EDN i eozynofilowe zapalenie przełyku (OesEDN)

Eozynofilowe zapalenie przełyku jest przewlekłą, zapalną chorobą przewodu pokarmowego o podłożu immunologicznym i alergicznym, wtórną do nacieku eozynofilów w błonie śluzowej przełyku, prowadzącego do jego dysfunkcji. Jest to nowo powstająca choroba, której częstość występowania w pediatrii rośnie w ciągu ostatnich dziesięcioleci, z szacunkową częstością roczną wynoszącą od 3 do 12/100 000 i częstością występowania od 22 do 49/100 000. Jest drugą najczęstszą przyczyną przewlekłego zapalenia przełyku, po trawiennym zapaleniu przełyku.

Występują objawy przewlekłe (silny refluks, dysfagia, uczucie niedrożności pokarmu i konieczność picia wody podczas posiłków w celu przełknięcia) lub czasami ostre (np. nagłe zatrzymanie pokarmu w trakcie posiłku, z nadmiernym wydzielaniem śliny), wymagające pilnej endoskopii. Może to być powikłane zwłóknieniem przełyku, zwężeniem lub perforacją przełyku.

Rozpoznanie eozynofilowego zapalenia przełyku opiera się na badaniu histologicznym, na podstawie wykazania obecności > 15 eozynofili w polu (powiększenie x 400) w co najmniej jednej biopsji przełyku. Na przestrzeni lat wypróbowano i przetestowano kilka terapii: inhibitory pompy protonowej (PPI), diety eksmisyjne, miejscową terapię kortykosteroidami, a ostatnio immunoterapie. Aby potwierdzić remisję choroby lub uzasadnić zmianę leczenia, wymagana jest regularna ponowna ocena endoskopowa (co 8–12 tygodni po wprowadzeniu nowego leczenia, następnie co roku w trakcie leczenia podtrzymującego lub wcześniej w przypadku nawrotu klinicznego). Dlatego też obserwacja pacjenta wymaga licznych endoskopii przewodu pokarmowego, w pediatrii wykonywanych najczęściej w znieczuleniu ogólnym, co jest zabiegiem inwazyjnym i obarczonym potencjalnym ryzykiem powikłań.

Identyfikacja nieinwazyjnych biomarkerów aktywnego eozynofilowego zapalenia przełyku umożliwiłaby zaproponowanie strategii diagnostycznej i kontrolnej lepiej dostosowanej do praktyki klinicznej i lepiej tolerowanej przez pacjentów.

EDN, neurotoksyna pochodząca z eozynofilów, jest białkiem wydzielanym podczas aktywacji eozynofilów. EDN w surowicy był szeroko badany w leczeniu atopii. W przypadku eozynofilowego zapalenia przełyku wydaje się, że koreluje on istotnie z gęstością eozynofilów w biopsjach przełyku i dlatego będzie wyższy u pacjentów z aktywnym eozynofilowym zapaleniem przełyku niż w grupie kontrolnej. Niektóre zespoły zaproponowały nawet wartości graniczne EDN we krwi przy użyciu krzywych ROC, aby zoptymalizować czułość i swoistość tego markera w diagnostyce eozynofilowego zapalenia przełyku u dzieci. Wydaje się, że EDN w surowicy znacznie się zmniejsza u pacjentów poddawanych leczeniu.

Inne badania skupiały się na EDN w biopsjach przełyku. W badaniu z 2010 roku oceniano rozmieszczenie wewnątrz- i zewnątrzkomórkowych złogów EDN w biopsjach przełyku pobranych od pacjentów kontrolowanych z powodu eozynofilowego zapalenia przełyku oraz od osób kontrolnych, przy użyciu techniki immunofluorescencyjnej. Barwienie EDN było wyraźnie obserwowane w biopsjach wszystkich pacjentów, a nie występowało lub było bardzo słabe u osób kontrolnych. Wnioski dotyczące korelacji pomiędzy tkankowym EDN a gęstością nacieku eozynofilowego są jednak odmienne.

