Влияние секретина стимулировала секрецию поджелудочной железы на экспрессию ctDNA у пациентов с аденокарциномой протоков поджелудочной железы: роль биомаркеров в определении прогноза аденокарциномы протоков поджелудочной железы.

Фоновая аденокарцинома поджелудочной железы (PDAC) является агрессивным онкологическим заболеванием с плохим прогнозом и низкой выживаемостью. Из -за своего биологического характера, как правило, трудно достичь ранней диагностики и, следовательно, достичь успешных терапевтических результатов.

Недавно многие исследования и исследования во всем мире направлены на лучшее понимание биологии опухолей и предоставление нового инструмента для диагностики, мониторинга заболеваний и разработки целевой терапии. Одним из интересующих предметов является так называемая жидкая биопсия.

Выделение биомаркеров, таких как miRNA, гены -супрессоры опухолей или аминокислоты из этих биопсий, их анализ, количественная оценка и включение в клиническую онкологию представляют собой сложную проблему, в которой необходимы дальнейшие исследования. Субъекты, материалы, методы. Решающая предпосылка для анализа биомаркеров является достаточным количеством генетической информации. В нашем исследовании будет проанализировано влияние внутривенного введения секретана на высвобождение CTDNA у пациентов с PDAC. Более 90% частота мутации KRAS у пациентов с PDAC было научно доказано, поэтому пациенты с положительной мутацией KRAS в их плазме периферической крови и запланированы для хирургической терапии, будут включены в исследование.

Плазма периферической крови 36 пациентов с диагнозом PDAC будет затем собираться в определенных интервалах в течение первых двух часов операции. Плазматические уровни ctDNA в образцах будут количественно определены. Стандартизированная панель биомаркеров будет спроектирована и протестирована у пациентов с PDAC до операции и в определенных промежутках после операции. Результаты будут проанализированы в корреляции с минимальным остаточным заболеванием, выживаемостью и другими показателями для определения прогноза заболевания. Статистическая оценка будет проводиться в сотрудничестве со специалистами, испытываемыми в биоинформатике и биомедицинской статистике.

Введение:

Аденокарцинома протоки поджелудочной железы (PDAC) входит в число наиболее серьезных и агрессивных злокачественных заболеваний с неблагоприятного прогноза и высокой смертности [1,2]. Пятилетняя выживаемость для пациентов с PDAC составляет 10 %, а десятилетняя выживаемость составляет 6 % [3]. По данным Института здравоохранения и статистики Чешской Республики, частота PDAC в Чехии составляет 21,9/100000 жителей, распространенность составляет 23,2/100000 жителей. В дополнение к недостаточной реакции на системную химиотерапию, эта статистика также вносит значительный вклад в сложность раннего обнаружения заболевания из -за его часто бессимптомного периода, в то время как методы лечения могут быть значительно ограничены во время диагноза. Показатель хирургического лечения как потенциально лечебного метода явно зависит от установленной степени заболевания [4]. В настоящее время маркер мира по всему миру является уровнем CA19-9 в сыворотке, также в отношении определения предоперационного и послеоперационного прогноза [5]. Однако из-за отсутствия достаточной чувствительности и специфичности для PDAC CA19-9 не может быть классифицирован как конкретный маркер с достаточным прогностическим значением [6]. Более трехсот маркеров было предложено в различных биологических материалах (кровь, моча, фекалии, слюна, желчь, сок поджелудочной железы и т. Д.) Для скрининга, ранней диагностики, реакции на лечение и прогноз, но ни один из биомаркеров в настоящее время не имеет более широкого уровня. Применение в ежедневной клинической практике [6,7].

Согласно недавним исследованиям, несколько биомаркеров [6] были выявлены с высоким потенциалом для дальнейшего изучения корреляции с оценкой прогноза и будущего использования при скрининге в общей популяции [6,7,8] Ранняя диагностика является ключевой частью Варианты лечения и улучшение прогноза в PDAC, поэтому для анализа этого проекта был выбран набор биомаркеров со значительным потенциалом практического использования. Одним из них является Kras Protooncogene из семейства RAS, который часто мутируется в PDAC [9, 10, 11, 12]. Мутированный ген KRAS должен быть обнаружен из ctDNA, выделенной из плазмы пациента до и после внутривенной стимуляции с секретиной, гормона, ответственного также за секрецию поджелудочной железы [13]. Мы предполагаем, что стимуляция секретана будет способствовать выбросу CTDNA.

