Interventionsstrategie zur Bekämpfung neu auftretender nichtalkoholischer Fettlebererkrankungen bei Fettleibigkeit bei Kindern

Methodik An dieser Studie nahm eine vielfältige Gruppe von Teilnehmern im Alter von 10 bis 18 Jahren teil, unabhängig vom Geschlecht, bei denen eine mittels Ultraschall festgestellte Fettlebererkrankung und ungewöhnlich hohe Alanin-Transaminase-Werte (mindestens zweifach höher als die Obergrenzen für ihr jeweiliges Geschlecht) diagnostiziert wurden. . Die Studie umfasste 29 Patienten, von denen 15 über einen Zeitraum von sechs Monaten eine tägliche orale Dosis von 50 mg TRF und 14 ein Placebo erhielten. Verschiedene klinische Parameter, LIVERFASt-In-vitro-Diagnosetest, Fibroscan, biochemische Parameter, DNA-Schäden und Genexpression, sowohl zu Beginn als auch am Ende der Studie wurden überwacht.

Die Menge der entnommenen Blutproben betrug jeweils 13 ml bei Eintritt und bei Abschluss nach 6 Monaten. Einzelheiten zu diesen Tests sind unten aufgeführt:

Transiente Elastographie (FibroScan):

Dies ist ein nicht-invasiver Test zur Messung der Lebersteifheit, kPa (Indikator für Leberfibrose) und zur Feststellung des Grads der Fettansammlung (CAP-Bereichswert von 100–400 dB/m). Eine Lebersteifheit von > 8 kPa weist auf eine fortgeschrittene Fibrose hin, während CAP von > 263 weist auf eine Fettleber hin. Während des Screenings lag der Teilnehmer mit der rechten Hand hinter dem Kopf auf der Untersuchungsliege. Der Untersucher platzierte eine Sonde zwischen den rechten Rippen des Patienten. Die Messungen wurden im Gerät (FibroScan® 502 Touch) aufgezeichnet. Das Screening ist schnell und einfach und dauert in der Regel weniger als 15 Minuten. Die gescannte Steatose wurde bewertet und bewertet.

Bestimmung des DNA-Schadens Der DNA-Schaden vor und nach dem Eingriff wurde unter Verwendung des CometAssay Kit (Trevigen, Gaithersburg, USA) gemäß dem Protokoll des Herstellers durchgeführt. Kurz gesagt, Blutzellen in 5 μl Medium wurden in 70 μl warmer 0,6 % Agarose mit niedrigem Schmelzpunkt (LMA) (Boehringer Mannheim, Deutschland) (DNAse-frei, RNAse-frei) suspendiert. Die Objektträger wurden 20 Minuten lang im alkalischen Puffer belassen, um das Abwickeln der DNA-Stränge und die Expression alkalilabiler Schäden zu ermöglichen. Die Elektrophorese wurde 20 Minuten lang bei 300 mA und 25 V durchgeführt. Nach 5-minütiger tropfenweiser Neutralisierung (TrisHCl, pH 7,5) wurden die Zellen durch Auftragen von 30 μl 1X Ethidiumbromid gefärbt. Die Objektträger wurden untersucht und die Schwanzlänge mit einem Fluoreszenzmikroskop (Carl Zeiss, Deutschland) gemessen. Für jede Probe wurde die DNA-Migration von 100 zufällig ausgewählten Zellen untersucht. Eine Gesamtschadensbewertung wurde ermittelt, indem die Anzahl der Zellen, die jedem Schadensgrad zugeordnet waren, mit dem numerischen Wert des Grades multipliziert wurde, gemäß den von Heaton et al. beschriebenen Methoden. [19]. Der Gesamt-DNA-Schadenswert wurde wie folgt berechnet. Gesamter DNA-Schaden = [(0 × n0) + (1 × n1) + (2 × n2) + (3 × n3) + (4 × n4)] wobei n0 = Zellen mit Score 0, n1 = Zellen mit Score 1, n2 = Zellen mit Punktzahl 2, n3 = Zellen mit Punktzahl 3 und n4 = Zellen mit Punktzahl 4.

Bestimmung von Leberbiomarkern und -enzymen Die Werte der Leberenzyme, einschließlich Alaninaminotransferase, ALT, Aspartataminotransferase, AST, Gammaglutamyltransferase, GGT und alkalische Phosphatase, ALP, wurden vor und nach dem Eingriff aus den Blutproben der Patienten bestimmt. Andere Biomarker wie Lipidprofil, α-2-Makroglobulin und Haptoglobin wurden ebenfalls analysiert. Die Blutproben wurden in einem BD Vacutainer gesammelt und zur Serumtrennung 15 Minuten lang bei 1500 xg zentrifugiert. Das Serum wurde bei -80 °C gelagert, sofern es nicht sofort verarbeitet wird. Die Werte der Leberenzyme wurden mit ADVIA 1800 (Siemens, USA) bestimmt.

Quantitative Polymerase-Kettenreaktion (qPCR):

Gesamt-RNA wurde aus Blutproben von NAFLD-Patienten mit oder ohne Tocotrienol extrahiert. Es wurden Primer und Sonden für TNFα-, IL-6- und IFN-gamma-Gene entworfen. 1 ug/ul Gesamt-RNA wurde in cDNA umgewandelt, die dann für die PCR-Reaktion verwendet wurde. Alle Proben wurden doppelt analysiert. Die Expression der Gene wurde nach Normalisierung mit den Housekeeping-Genen bestimmt.