EDN og eosinofil øsofagitis (OesEDN)

Eosinofil esophagitis er en kronisk, inflammatorisk fordøjelsessygdom af immunologisk og allergisk oprindelse, sekundær til eosinofil infiltration af esophageal slimhinde, hvilket fører til esophageal dysfunktion. Det er en ny sygdom, hvis forekomst har været stigende i pædiatrien over de seneste årtier, med en estimeret årlig forekomst på 3 til 12/100.000 og en prævalens mellem 22 og 49/100.000. Det er den næsthyppigste årsag til kronisk esophagitis, efter peptisk esophagitis.

Der er kroniske symptomer (alvorlig refluks, dysfagi, fornemmelse af fødevareblokering og behov for at drikke vand under måltider for at synke), eller nogle gange akut (f.eks. pludselig fødepåvirkning under et måltid, med hypersialoré), hvilket kræver akut endoskopi. Det kan være kompliceret af esophageal fibrose, stenose eller esophageal perforation.

Diagnosen eosinofil øsofagitis er histologisk, baseret på påvisning af > 15 eosinofiler/felt (forstørrelse x 400) på mindst én esophageal biopsi. Adskillige terapier er blevet afprøvet og testet gennem årene: protonpumpehæmmere (PPI'er), udsættelsesdiæter, lokal kortikosteroidbehandling og for nylig immunterapier. For at bekræfte remission af sygdommen eller retfærdiggøre ændringer i behandlingen kræves endoskopisk reevaluering regelmæssigt (hver 8. til 12. uge efter indførelse af en ny behandling, derefter årligt under vedligeholdelsesbehandling eller tidligere i tilfælde af klinisk tilbagefald). Patientopfølgning kræver derfor adskillige fordøjelsesendoskopier, for det meste udført under generel anæstesi i pædiatri, en invasiv procedure med en potentiel risiko for komplikationer.

Identifikationen af ​​ikke-invasive biomarkører for aktiv eosinofil øsofagitis ville sætte os i stand til at foreslå en diagnostisk og opfølgningsstrategi, der er bedre tilpasset klinisk praksis og bedre tolereret af patienter.

EDN, Eosinophil-Derived Neurotoxin, er et protein, der udskilles, når eosinofiler aktiveres. Serum EDN er blevet grundigt undersøgt i atopi. Ved eosinofil øsofagitis ser det ud til at korrelere signifikant med tætheden af ​​eosinofiler på esophageal biopsier og vil derfor være højere hos patienter med aktiv eosinofil øsofagitis end hos kontroller. Nogle hold har endda foreslået afskæringsværdier for blod-EDN ved hjælp af ROC-kurver for at optimere sensitiviteten og specificiteten af ​​denne markør til diagnosticering af eosinofil esophagitis i pædiatri. Serum EDN ser ud til at falde betydeligt hos patienter under behandling.

Andre undersøgelser har fokuseret på EDN på esophageal biopsier. En undersøgelse fra 2010 vurderede fordelingen af ​​intra- og ekstracellulære EDN-aflejringer på esophageal biopsier fra patienter fulgt op for eosinofil esophagitis og i kontroller ved hjælp af en immunfluorescensteknik. EDN-farvning blev tydeligt observeret i biopsier fra alle patienter og fraværende eller meget svag hos kontrolpersoner. Konklusioner vedrørende korrelationen mellem vævs-EDN og eosinofil infiltrationstæthed er imidlertid forskellige.

De seneste data vedrører esophageal brush EDN, udført direkte under fordøjelsesendoskopi eller indirekte via et vægtet oro-esophagealt system. Luminal EDN var signifikant højere hos patienter med aktiv eosinofil esophagitis end hos patienter med eosinofil esophagitis i remission, gastroøsofageal reflukssygdom eller kontroller. Det er endda forudsigende for respons på PPI-behandling. EDN og andre endoluminale markører var prædiktive for sygdomsaktivitet, herunder udvikling af sekundær fibrose og andre komplikationer.

Urinært EDN er blevet analyseret i atopiske sygdomme, især astma og atopisk dermatitis. Det ser ud til at være forbundet med eosinofil aktivitet i disse allergiske sygdomme. Der er ingen undersøgelser af urin-EDN ved eosinofil esophagitis.

Til dato er der ikke udført undersøgelser af sammenhængen mellem de forskellige EDN-assays.

EDN virker lovende, men identifikation af andre biomarkører korreleret med eosinofil esophagitis aktivitet er en yderligere udfordring for at muliggøre skabelsen af ​​modeller, der kombinerer flere biomarkører, der forudsiger eosinofil tæthed på esophageal biopsier. Til dette formål synes mere præcis viden om den immunologiske, allergiske og metabolomiske signatur af denne sygdom uvurderlig. En undersøgelse offentliggjort i 2023 udførte en analyse af immunsystemets aktivering fra esophageal biopsier og blodprøver, samt en umålrettet metabolomisk analyse fra blodprøver. Resultaterne af denne undersøgelse tyder på, at en plasmasignatur, der er specifik for eosinofil esophagitis, kunne identificeres ud fra metabolomiske data og cytokininformation.