Анализ мутантных KRAS, мРНК, miRNA, siRNA, exorna, белков S100 и аминокислот, следовательно, может стать эффективной отличительной чертой в мониторинге PDAC во время диагностического процесса.

Цели:

Цель этого проекта состоит в том, чтобы доказать потенциальное влияние внутривенной стимуляции секретана на высвобождение CTDNA у пациентов с PDAC и тем самым опосредовать более высокие плазматические уровни ctDNA, потенциально используемые для дальнейшего анализа. Кроме того, роль мутации KrAS в ctDNA, мРНК, miRNA, siRNA, exorna, белков S100 и аминокислот должна быть проанализирована на протяжении всего терапевтического процесса для контроля корреляции уровней маркеров с стандартизированными показателями ожидаемой продолжительности жизни, качество жизни и т. д. за раз.

Нулевая гипотеза:

Плазматический уровень ctDNA после внутривенного введения секретана не будет значительно выше, чем до введения. Плазматические уровни мРНК, miRNA, экзогенной РНК и белков S100 не будут значительно ниже после операции, чем до операции, и они не будут показывать какую -либо корреляцию с послеоперационным курсом заболевания.

Методология и статистическая оценка:

На первом этапе будет отображаться как пациенты как мужчин, так и женщин в любом возрастном диагнозе с PDAC и указаны на хирургическую терапию. Учитывая множественные коллекции образцов крови в течение короткого периода времени, физиологические эффекты секретина и логистической оптимизации процесса, мы решили привлечь пациентов, указанных на операцию.

Пациенты с двулитиемостью опухоли будут исключены. Будут включены только пациенты с подписанным согласием участия в исследовании. Плазму этих пациентов в крови будет собрана с периферической вены во время амбулаторного посещения перед операцией и проверить на позитивность мутированного гена KRAS с гетеродуплексным анализом с использованием денатурирующего капиллярного электрофореза.

36 пациентов с KRAS -положительной выборкой плазмы будут затем регулярно подготовлены к операции. В первые два часа хирургической процедуры будут применяться 16 микрограммов внутривенного секретана. В течение этого периода введения внутривенного секретана для пациента в безопасности и не будет мешать хирургической фазе резекции поджелудочной железы. В интервале 3 минуты и в 3 раза 5 минут после применения секретана образцы крови будут собираться по периферической вене, а также персонал анестезии. Все образцы крови будут собираться в подготовленные наборы отбора проб без необходимости дальнейшей технической обработки, транспортируются в лабораторию и подвергаются анализу и количественному определению муравей CTDNA других маркеров кандидатов. На втором этапе проекта наиболее перспективные маркерные панели будут созданы на основе текущих знаний и предварительных результатов. Плазма крови пациентов с диагнозом PDAC, указанная для хирургической терапии, будет затем протестирована на уровни маркеров до операции и после операции до увольнения, через 3, 6 и 12 месяцев после операции во время амбулаторного обследования. Затем результаты будут проанализированы и оценены статистически в корреляции с минимальным остаточным заболеванием, выживаемостью, качеством жизни и другими стандартизированными показателями для мониторинга прогноза заболевания. Статистическая оценка будет реализована в сотрудничестве со специалистами с общим опытом в области биоинформатики и биомедицинской статистики.

Результаты и значение:

Наш проект предоставит систематический обзор литературы, касающийся биопсии жидкости и анализа биомаркеров, а также его включение клинической онкологии у пациентов с диагнозом PDAC. Будет проанализировано влияние внутривенного введения секретана на высвобождение CTDNA для пациентов с PDAC в качестве инновационного метода, что потенциально закупит значительно большее количество генетической информации для анализа биомаркеров у этих пациентов. Кроме того, результаты и результаты помогут разработать группу биомаркеров и оценить их клиническое значение в мониторинге заболеваний и оценке прогноза.