EDN a eozinofilní ezofagitida (OesEDN)

Eozinofilní ezofagitida je chronické, zánětlivé trávicí onemocnění imunologického a alergického původu, sekundární k eozinofilní infiltraci sliznice jícnu vedoucí k dysfunkci jícnu. Jde o nově se objevující onemocnění, jehož incidence v posledních desetiletích v pediatrii stoupá, s odhadovanou roční incidencí 3 až 12/100 000 a prevalencí mezi 22 a 49/100 000. Je to druhá nejčastější příčina chronické ezofagitidy, hned po peptické ezofagitidě.

Existují chronické příznaky (těžký reflux, dysfagie, pocit blokády potravy a potřeba pít vodu během jídla k polykání), nebo někdy akutně (např. náhlé zachycení potravy během jídla s hypersialorrheou), vyžadující nouzovou endoskopii. Může být komplikován fibrózou jícnu, stenózou nebo perforací jícnu.

Diagnóza eozinofilní ezofagitidy je histologická, založená na průkazu > 15 eozinofilů/pole (zvětšení x 400) na alespoň jedné biopsii jícnu. V průběhu let bylo vyzkoušeno a testováno několik terapií: inhibitory protonové pumpy (PPI), vystěhovací diety, lokální kortikosteroidní terapie a v poslední době imunoterapie. K potvrzení remise onemocnění nebo zdůvodnění změn v léčbě je pravidelně nutné endoskopické přehodnocení (každých 8 až 12 týdnů po zavedení nové léčby, poté každoročně během udržovací léčby nebo dříve v případě klinického relapsu). Sledování pacienta proto vyžaduje četné digestivní endoskopie, většinou prováděné v pediatrii v celkové anestezii, což je invazivní výkon s potenciálním rizikem komplikací.

Identifikace neinvazivních biomarkerů aktivní eozinofilní ezofagitidy by nám umožnila navrhnout diagnostickou a sledovací strategii lépe přizpůsobenou klinické praxi a lépe tolerovanou pacienty.

EDN, neurotoxin odvozený od eosinofilů, je protein vylučovaný při aktivaci eozinofilů. Sérum EDN bylo rozsáhle studováno u atopie. U eozinofilní ezofagitidy se zdá, že významně koreluje s denzitou eozinofilů na biopsiích jícnu, a proto by byl vyšší u pacientů s aktivní eozinofilní ezofagitidou než u kontrol. Některé týmy dokonce navrhly hraniční hodnoty pro krevní EDN pomocí ROC křivek pro optimalizaci senzitivity a specificity tohoto markeru pro diagnostiku eozinofilní ezofagitidy v pediatrii. Zdá se, že EDN v séru se u léčených pacientů významně snižuje.

Jiné studie se zaměřily na EDN na biopsiích jícnu. Studie z roku 2010 hodnotila distribuci intra- a extracelulárních depozit EDN na biopsiích jícnu od pacientů sledovaných pro eozinofilní ezofagitidu a u kontrol pomocí imunofluorescenční techniky. Barvení EDN bylo jasně pozorováno v biopsiích od všech pacientů a chybějící nebo velmi slabé u kontrolních subjektů. Závěry týkající se korelace mezi tkáňovou EDN a hustotou eozinofilní infiltrace se však liší.

Nejnovější údaje se týkají EDN jícnového kartáčku, prováděné přímo během digestivní endoskopie nebo nepřímo přes vážený oro-jícnový systém. Luminální EDN byla signifikantně vyšší u pacientů s aktivní eozinofilní ezofagitidou než u pacientů s eozinofilní ezofagitidou v remisi, s gastroezofageálním refluxem nebo u kontrol. Je dokonce prediktivní pro odpověď na terapii PPI. EDN a další endoluminální markery byly prediktivní pro aktivitu onemocnění, včetně rozvoje sekundární fibrózy a dalších komplikací.

EDN v moči byla analyzována u atopických onemocnění, zejména astmatu a atopické dermatitidy. Zdá se, že je spojena s aktivitou eozinofilů u těchto alergických onemocnění. Neexistují žádné studie močové EDN u eozinofilní ezofagitidy.

Dosud nebyly provedeny žádné studie o korelaci mezi různými testy EDN.

EDN se jeví jako slibná, ale identifikace dalších biomarkerů korelujících s aktivitou eozinofilní ezofagitidy je další výzvou umožňující vytvoření modelů kombinující několik biomarkerů predikujících eozinofilní hustotu na biopsiích jícnu. Za tímto účelem se přesnější znalost imunologického, alergologického a metabolomického podpisu tohoto onemocnění jeví jako neocenitelná. Studie publikovaná v roce 2023 provedla analýzu aktivace imunitního systému z biopsií jícnu a vzorků krve a také necílenou metabolomickou analýzu ze vzorků krve. Výsledky této studie naznačují, že z metabolomických dat a informací o cytokinech lze identifikovat plazmatický podpis specifický pro eozinofilní ezofagitidu.