Najnowsze dane dotyczą EDN szczoteczką przełyku, wykonywanej bezpośrednio podczas endoskopii przewodu pokarmowego lub pośrednio poprzez obciążony układ ustno-przełykowy. Luminalne EDN było istotnie wyższe u pacjentów z aktywnym eozynofilowym zapaleniem przełyku niż u pacjentów z eozynofilowym zapaleniem przełyku w remisji, z chorobą refluksową przełyku lub u pacjentów z grupy kontrolnej. Pozwala nawet przewidzieć odpowiedź na terapię PPI. EDN i inne markery endoluminalne pozwalały przewidzieć aktywność choroby, w tym rozwój wtórnego zwłóknienia i inne powikłania.

EDN moczu analizowano w chorobach atopowych, zwłaszcza astmie i atopowym zapaleniu skóry. Wydaje się, że ma to związek z aktywnością eozynofilów w tych chorobach alergicznych. Nie przeprowadzono badań dotyczących stosowania EDN w moczu w eozynofilowym zapaleniu przełyku.

Do chwili obecnej nie przeprowadzono żadnych badań dotyczących korelacji pomiędzy różnymi testami EDN.

EDN wydaje się obiecująca, ale identyfikacja innych biomarkerów skorelowanych z aktywnością eozynofilowego zapalenia przełyku stanowi dodatkowe wyzwanie umożliwiające stworzenie modeli łączących kilka biomarkerów predykcyjnych gęstości eozynofilów w biopsjach przełyku. W tym celu bezcenna wydaje się bardziej precyzyjna wiedza na temat sygnatury immunologicznej, alergologicznej i metabolomicznej tej choroby. W badaniu opublikowanym w 2023 r. przeprowadzono analizę aktywacji układu odpornościowego na podstawie biopsji przełyku i próbek krwi, a także nieukierunkowaną analizę metabolomiczną próbek krwi. Wyniki tego badania sugerują, że na podstawie danych metabolomicznych i informacji o cytokinach można zidentyfikować sygnaturę osocza specyficzną dla eozynofilowego zapalenia przełyku.

Wreszcie, mikroflorę powiązano z patogenezą kilku chorób alergicznych i zapalnych układu pokarmowego i pozajelitowego, takich jak astma i egzema. Tylko w czterech badaniach oceniano ostatnio rolę mikroflory przełyku, śliny i kału u pacjentów z eozynofilowym zapaleniem przełyku. Opisano dysbiozę ze zwiększonym obciążeniem mikrobiologicznym przełyku i szczególną liczebnością niektórych gatunków (Haemophilus, Streptococcus) w porównaniu z osobami z grupy kontrolnej, mniejszą różnorodnością bakterii w ślinie i podobną mikroflorą kałową u pacjentów i grupy kontrolnej. Niemniej jednak niewiele jest bezpośrednich dowodów potwierdzających wpływ mikroflory przełyku i/lub śliny na stany zapalne i choroby.

Badacz stawia hipotezę, że obwodowy objaw choroby koreluje z naciekiem eozynofilów w przełyku. Badacz uważa, że ​​nie tylko stężenia EDN w moczu, surowicy i wewnątrz światła przełyku, ale także profile cytokin w surowicy i przełyku oraz metabolomika przełyku korelują z naciekiem eozynofilów w biopsjach przełyku, a tym samym korelują z aktywnością choroby u pacjentów z aktywnym eozynofilowym zapaleniem przełyku. U pacjentów z eozynofilowym zapaleniem przełyku w remisji i w grupie kontrolnej badacz spodziewa się zaobserwowania prawidłowych lub niskich wartości EDN i innego profilu cytokin w porównaniu z pacjentami z aktywnym eozynofilowym zapaleniem przełyku. Badacz spodziewa się także zaobserwowania dysbiozy przełyku i śliny u pacjentów z aktywnym eozynofilowym zapaleniem przełyku.

