De invloed van secretine stimuleerde pancreasafscheiding op ctDNA -expressie bij patiënten met pancreas ductaal adenocarcinoom: de rol van biomarkers bij het bepalen van de prognose van pancreas ductaal adenocarcinoom

Achtergrond pancreas ductaal adenocarcinoom (PDAC) is een agressieve oncologische ziekte met een slechte prognose en een lage overlevingspercentage. Vanwege het biologische karakter is het over het algemeen een uitdaging om vroege diagnostiek te bereiken en daarom succesvolle therapeutische resultaten te bereiken.

Onlangs zijn veel onderzoeken en studies wereldwijd gericht op een beter begrip van tumorbiologie en het bieden van een nieuw hulpmiddel voor diagnostiek, ziektemonitoring en het ontwikkelen van een gerichte therapie. Een van de onderwerpen van interesse zijn toevallig de zogenaamde vloeibare biopten.

Isolatie van biomarkers zoals miRNA, tumorsuppressorgenen of aminozuren uit deze biopsieën, hun analyse, kwantificering en opname in klinische oncologie vormt een complex probleem waar verder onderzoek zeer vereist is. Onderwerpen, materialen, methoden Een cruciale voorwaarde voor biomarkeranalyse is een voldoende hoeveelheid genetische informatie. In onze studie zal het effect van intraveneuze secretinetoediening op ctDNA -afgifte bij patiënten met PDAC worden geanalyseerd. Meer dan 90% KRAS -mutatiepercentage bij patiënten met PDAC is wetenschappelijk bewezen, daarom zullen patiënten met positieve KRAS -mutatie in hun perifeer bloedplasma en gepland voor chirurgische therapie in de studie worden opgenomen.

Perifeer bloedplasma van 36 patiënten met PDAC -diagnose wordt vervolgens in specifieke intervallen verzameld tijdens de eerste twee uur van de operatie. Plasmatische niveaus van ctDNA in de monsters zullen worden gekwantificeerd. Een gestandaardiseerd panel van biomarkers zal worden ontworpen en getest bij patiënten met PDAC voorafgaand aan chirurgie en in specifieke intervallen na de operatie. De resultaten zullen worden geanalyseerd in correlatie met minimale resterende ziekten, overlevingssnelheid en andere indicatoren om de prognose van de ziekte te bepalen. Statistische evaluatie zal worden uitgevoerd in samenwerking met specialisten die worden ervaren in bioinformatica en biomedische statistieken.

Invoering:

Pancreas ductaal adenocarcinoom (PDAC) behoort tot de ernstigste en agressieve kwaadaardige ziekten met een ongunstige prognose en hoge mortaliteit [1,2]. Vijf jaar overleving voor patiënten met PDAC is 10 % en tien jaar overleving is 6 % [3]. Volgens het Institute of Health Information and Statistics of the Tsjechië is de incidentie van PDAC in Tsjechië 21,9/100000 inwoners, de prevalentie is 23,2/100000 inwoners. Naast onvoldoende respons op systemische chemotherapie, draagt ​​deze statistiek ook aanzienlijk bij aan de moeilijkheid van vroege detectie van de ziekte vanwege de vaak asymptomatische periode, terwijl behandelingsmethoden aanzienlijk beperkt kunnen zijn op het moment van diagnose. De indicatie van chirurgische behandeling als een mogelijk curatieve methode hangt duidelijk af van de vastgestelde omvang van de ziekte [4]. Momenteel is de wereldwijde gecontroleerde marker het niveau van CA19-9 in het serum, ook met betrekking tot de bepaling van preoperatieve en postoperatieve prognose [5]. Vanwege het ontbreken van voldoende gevoeligheid en specificiteit voor PDAC kan CA19-9 echter niet worden geclassificeerd als een specifieke marker met voldoende voorspellende waarde [6]. Meer dan driehonderd markers zijn voorgesteld in verschillende biologische materialen (bloed, urine, ontlasting, speeksel, gal, pancreasap, enz.) Voor screening, vroege diagnose, respons op behandeling en prognose, maar geen van de biomarkers heeft momenteel een grotere Toepassing in de dagelijkse klinische praktijk [6,7].