Endelig er mikrobiota blevet impliceret i patogenesen af ​​adskillige fordøjelses- og ekstrafordøjelses-allergiske og inflammatoriske sygdomme, såsom astma og eksem. Kun fire undersøgelser har for nylig undersøgt rollen af ​​esophageal, spyt og fækal mikrobiota hos patienter med eosinofil esophagitis. Dysbiose er blevet beskrevet med en øget esophageal mikrobiel belastning og en særlig overflod af visse arter (Haemophilus, Streptococcus) sammenlignet med kontrolpersoner, lavere spytbakteriediversitet og en lignende fækal mikrobiota hos patienter og kontroller. Ikke desto mindre er der kun få direkte beviser for at påvise indflydelsen af ​​esophageal og/eller spytmikrobiota på inflammation og sygdom.

Efterforskeren antager, at en perifer signatur af sygdommen korrelerer med det esophageale eosinofile infiltrat. Efterforskeren mener, at ikke kun urin-, serum- og endoluminale EDN-koncentrationer, men også serum- og esophageale cytokinprofiler og esophageal metabolomics korrelerer med eosinofil infiltration på esophageal biopsier og dermed korrelerer med sygdomsaktivitet hos patienter med aktiv eosinofil esophagitis. Hos patienter med eosinofil øsofagitis i remission og i kontroller forventer investigator at observere normale eller lave EDN-værdier og en anden cytokinprofil sammenlignet med patienter med aktiv eosinofil øsofagitis. Efterforskeren forventer også at observere esophageal og spytdysbiose hos patienter med aktiv eosinofil esophagitis.

Med hensyn til kliniske udsigter håber efterforskeren, at disse resultater vil muliggøre udviklingen af ​​ikke-invasive biomarkørpaneler, der forudsiger sygdomsaktivitet, og dermed begrænse antallet af fordøjelsesendoskopier, der kræves for at overvåge patienter.

Undersøgelsen vil blive udført på en kohorte af pædiatriske patienter fulgt i pædiatrisk ernærings- og gastroenterologisk afdeling på Trousseau-APHP hospitalet og indlagt til øvre GI endoskopi, enten som en del af et mistænkt tilfælde af eosinofil øsofagitis eller under opfølgning af et tidligere kendt tilfælde af eosinofil esophagitis. Der vil blive indhentet skriftligt samtykke fra forældre og fra børn i henhold til deres forståelsesniveau.

Blodprøve på kateteret påkrævet til generel anæstesi, en ustimuleret spytopsamling, per-endoskopisk esophageal børstning og 4 yderligere esophageal biopsier vil blive taget under fordøjelsesendoskopi. En urinprøve og en afføringsprøve vil også blive indsamlet under indlæggelse til fordøjelsesendoskopi.

Afhængigt af de histologiske resultater og den eosinofile tæthed på biopsierne, som svarer til guldstandarden for at stille diagnosen og vurdere aktiviteten af ​​eosinofil øsofagitis, vil forsøgspersoner blive klassificeret enten i gruppen "patient med aktiv eosinofil øsofagitis", "patienten". med eosinofil øsofagitis i remission"-gruppen, eller gruppen "patient uden eosinofil esophagitis", hvilket vil svare til en komparatorkontrolgruppe. Denne gruppe vil derfor blive defineret a posteriori.

Urin-, serum- og endoluminal esophageal børstning EDN-værdier vil blive målt ved ELISA eller qPCR ved INRAe eller Pitié-Salpêtrière. Totale og specifikke IgE-, Phadiatop®-, tryptase-, CBC- og eosinofilaktiveringstests vil blive udført på Groupe Hospitalier de l'Est Parisiens biokemi-allergologiske laboratorium. Hvis Phadiatop®-testen er positiv, vil der blive udført yderligere test på det allerede opsamlede blod for at bestemme niveauet af pneumoallergen-specifikt IgE. Analyse af cytokinprofiler på blodprøver og esophageal biopsier samt ikke-målrettede metabolomiske analyser vil blive udført på INRAe i en anden fase, når alle prøver er taget.

Derudover vil der blive udført ekstraktioner af spyt-, spiserørs- og fækalt bakterie- og svampe-DNA ved INRAe og sekventering på @Bridge-platformen.

På dagen for fordøjelsesendoskopien vil børn og/eller deres forældre udfylde PedsQL®- og PEESS-spørgeskemaerne.

Vores hovedformål er at evaluere korrelationen af ​​EDN i urin, blod og esophageal børstning med det eosinofile infiltrat, der tælles på esophageal biopsier. Derefter vil koncentrationen af ​​et panel af cytokiner i blod- og spiserørsbiopsier, den allergiske sensibiliseringsprofil i blod- og spiserørsbiopsier og en ikke-målrettet beskrivelse af esophageal metabolomik blive sammenlignet mellem grupper.

Vores sekundære mål er at studere spiserørs-, spyt- og fækal mikrobiota hos de samme patienter for at beskrive sammensætningen, alfa- og beta-diversiteten af ​​bakteriel og mykologisk flora mellem patienter og kontroller, samt deres sammenhæng med patologi, og at foreslå mulige alternative terapier rettet mod at modulere esophageal og/eller spytmikrobiota i behandlingen af ​​eosinofil esophagitis. Primære og sekundære resultater er beskrevet nedenfor.