L'influenza della secretina ha stimolato la secrezione pancreatica sull'espressione di ctDNA in pazienti con adenocarcinoma duttale pancreatico: il ruolo dei biomarcatori nel determinare la prognosi del pancreatico adenocarcinoma

Background Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is an aggressive oncological disease with a poor prognosis and low survival rate. A causa della sua natura biologica, è generalmente difficile realizzare diagnostici precoci e quindi ottenere risultati terapeutici di successo.

Recently, many trials and studies worldwide aim at better understanding of tumor biology and providing a novel tool for diagnostics, disease monitoring and developing a targeted therapy. Uno dei soggetti di interesse è le cosiddette biopsie liquide.

L'isolamento di biomarcatori come miRNA, geni soppressori del tumore o aminoacidi da queste biopsie, la loro analisi, quantificazione e incorporazione nell'oncologia clinica rappresenta un problema complesso in cui sono altamente richieste ulteriori ricerche. Soggetti, materiali, metodi Un prerequisito cruciale per l'analisi dei biomarcatori è una quantità sufficiente di informazioni genetiche. Nel nostro studio, verrà analizzato l'effetto della somministrazione di secretina endovenosa sul rilascio di ctDNA in pazienti con PDAC. Più del 90% del tasso di mutazione KRAS in pazienti con PDAC è stato scientificamente dimostrato, quindi nello studio i pazienti con mutazione KRAS positiva nel loro plasma ematico periferico e programmati per la terapia chirurgica.

Il plasma ematico periferico di 36 pazienti con diagnosi PDAC verrà quindi raccolto in intervalli specifici durante le prime due ore dell'operazione. I livelli plasmatici di ctDNA nei campioni saranno quantificati. Un pannello standardizzato di biomarcatori sarà progettato e testato in pazienti con PDAC prima dell'intervento e in intervalli specifici dopo l'intervento chirurgico. I risultati saranno analizzati in correlazione con la malattia residua minima, il tasso di sopravvivenza e altri indicatori per determinare la prognosi della malattia. La valutazione statistica verrà effettuata in collaborazione con specialisti sperimentati in bioinformatica e statistiche biomediche.

Introduzione:

L'adenocarcinoma duttale pancreatico (PDAC) si colloca tra le malattie maligne più gravi e aggressive con una prognosi sfavorevole e un'elevata mortalità [1,2]. La sopravvivenza a cinque anni per i pazienti con PDAC è del 10 % e la sopravvivenza di dieci anni è del 6 % [3]. Secondo l'Institute of Health Information e le statistiche della Repubblica Ceca, l'incidenza del PDAC in Cechia è di 21,9/100000 abitanti, la prevalenza è di 23,2/100000 abitanti. Oltre alla risposta insufficiente alla chemioterapia sistemica, questa statistica contribuisce anche in modo significativo alla difficoltà di rilevazione precoce della malattia a causa del suo periodo spesso asintomatico, mentre i metodi di trattamento possono essere significativamente limitati al momento della diagnosi. L'indicazione del trattamento chirurgico come metodo potenzialmente curativo dipende chiaramente dall'estensione stabilita della malattia [4]. Attualmente, il marcatore monitorato in tutto il mondo è il livello di CA19-9 nel siero, anche in relazione alla determinazione della prognosi preoperatoria e postoperatoria [5]. Tuttavia, a causa della mancanza di sufficienti sensibilità e specificità per PDAC, CA19-9 non può essere classificato come marcatore specifico con un valore predittivo sufficiente [6]. Più di trecento marcatori sono stati proposti in vari materiali biologici (sangue, urina, feci, saliva, bile, succo pancreatico, ecc.) Per lo screening, la diagnosi precoce, la risposta al trattamento e la prognosi, ma nessuno dei biomarcatori ha attualmente un più ampio ha più ampio un più ampio ha più ampio un più ampio ha più ampio un più ampio ha più ampio un più ampio ha più ampio un più ampio ha più ampio un più ampio ha più ampio un più ampio ha più ampio un più ampio ha più ampio un più ampio ha più ampio un più ampio ha più ampio un più ampio ha più ampio un più ampio ha più ampio un più ampio ha un più ampio più ampio Applicazione nella pratica clinica quotidiana [6,7].

Secondo recenti studi, diversi biomarcatori [6] sono stati identificati con un elevato potenziale per ulteriori indagini in correlazione con la valutazione della prognosi e l'uso futuro nello screening nella popolazione generale [6,7,8] la diagnosi precoce è una parte fondamentale della parte fondamentale Le opzioni di trattamento e il miglioramento della prognosi nel PDAC, quindi sono state scelte una serie di biomarcatori con un potenziale significativo per l'uso clinico pratico per analizzare questo progetto. Uno di questi è Kras Protooncogene della famiglia RAS, che è spesso mutata in PDAC [9, 10, 11, 12]. Il gene Kras mutato sta per essere rilevato dal ctDNA isolato dal plasma del paziente prima e dopo la stimolazione endovenosa con secretina, un ormone responsabile anche per la secrezione pancreatica [13]. Supponiamo che la stimolazione della secretina potenzierà il rilascio di ctDNA.

