Påverkan av sekretin stimulerad bukspottkörtelutsöndring på ctDNA -uttryck hos patienter med bukspottkörtelkanaladenokarcinom: Biomarkörernas roll för att bestämma prognosen för bukspottkörteladenokarcinom

Bakgrundspankreatisk duktal adenokarcinom (PDAC) är en aggressiv onkologisk sjukdom med en dålig prognos och låg överlevnad. På grund av dess biologiska natur är det i allmänhet utmanande att uppnå tidig diagnostik och därför att uppnå framgångsrika terapeutiska resultat.

Nyligen syftar många studier och studier över hela världen till bättre förståelse för tumörbiologi och tillhandahåller ett nytt verktyg för diagnostik, sjukdomsövervakning och utveckling av en riktad terapi. Ett av intressena för intresse råkar vara de så kallade flytande biopsierna.

Isolering av biomarkörer som miRNA, tumörundertryckningsgener eller aminosyror från dessa biopsier, deras analys, kvantifiering och införlivande i klinisk onkologi representerar en komplex fråga där ytterligare forskning är mycket nödvändig. Ämnen, material, metoder En avgörande förutsättning för biomarköranalys är en tillräcklig mängd genetisk information. I vår studie kommer effekten av intravenös sekretinadministration på frisättning av ctDNA hos patienter med PDAC att analyseras. Mer än 90% KRAS -mutationshastighet hos patienter med PDAC har varit vetenskapligt bevisat, därför kommer patienter med positiv KRAS -mutation i deras perifera blodplasma och planerat för kirurgisk terapi att inkluderas i studien.

Perifert blodplasma hos 36 patienter med PDAC -diagnos kommer sedan att samlas in i specifika intervall under de första två timmarna av operationen. Plasmatiska nivåer av ctDNA i proverna kommer att kvantifieras. En standardiserad panel av biomarkörer kommer att utformas och testas hos patienter med PDAC före operationen och i specifika intervall efter operationen. Resultaten kommer att analyseras i korrelation till minimal restsjukdom, överlevnadshastighet och andra indikatorer för att bestämma prognosen för sjukdomen. Statistisk utvärdering kommer att göras i samarbete med specialister som är erfarenhet av bioinformatik och biomedicinsk statistik.

Introduktion:

Pankreatisk duktalt adenokarcinom (PDAC) rankas bland de mest allvarliga och aggressiva maligna sjukdomarna med en ogynnsam prognos och hög dödlighet [1,2]. Fem års överlevnad för patienter med PDAC är 10 % och tioårig överlevnad är 6 % [3]. Enligt Institutet för hälsoinformation och statistik från Tjeckien är PDAC: s förekomst i Tjeckien 21,9/100000 invånare, prevalens är 23,2/100000 invånare. Förutom otillräckligt svar på systemisk kemoterapi bidrar denna statistik också betydligt till svårigheten att tidiga upptäckt av sjukdomen på grund av dess ofta asymptomatiska period, medan behandlingsmetoder kan vara betydligt begränsade vid diagnosen. Indikationen på kirurgisk behandling som en potentiellt botande metod beror tydligt på den etablerade omfattningen av sjukdomen [4]. För närvarande är den globala övervakade markören nivån av CA19-9 i serumet, också i förhållande till bestämningen av preoperativ och postoperativ prognos [5]. På grund av bristen på tillräcklig känslighet och specificitet för PDAC kan CA19-9 inte klassificeras som en specifik markör med tillräckligt förutsägbart värde [6]. Mer än tre hundra markörer har föreslagits i olika biologiska material (blod, urin, avföring, saliv, gall, bukspottkörteljuice etc.) för screening, tidig diagnos, svar på behandling och prognos, men ingen av biomarkörerna har för närvarande en bredare Tillämpning i daglig klinisk praxis [6,7].

Enligt nyligen genomförda studier har flera biomarkörer [6] identifierats med en hög potential för ytterligare undersökning i korrelation med bedömningen av prognos och framtida användning vid screening i den allmänna befolkningen [6,7,8] tidig diagnos är en viktig del av Behandlingsalternativ och förbättring av prognosen i PDAC, därför valdes en uppsättning biomarkörer med betydande potential för praktisk klinisk användning för att detta projekt skulle analyseras. En av dessa är KRAS Protooncogene från RAS -familjen, som ofta muteras i PDAC [9, 10, 11, 12]. Den muterade KRAS -genen är på väg att detekteras från ctDNA isolerad från patientens plasma före och efter intravenös stimulering med sekretin, ett hormon som också är ansvarigt för bukspottkörtelutsöndring [13]. Vi antar att Secretin -stimuleringen kommer att förstärka frisättningen av ctDNA.

