EDN ja eosinofiilinen esofagiitti (OesEDN)

Eosinofiilinen esofagiitti on krooninen, tulehduksellinen, immunologista ja allergista alkuperää oleva ruoansulatuskanavan sairaus, joka on seurausta ruokatorven limakalvon eosinofiilisestä infiltraatiosta, joka johtaa ruokatorven toimintahäiriöihin. Se on uusi sairaus, jonka ilmaantuvuus on lisääntynyt lastenlääketieteessä viime vuosikymmeninä, ja sen arvioitu vuotuinen ilmaantuvuus on 3-12/100 000 ja esiintyvyys 22-49/100 000. Se on toiseksi yleisin kroonisen esofagiitin syy peptisen esofagiitin jälkeen.

On kroonisia oireita (vaikea refluksi, nielemishäiriö, ruoan tukkeutumisen tunne ja tarve juoda vettä aterioiden aikana nielemiseksi) tai joskus akuutteja (esim. äkillinen ruokien kosketus aterian aikana, hypersialorrea), joka vaatii hätäendoskopiaa. Sitä voi monimutkaistaa ruokatorven fibroosi, ahtauma tai ruokatorven perforaatio.

Eosinofiilisen esofagiitin diagnoosi on histologinen, ja se perustuu vähintään yhden ruokatorven biopsian osoittamiseen > 15 eosinofiilia/kenttä (suurennus x 400). Useita hoitoja on kokeiltu ja testattu vuosien varrella: protonipumpun estäjät (PPI), häätödieetit, paikallinen kortikosteroidihoito ja viime aikoina immunoterapiat. Endoskooppinen uudelleenarviointi on tehtävä säännöllisesti (8–12 viikon välein uuden hoidon aloittamisen jälkeen, sitten vuosittain ylläpitohoidon aikana tai aikaisemmin kliinisen uusiutumisen yhteydessä) taudin remission vahvistamiseksi tai hoitomuutosten perustelemiseksi. Potilaiden seuranta vaatii siksi lukuisia ruoansulatuskanavan endoskopioita, jotka suoritetaan enimmäkseen yleisanestesiassa lastenlääketieteessä. Tämä on invasiivinen toimenpide, joka voi aiheuttaa komplikaatioita.

Aktiivisen eosinofiilisen esofagiitin ei-invasiivisten biomarkkerien tunnistaminen antaisi meille mahdollisuuden ehdottaa diagnostista ja seurantastrategiaa, joka soveltuu paremmin kliiniseen käytäntöön ja jonka potilaat sietävät paremmin.

EDN, eosinofiilistä johdettu neurotoksiini, on proteiini, joka erittyy, kun eosinofiilit aktivoituvat. Seerumin EDN:ää on tutkittu laajasti atopiassa. Eosinofiilisessä ruokatorven tulehduksessa se näyttää korreloivan merkitsevästi eosinofiilien tiheyden kanssa ruokatorven biopsioissa, ja siksi se olisi korkeampi potilailla, joilla on aktiivinen eosinofiilinen esofagiitti kuin kontrolleilla. Jotkut ryhmät ovat jopa ehdottaneet raja-arvoja veren EDN:lle käyttämällä ROC-käyriä optimoidakseen tämän markkerin herkkyyden ja spesifisyyden eosinofiilisen ruokatorven tulehduksen diagnosoimiseksi pediatriassa. Seerumin EDN näyttää laskevan merkittävästi hoidettavien potilaiden kohdalla.

Muut tutkimukset ovat keskittyneet ruokatorven biopsioiden EDN:ään. Vuonna 2010 tehdyssä tutkimuksessa arvioitiin immunofluoresenssitekniikalla solunsisäisten ja ekstrasellulaaristen EDN-kerrostumien jakautumista eosinofiilisen esofagiitin varalta seurattujen potilaiden ruokatorven biopsioista ja verrokkeista. EDN-värjäytyminen havaittiin selvästi kaikkien potilaiden biopsioissa, ja se puuttui tai oli erittäin heikko kontrollihenkilöillä. Kuitenkin johtopäätökset kudoksen EDN:n ja eosinofiilisen infiltraatiotiheyden välisestä korrelaatiosta eroavat.

