Salaisuuden stimuloidun haiman erityksen vaikutus ctDNA: n ilmentymiseen potilailla, joilla on haiman kanavan adenokarsinooma: biomarkkereiden rooli haiman ductaalisen adenokarsinooman ennusteen määrittämisessä

Tausta haiman kanavan adenokarsinooma (PDAC) on aggressiivinen onkologinen sairaus, jolla on huono ennuste ja alhainen eloonjäämisaste. Biologisen luonteensa vuoksi on yleensä haastavaa suorittaa varhainen diagnostiikka ja siksi saavuttaa onnistuneet terapeuttiset tulokset.

Äskettäin monien tutkimusten ja tutkimusten tavoitteena on maailmanlaajuisesti ymmärtää kasvainbiologian paremmin ja tarjota uusi diagnostiikkatyökalu, sairauksien seuranta ja kohdennettu terapia. Yksi kiinnostavista aiheista on niin kutsuttuja nestemäisiä biopsioita.

Biomarkkereiden, kuten miRNA: n, tuumorin suppressorigeenien tai aminohappojen eristäminen näistä biopsioista, niiden analyysi, kvantifiointi ja sisällyttäminen kliiniseen onkologiaan edustaa monimutkaista kysymystä, jossa lisätutkimuksia vaaditaan erittäin hyvin. Koehenkilöt, materiaalit, menetelmät Kriittinen ennakkoedellytys biomarkkerianalyysille on riittävä määrä geneettistä tietoa. Tutkimuksessamme analysoidaan laskimonsisäisen erillisten antamisen vaikutusta ctDNA: n vapautumiseen potilailla, joilla on PDAC. PDAC -potilailla on tieteellisesti todistettu yli 90% KRAS -mutaatioprosentti PDAC -potilailla, joten potilaat, joilla on positiivinen KRAS -mutaatio perifeerisessä veriplasmassa ja jotka on suunniteltu kirurgiseen terapiaan, sisällytetään tutkimukseen.

PDAC -diagnoosilla 36 potilaan perifeerinen veriplasma kerätään sitten tietyillä väliajoin leikkauksen kahden ensimmäisen tunnin aikana. CTDNA: n plasmaiset tasot näytteissä määritetään. Standardoitu biomarkkereiden paneeli suunnitellaan ja testataan potilailla, joilla on PDAC ennen leikkausta ja tietyillä aikaväleillä leikkauksen jälkeen. Tulokset analysoidaan korrelaatiossa minimaalisen jäännössairauden, eloonjäämisnopeuden ja muiden indikaattorien kanssa taudin ennusteen määrittämiseksi. Tilastoarviointi tehdään yhteistyössä bioinformatiikan ja lääketieteellisten tilastojen asiantuntijoiden kanssa.

Johdanto:

Haiman kanavan adenokarsinooma (PDAC) on vakavimpien ja aggressiivisimpien pahanlaatuisten sairauksien kanssa, joilla on epäsuotuisa ennuste ja korkea kuolleisuus [1,2]. Viiden vuoden eloonjääminen PDAC-potilailla on 10 % ja kymmenen vuoden eloonjääminen on 6 % [3]. Tšekin tasavallan terveystietojen ja tilastojen instituutin mukaan PDAC: n esiintyvyys Tšekissä on 21,9/100000 asukasta, esiintyvyys on 23,2/100000 asukasta. Systeemisen kemoterapian riittämättömän vasteen lisäksi tämä tilastot vaikuttavat merkittävästi myös taudin varhaisen havaitsemisen vaikeuteen sen usein oireettoman ajanjakson vuoksi, kun taas hoitomenetelmät voivat olla merkittävästi rajoitettu diagnoosin aikaan. Kirurgisen hoidon indikaatio mahdollisesti parantavana menetelmänä riippuu selvästi taudin vakiintuneesta laajuudesta [4]. Tällä hetkellä maailmanlaajuinen tarkkailemerkki on seerumin Ca19-9-taso, myös suhteessa preoperatiivisen ja postoperatiivisen ennusteen määrittämiseen [5]. PDAC: n riittävän herkkyyden ja spesifisyyden puuttumisen vuoksi Ca19-9: tä ei kuitenkaan voida luokitella erityiseksi markkeriksi, jolla on riittävä ennustava arvo [6]. Erilaisissa biologisissa materiaaleissa (veri, virtsa, ulosteet, sylki, sappi, haimamehu jne.) Seulontaa, varhaista diagnoosia, hoito- ja ennustetta varten on ehdotettu yli kolmesataa markkeria (veri, virtsa, ulosteet, sylki, sappi, haimamehu jne.) Sovellus päivittäisessä kliinisessä käytännössä [6,7].

Viimeaikaisten tutkimusten mukaan useita biomarkkereita [6] on tunnistettu suurella mahdollisella tutkimuksella korrelaatiossa ennusteen ja tulevan käytön kanssa seulonnassa väestössä [6,7,8] Varhainen diagnoosi on avainasemassa Hoitovaihtoehdot ja PDAC: n ennusteen parantaminen, siksi tämän projektin analysoimiseksi valittiin joukko biomarkkereita, joilla oli merkittävä potentiaali käytännön kliiniseen käyttöön. Yksi näistä on Kras -protoonkogeeni Ras -perheestä, joka on usein mutatoitu PDAC: ssa [9, 10, 11, 12]. Mutatoitu KRAS -geeni on tarkoitus havaita potilaan plasmasta eristetystä ctDNA: sta ennen laskimonsisäistä stimulaatiota Secrittiinin kanssa, hormoni, joka on vastuussa myös haiman erityksestä [13]. Oletetaan, että Secrettin -stimulaatio aikoo tehostaa ctDNA: n vapautumista.