Analys av mutant KRAS, mRNA, miRNA, siRNA, exorna, S100 -proteiner och aminosyror kan därför bli ett effektivt kännetecken i PDAC -övervakning under diagnostisk - terapeutisk process.

Mål:

Syftet med detta projekt är att bevisa det potentierande inflytandet av intravenös sekretinstimulering på frisättning av ctDNA hos patienter med PDAC och därmed förmedla högre plasmatiska nivåer av ctDNA potentiellt användbara för vidare analys. Dessutom är rollen för KRAS -mutation i ctDNA, mRNA, miRNA, siRNA, exorna, S100 -proteiner och aminosyror på väg att analyseras under hela den terapeutiska processen för att övervaka korrelationen mellan markörnivåerna till de standardiserade indikatorerna för livslängd, kvalitet, kvalitet av livet etc. åt gången.

Nollhypotes:

Den plasmatiska nivån av ctDNA efter intravenös sekretionadministration kommer inte att vara signifikant högre än före administrationen. De plasmatiska nivåerna av mRNA-, miRNA-, exogena RNA- och S100 -proteiner kommer inte att vara signifikant lägre efter operationen än före operationen och de kommer inte att visa någon korrelation med postoperativ sjukdomskurs.

Metodik och statistisk utvärdering:

I den första fasen kommer både manliga och kvinnliga patienter i alla åldersintervall som diagnostiserats med PDAC och indikeras för kirurgisk terapi. Med tanke på flera blodprovsamlingar på kort tid, fysiologiska effekter av sekretin och logistisk optimering av processen, har vi beslutat att involvera de patienter som anges för operation.

Patienter med tumörduplicitet kommer att uteslutas. Endast patienterna med undertecknat samtycke till deltagande i studien kommer att inkluderas. Dessa patienters blodplasma kommer att samlas in från en perifer ven under ett polikliniskt besök före operationen och testas för positiviteten hos muterad KRAS -gen med heteroduplexanalys med denaturering av kapillärelektrofores.

36 patienter med KRAS -positivt plasmaprov kommer sedan rutinmässigt att förberedas för operation. Under de första två timmarna av den kirurgiska proceduren kommer 16 mikrogram intravenös sekretin att appliceras. Under denna tidsperiod är den intravenösa sekretinadministrationen till patienten säker och kommer inte att störa den kirurgiska fasen av bukspottkörtelresektion. I intervallet 3 minuter och 3x 5 minuter från Secretin -applikationen kommer blodprover att samlas in från perifera ven också av anestesipersonalen. Alla blodprover kommer att samlas in till de beredda provtagningssatserna utan behov av ytterligare teknisk bearbetning, transporteras till laboratoriet och utsatts för analys och kvantifiering av CTDNA Ant andra kandidatmarkörer. I den andra fasen av projektet kommer de mest lovande markörpanelerna att upprättas baserat på den nuvarande kunskapen och preliminära resultat. Blodplasma hos patienterna som diagnostiserats med PDAC, indikerad för kirurgisk terapi kommer sedan att testas för markörnivåerna preoperativt och postoperativt före uppsägning, 3, 6 och 12 månader efter operationen under poliklinisk undersökning. Resultaten kommer sedan att analyseras och utvärderas statistiskt i korrelation med minimal restsjukdom, överlevnad, livskvalitet och andra standardiserade indikatorer för att övervaka prognosen för sjukdomen. Statistisk utvärdering kommer att realiseras i samarbete med specialister med en bred upplevelse inom bioinformatik och biomedicinsk statistik.

Resultat och betydelse:

Vårt projekt kommer att tillhandahålla en systematisk litteraturöversikt om flytande biopsi och biomarköranalys och dess införlivande av klinisk onkologi hos patienter som diagnostiserats med PDAC. Effekten av intravenös administrering av sekretin på ctDNA -frisättning till patienter med PDAC som en innovativ metod kommer att analyseras, vilket potentiellt skapar en betydligt större mängd genetisk information för biomarköranalys hos dessa patienter. Dessutom kommer resultaten och resultatet att hjälpa till att utforma en panel av biomarkörer och utvärdera deras kliniska implikation vid utvärdering av sjukdomar och prognosutvärdering.