Interventiostrategia uusien alkoholittomien rasvamaksasairauksien torjumiseksi lasten liikalihavuudessa

Metodologia Tähän tutkimukseen otettiin mukaan monipuolinen ryhmä 10–18-vuotiaita osallistujia sukupuolesta riippumatta, joilla diagnosoitiin ultraäänitutkimuksella havaittu rasvamaksahäiriö ja epänormaalin korkeat alaniinitransaminaasitasot (vähintään kaksi kertaa korkeammat kuin sukupuolensa ylärajat) . Kokeeseen osallistui 29 potilasta, joista 15 sai päivittäin suun kautta 50 mg TRF:ää ja 14 lumelääkettä kuuden kuukauden ajan. Erilaisia ​​kliinisiä parametreja, LIVERFASt in vitro -diagnostista testiä, fibroskaania, biokemiallisia parametreja, DNA-vaurioita ja geeniekspressiota seurattiin sekä tutkimuksen alussa että lopussa.

Otetun verinäytemäärä oli 13 ml kumpikin tulon yhteydessä ja valmistumisen jälkeen 6 kuukauden kohdalla. Näiden testien yksityiskohdat ovat seuraavat:

Ohimenevä elastografia (FibroScan):

Tämä on ei-invasiivinen testi, jolla mitataan maksan jäykkyyttä, kPa (maksafibroosin indikaattori) ja havaitaan rasvan kertymisen astetta (CAP-alueen arvo 100-400 dB/m), maksan jäykkyys > 8 kPa osoittaa edenneen fibroosin, kun taas CAP > 263 tarkoittaa rasvamaksaa. Seulonnan aikana osallistuja makasi tutkimusvuoteessa oikea käsi päänsä takana. Tutkija asetti koettimen potilaan oikeanpuoleisten kylkiluiden väliin. Mittaukset tallennettiin koneeseen (FibroScan® 502 Touch). Seulonta on nopeaa ja helppoa, kestää yleensä alle 15 minuuttia. Skannattu steatoosi pisteytettiin ja arvosteltiin.

DNA-vaurion määritys DNA-vaurio ennen ja jälkeen interventiota suoritettiin käyttämällä CometAssay Kit -sarjaa (Trevigen, Gaithersburg, USA) noudattaen valmistajan protokollaa. Lyhyesti sanottuna verisolut 5 µl väliaineessa suspendoitiin 70 µl:aan lämmintä 0,6 % matalan sulamispisteen (LMA) agaroosia (Boehringer Mannheim, Saksa) (DNAasiton, RNAsefree). Objektilasien annettiin seistä alkalisessa puskurissa 20 minuuttia DNA-säikeiden purkamisen ja alkalilabiilin vaurion ilmentymisen mahdollistamiseksi. Elektroforeesi suoritettiin 20 minuutin ajan 300 mA:lla ja 25 V:lla. 5 minuutin tipoittaisen neutraloinnin (TrisHCl, pH 7,5) jälkeen solut värjättiin lisäämällä 30 µl 1X etidiumbromidia. Objektilasit tutkittiin ja hännän pituus mitattiin fluoresenssimikroskoopilla (Carl Zeiss, Saksa). Jokaisen näytteen osalta tutkittiin 100 satunnaisesti valitun solun DNA-migraatio. Kokonaisvaurion pistemäärä määritettiin kertomalla kullekin vauriotasolle osoitettujen solujen lukumäärä asteen numeerisella arvolla Heaton et ai. kuvaamien menetelmien mukaisesti. [19]. DNA-vaurion kokonaispistemäärä laskettiin seuraavasti. DNA:n kokonaisvaurio = [(0 × n0) + (1 × n1) + (2 × n2) + (3 × n3) + (4 × n4)], jossa n0 = solut, joiden pistemäärä on 0, n1 = solut, joiden pistemäärä on 1, n2 = solut, joiden pistemäärä on 2, n3 = solut, joiden pistemäärä on 3, ja n4 = solut, joiden pistemäärä on 4.

Maksan biomarkkerin ja entsyymin määritys Maksaentsyymien, mukaan lukien alaniiniaminotransferaasi, ALT, aspartaattiaminotransferaasi, AST, gammaglutamyylitransferaasi, GGT ja alkalinen fosfataasi, ALP, tasot ennen ja jälkeen interventio määritettiin potilaiden verinäytteistä. Myös muita biomarkkereita, kuten lipidiprofiilia, α-2-makroglobuliinia ja haptoglobiinia, analysoitiin. Verinäytteet kerättiin BD Vacutainer -laitteeseen ja sentrifugoitiin 1500 xg:ssä 15 minuuttia seerumin erottamista varten. Seerumia säilytettiin -80 °C:ssa, jos sitä ei käsitellä välittömästi. Maksaentsyymien tasot määritettiin käyttämällä ADVIA 1800:ta (Siemens, USA).

Kvantitatiivinen polymeraasiketjureaktio (qPCR):

Kokonais-RNA uutettiin NAFLD-potilaiden verinäytteistä tokotrienolilla tai ilman. Suunniteltiin alukkeet ja koettimet TNFa-, IL-6- ja IFN-gamma-geeneille. 1 ug/ul kokonais-RNA:ta muutettiin cDNA:ksi, jota käytettiin sitten PCR-reaktioon. Kaikki näytteet analysoitiin kahtena rinnakkaisena. Geenien ilmentyminen määritettiin normalisoinnin jälkeen taloudenhoitogeeneillä.