muestreo, con cada extracción de sangre recolectando alrededor de 2-3 cucharaditas de sangre. Se extraerá sangre antes de una comida de bistec proporcionada y luego cada treinta minutos durante 4 horas después del consumo de la comida. Hay un mínimo de 72 horas entre las visitas 1 y 2, y 7 días entre las visitas 2 y 3. Durante este período mínimo de 72 horas y 7 días, se les pedirá a los participantes que sigan las instrucciones dietéticas y de actividad física proporcionadas. Además, se les pedirá a los participantes que completen un cuestionario de historial dietético de un mes y un recordatorio dietético de 24 horas.

Intervención dietética: Un especialista en ciencias de la carne seleccionará y preparará los filetes que se entregarán a los participantes. Se les pedirá a los participantes que consuman una comida de bistec de res de 6 onzas, cocinada a 158 °F que sea OGF o CONVF, pero se codificará y etiquetará para garantizar el cegamiento.

La cinética (medidas a lo largo del tiempo) y la metabolómica dirigida y no dirigida (una técnica analítica avanzada para medir miles de moléculas en una sola muestra) se utilizarán como herramienta para diferenciar los impactos potenciales en la salud de las pruebas de comidas separadas para investigar la influencia de la hierba orgánica. Consumo de carne de res alimentada versus consumo de carne de res alimentada convencionalmente en ayunas y respuestas posprandiales en adultos sanos. Los investigadores esperan identificar una serie de diferencias metabólicas entre las muestras de carne de res e identificarán los impactos conocidos de esas diferencias en la salud para proporcionar una comparación sustancial y proporcionar una base para futuras investigaciones.

Análisis metabolómico y lipidómico: cuando se hayan recolectado todas las muestras, las muestras de suero se descongelarán y se extraerá una fracción de metabolitos. Después de la extracción, las muestras se explorarán mediante análisis de espectrometría de masas. Un análisis específico inicial se centrará en los ácidos biliares, los lípidos y los aminoácidos. Los analitos objetivo se cuantificarán mediante curvas estándar y las concentraciones resultantes se compararán mediante varias herramientas de análisis estadístico. Las muestras de metabolitos se analizarán usando un Waters Synapt G2Si QTOF (Waters Corporation). Este instrumento tiene capacidad de movilidad de iones y puede diferenciar compuestos estrechamente relacionados, como los ácidos biliares, en mezclas complejas en función de su área de sección transversal y masa. La alta sensibilidad y la variedad de modos de escaneo hacen que Synapt QTOF sea la elección óptima para el análisis no específico de muestras biológicas complejas.

Análisis dietético: este estudio utilizará la versión más reciente (2018) del Cuestionario de Historial de Dieta basado en la web (DHQ III), un cuestionario de frecuencia de alimentos diseñado para adultos de 19 años y mayores, desarrollado por el personal de la Subdivisión de Métodos y Monitoreo de Factores de Riesgo ( RFMMB) del Instituto Nacional del Cáncer de los NIH. Los resultados de DHQ III incluyen constituyentes de carbohidratos, carotenoides y tocoferoles, constituyentes dietéticos de suplementos, grasas, ácidos grasos y colesterol, macronutrientes y energía, minerales, constituyentes de proteínas y vitaminas son constituyentes dietéticos y grupos de alimentos disponibles en los archivos de salida de DHQ III . Además, el consumo dietético agudo se determinará utilizando el cuestionario de 24 horas (ASA24®) autoadministrado automatizado gratuito basado en la web.