Tuoreimmat tiedot koskevat ruokatorven harjan EDN:ää, joka suoritetaan suoraan ruoansulatuskanavan endoskopian aikana tai epäsuorasti painotetun suu-ruokatorvijärjestelmän kautta. Luminaalinen EDN oli merkittävästi korkeampi potilailla, joilla oli aktiivinen eosinofiilinen esofagiitti kuin potilailla, joilla oli eosinofiilinen esofagiitti remissiossa, gastroesofageaalinen refluksitauti tai kontrollipotilailla. Se ennustaa jopa vastetta PPI-hoitoon. EDN ja muut endoluminaaliset markkerit ennakoivat sairauden aktiivisuutta, mukaan lukien sekundaarisen fibroosin ja muiden komplikaatioiden kehittyminen.

Virtsan EDN:ää on analysoitu atooppisissa sairauksissa, erityisesti astmassa ja atooppisessa ihottumassa. Se näyttää liittyvän eosinofiilien aktiivisuuteen näissä allergisissa sairauksissa. Ei ole tutkimuksia virtsan EDN:stä eosinofiilisessä esofagiitissa.

Tähän mennessä eri EDN-määritysten välisestä korrelaatiosta ei ole tehty tutkimuksia.

EDN vaikuttaa lupaavalta, mutta muiden eosinofiilisen esofagiittiaktiivisuuden kanssa korreloivien biomarkkerien tunnistaminen on lisähaaste, jotta voidaan luoda malleja, jotka yhdistävät useita biomarkkereita, jotka ennustavat ruokatorven biopsioiden eosinofiilien tiheyttä. Tätä varten tarkempi tieto tämän taudin immunologisesta, allergologisesta ja metabolomisesta tunnusmerkistä vaikuttaa korvaamattomalta. Vuonna 2023 julkaistussa tutkimuksessa analysoitiin immuunijärjestelmän aktivaatiota ruokatorven biopsioista ja verinäytteistä sekä kohdistamaton metabolomiikka verinäytteistä. Tämän tutkimuksen tulokset viittaavat siihen, että eosinofiiliselle esofagiitille spesifinen plasman allekirjoitus voidaan tunnistaa metabolomista tiedoista ja sytokiinitiedoista.

Lopuksi mikrobiota on liitetty useiden ruoansulatuskanavan ja ruoansulatuskanavan ulkopuolisten allergisten ja tulehdussairauksien, kuten astman ja ekseeman, patogeneesiin. Vain neljä tutkimusta on viime aikoina tutkinut ruokatorven, syljen ja ulosteen mikrobiston merkitystä potilailla, joilla on eosinofiilinen esofagiitti. Dysbioosia on kuvattu, johon liittyy lisääntynyt ruokatorven mikrobikuormitus ja tiettyjen lajien (Haemophilus, Streptococcus) erityinen runsaus verrattuna kontrollihenkilöihin, pienempi syljen bakteerien monimuotoisuus ja samanlainen ulosteen mikrobiota potilailla ja kontrolleilla. Siitä huolimatta on vain vähän suoria todisteita, jotka osoittaisivat ruokatorven ja/tai syljen mikrobiotan vaikutuksen tulehdukseen ja sairauksiin.

Tutkija olettaa, että taudin perifeerinen tunnus korreloi ruokatorven eosinofiilisen infiltraatin kanssa. Tutkija uskoo, että virtsan, seerumin ja endoluminaaliset EDN-pitoisuudet, mutta myös seerumin ja ruokatorven sytokiiniprofiilit ja ruokatorven metabolomiikka korreloivat ruokatorven biopsioiden eosinofiilisen infiltraation kanssa ja korreloivat siten sairauden aktiivisuuden kanssa potilailla, joilla on aktiivinen eosinofiilinen esofagiitti. Potilailla, joilla on eosinofiilinen esofagiitti remissiovaiheessa ja kontrolleilla, tutkija odottaa havaitsevan normaaleja tai matalia EDN-arvoja ja erilaista sytokiiniprofiilia verrattuna potilaisiin, joilla on aktiivinen eosinofiilinen esofagiitti. Tutkija odottaa myös havainnoivansa ruokatorven ja syljen dysbioosia potilailla, joilla on aktiivinen eosinofiilinen esofagiitti.