Mutantti KRAS: n, mRNA: n, miRNA: n, siRNA: n, eksornan, S100 -proteiinien ja aminohappojen analyysistä voi siksi tulla tehokas tunnusmerkki PDAC -seurannassa diagnostisen terapeuttisen prosessin aikana.

Tavoitteet:

Tämän hankkeen tavoitteena on todistaa laskimonsisäisen sekretaanin stimulaation voimakas vaikutus CTDNA: n vapautumiseen PDAC -potilailla ja välittää siten korkeampia plasmaisia ​​ctDNA -tasoja, jotka ovat mahdollisesti käytettäviä lisäanalyyseihin. Lisäksi KRAS -mutaation rooli ctDNA: ssa, mRNA: ssa, miRNA: ssa, siRNA: ssa, exorna-, S100 -proteiineissa ja aminohapoissa on analysoitava koko terapeuttisen prosessin ajan markkeritasojen korrelaation seuraamiseksi elinajanodotuksen, laadun standardoituihin indikaattoreihin, laatuun elämää jne. kerrallaan.

Nolla hypoteesi:

CTDNA: n plasmansisäinen taso laskimonsisäisen erillään antamisen jälkeen ei ole merkitsevästi korkeampi kuin ennen antamista. MRNA: n, miRNA: n, eksogeenisten RNA- ja S100 -proteiinien plasmaiset tasot eivät ole merkitsevästi alhaisempia leikkauksen jälkeen kuin ennen leikkausta, ja ne eivät osoita korrelaatiota taudin leikkauksen jälkeisen kulun kanssa.

Menetelmät ja tilastotiedot:

Ensimmäisessä vaiheessa valitaan sekä uros- että naaraspotilaat PDAC: lla ja osoitetaan kirurgiseen hoitoon. Kun otetaan huomioon useita verinäytteen kokoelmia lyhyessä ajassa, salaisuuden fysiologisia vaikutuksia ja prosessin logistista optimointia, olemme päättäneet ottaa mukaan potilaat, jotka on osoitettu leikkaukseen.

Potilaat, joilla on kasvaimen päällekkäisyys, suljetaan pois. Vain potilaat, joilla on allekirjoitettu suostumus osallistumiseen tutkimukseen, otetaan mukaan. Näiden potilaiden veriplasma kerätään perifeerisestä laskimosta avohoidon aikana ennen leikkausta ja testataan mutatoituneen KRAS -geenin positiivisuuden suhteen heterodupleksianalyysillä käyttämällä kapillaarielektroforeesia denaturointia.

36 potilasta, joilla on KRAS -positiivinen plasmanäyte, valmistetaan sitten rutiininomaisesti leikkaukseen. Kirurgisen toimenpiteen kahden ensimmäisen tunnin aikana sovelletaan 16 mikrogrammaa laskimonsisäistä erillistä. Tänä ajanjakson aikana laskimonsisäinen erillisten antaminen potilaalle on turvallinen eikä häiritse haiman resektion kirurgista vaihetta. Anestesiahenkilöstö kerää 3 minuutin ja 3x 5 minuutin päässä erillisestä levityksestä verinäytteet myös perifeerisestä laskimosta. Kaikki verinäytteet kerätään valmistettuihin näytteenottopaketeihin ilman, että tarvitaan lisätietoja teknistä prosessointia, kuljetetaan laboratorioon ja altistetaan muiden ehdokasmarkkerien analysoimiseksi ja kvantifioimiseksi. Hankkeen toisessa vaiheessa lupaavimmat merkkipaneelit perustetaan nykyisen tiedon ja alustavien tulosten perusteella. PDAC -diagnosoitujen potilaiden veriplasma, joka on osoitettu kirurgiseen terapiaan, testataan sitten markkeritasojen suhteen ennen leikkausta ja leikkauksen jälkeen ennen irtisanomista, 3, 6 ja 12 kuukautta leikkauksen jälkeen avohoidon tutkimuksen aikana. Tulokset analysoidaan sitten ja arvioidaan tilastollisesti korreloidessaan minimaalisen jäännöstaudin, eloonjäämisasteen, elämänlaadun ja muiden standardisoitujen indikaattorien kanssa taudin ennusteen seuraamiseksi. Tilastoarviointi toteutetaan yhteistyössä asiantuntijoiden kanssa, joilla on laaja kokemus bioinformatiikasta ja biolääketieteellisistä tilastoista.

Tulokset ja merkitys:

Projektimme tarjoaa systemaattisen kirjallisuuskatsauksen nestemäisestä biopsiasta ja biomarkkerianalyysistä ja sen sisällyttämisestä kliiniseen onkologiaan potilailla, joilla on diagnosoitu PDAC. Salaisuuden laskimonsisäisen antamisen vaikutus CTDNA: n vapautumiseen PDAC -potilaille innovatiivisena menetelmänä analysoidaan, mikä mahdollisesti hankkii huomattavasti suuremman määrän geneettistä tietoa biomarkkerianalyysejä näillä potilailla. Lisäksi tulokset ja tulos auttavat suunnittelemaan biomarkkereiden paneelin ja arvioimaan niiden kliinistä vaikutusta sairauksien seurannan ja ennusteen arviointiin.