Konečně, mikrobiota se podílí na patogenezi několika zažívacích a extradigestivních alergických a zánětlivých onemocnění, jako je astma a ekzém. Pouze čtyři studie nedávno zkoumaly roli jícnové, slinné a fekální mikrobioty u pacientů s eozinofilní ezofagitidou. Byla popsána dysbióza se zvýšenou mikrobiální zátěží jícnu a zvláštním množstvím určitých druhů (Haemophilus, Streptococcus) ve srovnání s kontrolními subjekty, nižší bakteriální diverzitou slin a podobnou fekální mikrobiotou u pacientů a kontrol. Nicméně existuje jen málo přímých důkazů pro prokázání vlivu jícnové a/nebo slinné mikrobioty na zánět a onemocnění.

Výzkumník předpokládá, že periferní signatura onemocnění koreluje s jícnovým eozinofilním infiltrátem. Výzkumník se domnívá, že nejen koncentrace EDN v moči, v séru a v endoluminálním traktu, ale také profily cytokinů v séru a jícnu a metabolomika jícnu korelují s eozinofilní infiltrací na biopsiích jícnu, a tedy korelují s aktivitou onemocnění u pacientů s aktivní eozinofilní ezofagitidou. U pacientů s eozinofilní ezofagitidou v remisi au kontrol zkoušející očekává pozorování normálních nebo nízkých hodnot EDN a odlišný profil cytokinů ve srovnání s pacienty s aktivní eozinofilní ezofagitidou. Výzkumník také očekává, že bude pozorovat dysbiózu jícnu a slin u pacientů s aktivní eozinofilní ezofagitidou.

Pokud jde o klinické vyhlídky, výzkumník doufá, že tyto výsledky umožní vývoj panelů neinvazivních biomarkerů predikujících aktivitu onemocnění, a tím omezí počet digestivních endoskopií potřebných k monitorování pacientů.

Studie bude provedena na souboru dětských pacientů sledovaných na dětském nutričním a gastroenterologickém oddělení nemocnice Trousseau-APHP a hospitalizovaných pro endoskopii horního GI traktu, buď jako součást suspektního případu eozinofilní ezofagitidy, nebo při sledování dříve známý případ eozinofilní ezofagitidy. Písemný souhlas bude získán od rodičů a od dětí podle jejich úrovně porozumění.

Během digestivní endoskopie bude odebrán vzorek krve na katétru potřebný pro celkovou anestezii, nestimulovaný odběr slin, perendoskopické čištění jícnu a 4 další biopsie jícnu. Během hospitalizace bude také odebrán vzorek moči a vzorek stolice na digestivní endoskopii.

V závislosti na histologických výsledcích a eozinofilní denzitě na biopsiích, která odpovídá zlatému standardu pro stanovení diagnózy a hodnocení aktivity eozinofilní ezofagitidy, budou subjekty zařazeny buď do skupiny „pacient s aktivní eozinofilní ezofagitidou“, „pacient“. s eozinofilní ezofagitidou v remisi" nebo skupina "pacient bez eozinofilní ezofagitidy", která bude odpovídat srovnávací kontrolní skupině. Tato skupina bude proto definována a posteriori.

Hodnoty EDN kartáčku z moči, séra a endoluminálního jícnu budou měřeny pomocí ELISA nebo qPCR na INRAe nebo Pitié-Salpêtrière. V biochemicko-alergologické laboratoři Groupe Hospitalier de l'Est Parisien budou provedeny testy celkového a specifického IgE, Phadiatop®, tryptázy, CBC a eozinofilů. Pokud je test Phadiatop® pozitivní, budou provedeny další testy na již odebrané krvi, aby se určila hladina pneumoalergen-specifického IgE. Analýza cytokinových profilů na krevních vzorcích a biopsiích jícnu, stejně jako necílené metabolomické analýzy, budou v INRAe prováděny ve druhé fázi, jakmile budou odebrány všechny vzorky.

Kromě toho budou na INRAe prováděny extrakce slinné, ezofageální a fekální bakteriální a plísňové DNA a sekvenování na platformě @Bridge.

V den digestivní endoskopie vyplní děti a/nebo jejich rodiče dotazníky PedsQL® a PEESS.

Naším hlavním cílem je vyhodnotit korelaci EDN v moči, krvi a jícnových kartáčcích s eozinofilním infiltrátem počítaným na biopsiích jícnu. Poté bude mezi skupinami porovnána koncentrace panelu cytokinů v biopsiích krve a jícnu, profil alergické senzibilizace v biopsiích krve a jícnu a necílený popis metabolomiky jícnu.

Naším sekundárním cílem je studovat jícnovou, slinnou a fekální mikroflóru u těchto stejných pacientů, abychom popsali složení, alfa a beta-diverzitu bakteriální a mykologické flóry mezi pacienty a kontrolami, stejně jako jejich souvislost s patologií, a navrhli možné alternativní terapie zaměřené na modulaci jícnové a/nebo slinné mikroflóry při léčbě eozinofilní ezofagitidy. Primární a sekundární výsledky jsou podrobně popsány níže.