Kliinisten näkymien osalta tutkija toivoo, että nämä tulokset mahdollistavat ei-invasiivisten biomarkkeripaneeleiden kehittämisen, jotka ennustavat sairauden aktiivisuutta ja siten rajoittavat potilaiden seurantaan tarvittavien ruoansulatuskanavan endoskopioiden määrää.

Tutkimus suoritetaan lapsipotilaiden kohortilla, jota seurataan Trousseau-APHP-sairaalan lasten ravitsemus- ja gastroenterologian osastolla ja jotka joutuvat sairaalaan ylemmän maha-suolikanavan endoskopiaa varten joko osana epäiltyä eosinofiilistä esofagiittia tai seurannan aikana. aiemmin tunnettu eosinofiilinen esofagiittitapaus. Kirjallinen suostumus hankitaan vanhemmilta ja lapsilta heidän ymmärrystasonsa mukaan.

Ruoansulatuskanavan endoskopian aikana otetaan verinäyte katetrista, joka tarvitaan yleisanestesiassa, stimuloimattoman syljen keräämisessä, perendoskooppisessa ruokatorven harjauksessa ja 4 ruokatorven lisäbiopsiaa varten. Virtsanäyte ja ulostenäytteet otetaan myös sairaalahoidon aikana ruoansulatuskanavan endoskopiaa varten.

Riippuen histologisista tuloksista ja biopsioiden eosinofiilisestä tiheydestä, joka vastaa kultastandardia eosinofiilisen esofagiitin diagnosoinnissa ja aktiivisuuden arvioinnissa, koehenkilöt luokitellaan joko "potilas, jolla on aktiivinen eosinofiilinen esofagiitti" ryhmään, "potilas" eosinofiilinen esofagiitti remissiossa" -ryhmä tai "potilas, jolla ei ole eosinofiilistä esofagiittia", joka vastaa vertailuryhmää. Tästä syystä tämä ryhmä määritellään jälkikäteen.

Virtsan, seerumin ja endoluminaalisen ruokatorven harjauksen EDN-arvot mitataan ELISA:lla tai qPCR:llä INRAe:ssä tai Pitié-Salpêtrièressä. Kokonais- ja spesifiset IgE-, Phadiatop®-, tryptaasi-, CBC- ja eosinofiiliaktivaatiotestit suoritetaan Groupe Hospitalier de l'Est Parisienin biokemia-allerlogian laboratoriossa. Jos Phadiatop®-testi on positiivinen, jo kerätylle verelle tehdään lisäkokeita pneumoallergeenispesifisen IgE-tason määrittämiseksi. Verinäytteiden ja ruokatorven biopsioiden sytokiiniprofiilien analyysi sekä ei-kohdennettu metabolomianalyysi suoritetaan INRAe:ssä toisessa vaiheessa, kun kaikki näytteet on otettu.

Lisäksi INRAe:ssä tehdään syljen, ruokatorven ja ulosteen bakteeri- ja sieni-DNA:n uuttaminen ja @Bridge-alustalla sekvensointi.

Ruoansulatuskanavan endoskopiapäivänä lapset ja/tai heidän vanhempansa täyttävät PedsQL®- ja PEESS-kyselyt.

Päätavoitteemme on arvioida virtsan, veren ja ruokatorven harjausten EDN:n korrelaatiota ruokatorven biopsioista lasketun eosinofiilisen infiltraatin kanssa. Sitten verrataan sytokiinien paneelin pitoisuutta veren ja ruokatorven biopsioissa, allergisen herkistymisprofiilia veren ja ruokatorven biopsioissa ja kohdistamatonta ruokatorven metabolomiikan kuvausta ryhmien välillä.

Toissijaisena tavoitteenamme on tutkia näiden samojen potilaiden ruokatorven, syljen ja ulosteen mikrobiotaa, jotta voidaan kuvata potilaiden ja kontrollien välisen bakteeri- ja mykologisen kasviston koostumusta, alfa- ja beeta-monimuotoisuutta sekä niiden yhteyttä patologiaan ja ehdottaa. mahdollisia vaihtoehtoisia hoitoja, joiden tarkoituksena on moduloida ruokatorven ja/tai syljen mikrobiota eosinofiilisen esofagiitin hoidossa. Ensisijaiset ja toissijaiset tulokset on kuvattu alla.