ЭДН и эозинофильный эзофагит (OesEDN)

Эозинофильный эзофагит — хроническое воспалительное заболевание пищеварительной системы иммунологического и аллергического происхождения, возникающее вследствие эозинофильной инфильтрации слизистой оболочки пищевода и приводящее к дисфункции пищевода. Это новое заболевание, заболеваемость которым в педиатрии в последние десятилетия растет: расчетная годовая заболеваемость составляет от 3 до 12 на 100 000, а распространенность - от 22 до 49 на 100 000. Это вторая по распространенности причина хронического эзофагита после пептического эзофагита.

Существуют хронические симптомы (тяжелый рефлюкс, дисфагия, ощущение закупорки пищи и необходимость пить воду во время еды, чтобы проглотить), а иногда и острые (например, внезапный застревание пищи во время еды с гиперсиалореей), требующий экстренной эндоскопии. Оно может осложняться фиброзом пищевода, стенозом или перфорацией пищевода.

Диагноз эозинофильного эзофагита ставится гистологически на основании выявления > 15 эозинофилов в поле зрения (увеличение х 400) по крайней мере в одной биопсии пищевода. За прошедшие годы было опробовано и апробировано несколько методов лечения: ингибиторы протонной помпы (ИПП), выселяющие диеты, местная кортикостероидная терапия и, в последнее время, иммунотерапия. Для подтверждения ремиссии заболевания или обоснования изменений в лечении регулярно требуется эндоскопическая повторная оценка (каждые 8–12 нед после введения нового метода лечения, затем ежегодно во время поддерживающего лечения или раньше в случае клинического рецидива). Поэтому последующее наблюдение за пациентами требует многочисленных пищеварительных эндоскопий, которые в педиатрии в основном выполняются под общей анестезией — инвазивной процедуры с потенциальным риском осложнений.

Идентификация неинвазивных биомаркеров активного эозинофильного эзофагита позволит нам предложить стратегию диагностики и последующего наблюдения, лучше адаптированную к клинической практике и лучше переносимую пациентами.

EDN, нейротоксин, полученный из эозинофилов, представляет собой белок, секретируемый при активации эозинофилов. Сывороточная EDN широко изучалась при атопии. При эозинофильном эзофагите она, по-видимому, значительно коррелирует с плотностью эозинофилов в биоптатах пищевода и поэтому будет выше у пациентов с активным эозинофильным эзофагитом, чем в контрольной группе. Некоторые группы даже предложили пороговые значения EDN в крови, используя кривые ROC, чтобы оптимизировать чувствительность и специфичность этого маркера для диагностики эозинофильного эзофагита в педиатрии. Сывороточная EDN, по-видимому, значительно снижается у пациентов, находящихся на лечении.

Другие исследования были сосредоточены на EDN при биопсии пищевода. В исследовании 2010 года с использованием метода иммунофлуоресценции оценивалось распределение внутри- и внеклеточных отложений EDN в биоптатах пищевода у пациентов, находящихся под наблюдением по поводу эозинофильного эзофагита, и в контрольной группе. Окрашивание EDN четко наблюдалось в биоптатах всех пациентов и отсутствовало или было очень слабым у контрольных субъектов. Однако выводы о корреляции между тканевой ЭДН и плотностью эозинофильной инфильтрации различаются.

Самые последние данные касаются ЭДН пищеводной щетки, выполняемой непосредственно во время пищеварительной эндоскопии или опосредованно через взвешенную оро-пищеводную систему. Люминальная ЭДН была значительно выше у пациентов с активным эозинофильным эзофагитом, чем у пациентов с эозинофильным эзофагитом в стадии ремиссии, гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью или контрольной группой. Это даже позволяет прогнозировать ответ на терапию ИПП. EDN и другие внутрипросветные маркеры были предикторами активности заболевания, включая развитие вторичного фиброза и других осложнений.

Мочевой EDN анализировался при атопических заболеваниях, особенно астме и атопическом дерматите. По-видимому, это связано с активностью эозинофилов при этих аллергических заболеваниях. Исследований применения ЭДН в моче при эозинофильном эзофагите не проводилось.

На сегодняшний день не проводилось исследований корреляции между различными анализами EDN.

EDN кажется многообещающим, но идентификация других биомаркеров, коррелирующих с активностью эозинофильного эзофагита, является дополнительной проблемой, позволяющей создать модели, сочетающие несколько биомаркеров, прогнозирующих плотность эозинофилов в биопсиях пищевода. В связи с этим более точное знание иммунологических, аллергологических и метаболомических особенностей этого заболевания кажется неоценимым. В исследовании, опубликованном в 2023 году, был проведен анализ активации иммунной системы на основе биопсии пищевода и образцов крови, а также нецелевой метаболомический анализ образцов крови. Результаты этого исследования позволяют предположить, что плазменная характеристика, специфичная для эозинофильного эзофагита, может быть идентифицирована на основе метаболомических данных и информации о цитокинах.