L'analisi di KRAS mutanti, mRNA, miRNA, siRNA, EXORNA, proteine ​​S100 e aminoacidi potrebbe quindi diventare un segno distintivo efficiente nel monitoraggio del PDAC durante il processo terapeutico diagnostico.

Obiettivi:

Lo scopo di questo progetto è dimostrare l'influenza potenziale della stimolazione endovenosa di secretina sul rilascio di ctDNA in pazienti con PDAC e quindi mediare livelli plasmatici più elevati di ctDNA potenzialmente utilizzabili per ulteriori analisi. Oltre a ciò, il ruolo della mutazione KRAS in ctDNA, mRNA, miRNA, siRNA, EXORNA, proteine ​​S100 e aminoacidi sta per essere analizzato durante il processo terapeutico per monitorare la correlazione dei livelli di marker con gli indicatori standardizzati dell'aspettativa di vita, della qualità della vita di vita ecc. In un momento.

Zero ipotesi:

Il livello plasmatico di ctDNA dopo la somministrazione endovenosa di secretina non sarà significativamente più alto rispetto alla somministrazione. I livelli plasmatici di mRNA, miRNA, RNA esogeni e proteine ​​S100 non saranno significativamente più bassi dopo l'intervento chirurgico rispetto a prima dell'intervento chirurgico e non mostreranno alcuna correlazione con il decorso postoperatorio della malattia.

Metodologia e valutazione statistica:

Nella prima fase, saranno selezionati i pazienti maschi e femmine in qualsiasi gamma di età diagnosticata con PDAC e indicato per la terapia chirurgica. Considerando più raccolte di campioni di sangue in un breve periodo di tempo, effetti fisiologici della secretina e ottimizzazione logistica del processo, abbiamo deciso di coinvolgere i pazienti indicati per la chirurgia.

I pazienti con duplicità del tumore saranno esclusi. Saranno inclusi solo i pazienti con consenso firmato dalla partecipazione allo studio. Il plasma ematico di questi pazienti verrà raccolto da una vena periferica durante una visita ambulatoriale prima dell'intervento e testato per la positività del gene Kras mutato con analisi eteroduplex usando elettroforesi capillare denatura.

36 pazienti con campione di plasma positivo KRAS saranno quindi regolarmente preparati per la chirurgia. Nelle prime due ore della procedura chirurgica, verranno applicati 16 microgrammi di secretina endovenosa. Durante questo periodo di tempo, la somministrazione di secretina per via endovenosa al paziente è sicura e non interferisce con la fase chirurgica della resezione pancreatica. Nell'intervallo di 3 minuti e 3x 5 minuti dall'applicazione della secretina, i campioni di sangue saranno raccolti dalla vena periferica e anche dal personale di anestesia. Tutti i campioni di sangue verranno raccolti ai kit di campionamento preparati senza necessità di ulteriori elaborazioni tecniche, trasportati in laboratorio e sottoposti all'analisi e alla quantificazione degli altri marcatori candidati di ctDNA. Nella seconda fase del progetto, i pannelli di marker più promettenti saranno stabiliti in base alle attuali conoscenze e ai risultati preliminari. Il plasma ematico dei pazienti con diagnosi di PDAC, indicato per la terapia chirurgica, verrà quindi testato per i livelli di marcatore in modo preoperatorio e postoperatorio prima del licenziamento, 3, 6 e 12 mesi dopo l'intervento chirurgico durante l'esame ambulatoriale. I risultati verranno quindi analizzati e valutati statisticamente in correlazione con la malattia residua minima, il tasso di sopravvivenza, la qualità della vita e altri indicatori standardizzati per monitorare la prognosi della malattia. La valutazione statistica sarà realizzata in collaborazione con specialisti con una vasta esperienza in bioinformatica e statistiche biomediche.

Risultati e significato:

Il nostro progetto fornirà una revisione sistematica della letteratura riguardante l'analisi della biopsia liquida e dei biomarcatori e la sua incorporazione per l'oncologia clinica nei pazienti con diagnosi di PDAC. Verrà analizzato l'effetto della somministrazione endovenosa di secretina sul rilascio di ctDNA ai pazienti con PDAC come metodo innovativo, acquisendo potenzialmente una quantità significativamente maggiore di informazioni genetiche per l'analisi dei biomarcatori in questi pazienti. Inoltre, i risultati e i risultati aiuteranno a progettare un gruppo di biomarcatori e a valutare le loro implicazioni cliniche nel monitoraggio delle malattie e nella valutazione della prognosi.