Jeśli chodzi o perspektywy kliniczne, badacz ma nadzieję, że wyniki te umożliwią opracowanie nieinwazyjnych paneli biomarkerów umożliwiających przewidywanie aktywności choroby, a tym samym ograniczą liczbę endoskopii przewodu pokarmowego wymaganych do monitorowania pacjentów.

Badanie zostanie przeprowadzone na kohorcie pacjentów pediatrycznych, leczonych na oddziale żywienia i gastroenterologii dziecięcej szpitala Trousseau-APHP i hospitalizowanych w celu wykonania endoskopii górnego odcinka przewodu pokarmowego w związku z podejrzeniem eozynofilowego zapalenia przełyku lub w trakcie obserwacji znany wcześniej przypadek eozynofilowego zapalenia przełyku. Pisemna zgoda zostanie uzyskana od rodziców i od dzieci, w zależności od ich poziomu zrozumienia.

Próbka krwi z cewnika wymagana do znieczulenia ogólnego, pobrania niestymulowanej śliny, okołoendoskopowego szczotkowania przełyku i 4 dodatkowych biopsji przełyku zostanie pobrana podczas endoskopii przewodu pokarmowego. Podczas hospitalizacji w celu wykonania endoskopii przewodu pokarmowego zostanie pobrana również próbka moczu i kału.

W zależności od wyników histologicznych i gęstości eozynofilów w biopsjach, co odpowiada złotemu standardowi w diagnostyce i ocenie aktywności eozynofilowego zapalenia przełyku, pacjenci będą klasyfikowani albo do grupy „pacjentów z czynnym eozynofilowym zapaleniem przełyku”, „pacjentów z eozynofilowym zapaleniem przełyku w remisji” lub grupą „pacjentów bez eozynofilowego zapalenia przełyku”, co będzie odpowiadać porównawczej grupie kontrolnej. Grupa ta zostanie zatem zdefiniowana a posteriori.

Wartości EDN szczotkowania moczu, surowicy i przełyku będą mierzone za pomocą testu ELISA lub qPCR w INRAe lub Pitié-Salpêtrière. Testy całkowitego i swoistego IgE, Phadiatop®, tryptazy, CBC i aktywacji eozynofili zostaną wykonane w laboratorium biochemicznym i alergologicznym Groupe Hospitalier de l'Est Parisien. Jeżeli wynik testu Phadiatop® będzie pozytywny, na już pobranej krwi zostaną przeprowadzone dodatkowe badania w celu określenia poziomu IgE swoistego dla pneumoalergenu. Analiza profili cytokin w próbkach krwi i biopsjach przełyku, a także nieukierunkowane analizy metabolomiczne zostaną przeprowadzone w INRAe w drugiej fazie, po pobraniu wszystkich próbek.

Ponadto w INRAe zostaną przeprowadzone ekstrakcje bakteryjnego i grzybiczego DNA ze śliny, przełyku i kału, a sekwencjonowanie na platformie @Bridge.

W dniu endoskopii przewodu pokarmowego dzieci i/lub ich rodzice wypełniają kwestionariusze PedsQL® i PEESS.

Naszym głównym celem jest ocena korelacji EDN w moczu, krwi i wymazach przełyku z naciekiem eozynofilowym zliczonym w biopsjach przełyku. Następnie pomiędzy grupami porównane zostanie stężenie panelu cytokin we krwi i biopsjach przełyku, profil uczulenia alergicznego we krwi i biopsjach przełyku oraz nieukierunkowany opis metabolomiki przełyku.

Naszym drugorzędnym celem jest zbadanie mikroflory przełyku, śliny i kału u tych samych pacjentów w celu opisania składu, różnorodności alfa i beta flory bakteryjnej i mikologicznej pomiędzy pacjentami i grupą kontrolną, a także ich związku z patologią, a także zaproponowanie możliwych alternatywnych terapii mających na celu modulację mikroflory przełyku i/lub śliny w leczeniu eozynofilowego zapalenia przełyku. Wyniki pierwotne i wtórne opisano szczegółowo poniżej.