Наконец, микробиота вовлечена в патогенез нескольких пищеварительных и внепищеварительных аллергических и воспалительных заболеваний, таких как астма и экзема. Только четыре исследования недавно изучали роль микробиоты пищевода, слюны и кала у пациентов с эозинофильным эзофагитом. Описан дисбиоз с повышенной микробной нагрузкой пищевода и особым обилием определенных видов (Haemophilus, Streptococcus) по сравнению с контрольной группой, меньшим бактериальным разнообразием слюны и сходной фекальной микробиотой у пациентов и контрольной группы. Тем не менее, имеется мало прямых доказательств влияния микробиоты пищевода и/или слюны на воспаление и заболевание.

Исследователи предполагают, что периферический признак заболевания коррелирует с эозинофильным инфильтратом пищевода. Исследователи полагают, что не только концентрации EDN в моче, сыворотке и внутрипросветном пространстве, но также профили цитокинов в сыворотке и пищеводе, а также метаболомика пищевода коррелируют с эозинофильной инфильтрацией в биоптатах пищевода и, таким образом, коррелируют с активностью заболевания у пациентов с активным эозинофильным эзофагитом. У пациентов с эозинофильным эзофагитом в стадии ремиссии и в контрольной группе исследователь ожидает наблюдать нормальные или низкие значения EDN и другой профиль цитокинов по сравнению с пациентами с активным эозинофильным эзофагитом. Исследователи также ожидают наблюдения дисбактериоза пищевода и слюны у больных активным эозинофильным эзофагитом.

Что касается клинических перспектив, исследователь надеется, что эти результаты позволят разработать неинвазивные панели биомаркеров, позволяющие прогнозировать активность заболевания, и, таким образом, ограничить количество пищеварительных эндоскопий, необходимых для наблюдения за пациентами.

Исследование будет проводиться на группе педиатрических пациентов, находящихся под наблюдением в отделении детского питания и гастроэнтерологии больницы Труссо-APHP и госпитализированных для эндоскопии верхних отделов желудочно-кишечного тракта либо при подозрении на эозинофильный эзофагит, либо во время наблюдения за ранее известный случай эозинофильного эзофагита. Письменное согласие будет получено от родителей и от детей в соответствии с уровнем их понимания.

Во время пищеварительной эндоскопии будут взяты образцы крови из катетера, необходимые для общей анестезии, нестимулированного сбора слюны, перэндоскопической чистки пищевода и 4 дополнительных биопсий пищевода. Образцы мочи и стула также будут собраны во время госпитализации для эндоскопии пищеварительной системы.

В зависимости от гистологических результатов и плотности эозинофилов в биоптатах, что соответствует золотому стандарту для постановки диагноза и оценки активности эозинофильного эзофагита, субъекты будут классифицированы либо в группу «пациентов с активным эозинофильным эзофагитом», либо в группу «пациентов с активным эозинофильным эзофагитом». с эозинофильным эзофагитом в стадии ремиссии», или группу «пациент без эозинофильного эзофагита», что будет соответствовать контрольной группе сравнения. Поэтому эта группа будет определена апостериорно.

Значения EDN в моче, сыворотке и внутрипросветном отделе пищевода будут измеряться с помощью ELISA или qPCR в INRAe или Pitié-Salpêtrière. Тесты на общий и специфический IgE, Phadiatop®, триптазу, общий анализ крови и активацию эозинофилов будут проводиться в биохимически-аллергологической лаборатории Groupe Hospitalier de l'Est Parisien. В случае положительного результата теста Фадиатоп® будут проведены дополнительные исследования уже собранной крови для определения уровня пневмоаллергенспецифического IgE. Анализ профилей цитокинов в образцах крови и биопсиях пищевода, а также нецелевые метаболомные анализы будут проводиться в INRAe на втором этапе, после того как все образцы будут взяты.

Кроме того, в INRAe будет проводиться экстракция ДНК бактерий и грибов из слюны, пищевода и фекалий, а секвенирование — на платформе @Bridge.

В день пищеварительной эндоскопии дети и/или их родители заполняют анкеты PedsQL® и PEESS.

Наша основная цель - оценить корреляцию EDN в моче, крови и чистке пищевода с эозинофильным инфильтратом, подсчитанным при биопсии пищевода. Затем между группами будут сравниваться концентрация панели цитокинов в крови и биоптатах пищевода, профиль аллергической сенсибилизации в крови и биоптатах пищевода, а также нецелевое описание метаболомики пищевода.

Нашей вторичной целью является изучение микробиоты пищевода, слюны и кала у этих же пациентов, чтобы описать состав, альфа- и бета-разнообразие бактериальной и микологической флоры между пациентами и контрольной группой, а также их связь с патологией, а также предложить возможные альтернативные методы лечения, направленные на модуляцию микробиоты пищевода и/или слюны при лечении эозинофильного эзофагита. Ниже подробно описаны первичные и вторичные результаты.