Volgens recente studies zijn verschillende biomarkers [6] geïdentificeerd met een groot potentieel voor verder onderzoek in correlatie met de beoordeling van prognose en toekomstig gebruik bij screening bij de algemene bevolking [6,7,8] vroege diagnose is een belangrijk onderdeel van Behandelingsopties en de verbetering van de prognose in PDAC, daarom werd een reeks biomarkers met een aanzienlijk potentieel voor praktisch klinisch gebruik gekozen om dit project te analyseren. Een daarvan is Kras Protooncogeen uit de RAS -familie, die vaak wordt gemuteerd in PDAC [9, 10, 11, 12]. Het gemuteerde KRAS -gen zal op het punt worden gedetecteerd uit het ctDNA geïsoleerd uit het plasma van de patiënt voor en na intraveneuze stimulatie met secretine, een hormoon dat ook verantwoordelijk is voor de secretie van de pancreas [13]. We veronderstellen dat de Secretin -stimulatie de afgifte van ctDNA gaat versterken.

Analyse van mutant KRAS, mRNA, miRNA, siRNA, exorna, S100 -eiwitten en aminozuren kan daarom een ​​efficiënt kenmerk worden in PDAC -monitoring tijdens het diagnostische therapeutische proces.

Doelstellingen:

Het doel van dit project is om de versterkte invloed van intraveneuze secretinestimulatie op ctDNA -afgifte bij patiënten met PDAC te bewijzen en daardoor hogere plasmatische niveaus van ctDNA te bemiddelen die mogelijk bruikbaar zijn voor verdere analyse. Daarnaast staat de rol van KRAS -mutatie in ctDNA, mRNA, miRNA, siRNA, exorna, S100 -eiwitten en aminozuren op het punt te worden geanalyseerd in het therapeutische proces om de correlatie van de markerniveaus te volgen met de gestandaardiseerde indicatoren van levensverwachting, kwaliteit van het leven etc. tegelijk.

Nul hypothese:

Het plasmatische niveau van ctDNA na intraveneuze secretinetoediening zal niet significant hoger zijn dan vóór de toediening. De plasmatische niveaus van mRNA, miRNA, exogene RNA en S100 -eiwitten zullen na de operatie niet significant lager zijn dan voorafgaand aan de operatie en ze zullen geen correlatie vertonen met postoperatief verloop van de ziekte.

Methodologie en statistiekevaluatie:

In de eerste fase zullen zowel mannelijke als vrouwelijke patiënten in elke leeftijdsafstand gediagnosticeerd met PDAC en aangegeven voor chirurgische therapie worden geselecteerd. Gezien meerdere bloedmonstercollecties in een korte periode van tijd, fysiologische effecten van secretine en logistieke optimalisatie van het proces, hebben we besloten de aangegeven patiënten te betrekken voor een operatie.

Patiënten met tumor dubbelhartigheid worden uitgesloten. Alleen de patiënten met ondertekende toestemming van deelname aan het onderzoek zullen worden opgenomen. Het bloedplasma van deze patiënten zal worden verzameld uit een perifere ader tijdens een poliklinisch bezoek voorafgaand aan de operatie en getest op de positiviteit van gemuteerd KRAS -gen met heteroduplex -analyse met behulp van denaturerende capillaire elektroforese.

36 Patiënten met KRAS Positive Plasma -monster worden dan routinematig voorbereid op een operatie. In de eerste twee uur van de chirurgische procedure zal 16 microgram intraveneuze secretine worden toegepast. Gedurende deze periode is de intraveneuze secretinetoediening aan de patiënt veilig en zal de chirurgische fase van pancreasresectie niet verstoren. In het interval van 3 minuten en 3x 5 minuten van de Secretin -toepassing worden bloedmonsters ook verzameld uit de perifere ader door het anesthesie -personeel. Alle bloedmonsters zullen worden verzameld bij de voorbereide bemonsteringskits zonder dat er een verdere technische verwerking nodig is, naar het laboratorium getransporteerd en worden onderworpen aan de analyse en kwantificering van ctDNA Ant andere kandidaatmarkers. In de tweede fase van het project zullen de meest veelbelovende markeerpanelen worden vastgesteld op basis van de huidige kennis en voorlopige resultaten. Bloedplasma van de patiënten met de diagnose PDAC, aangegeven voor chirurgische therapie, wordt vervolgens preoperatief en postoperatief op de markerniveaus getest vóór ontslag, 3, 6 en 12 maanden na de operatie tijdens polikliniek. De resultaten zullen vervolgens statistisch worden geanalyseerd en geëvalueerd in correlatie met minimale resterende ziekten, overlevingskans, kwaliteit van leven en andere gestandaardiseerde indicatoren om de prognose van de ziekte te controleren. Statistische evaluatie zal worden gerealiseerd in samenwerking met specialisten met een brede ervaring in bioinformatica en biomedische statistieken.

Resultaten en betekenis:

Ons project zal een systematisch literatuuronderzoek bieden met betrekking tot vloeibare biopsie en biomarkeranalyse en de opname ervan voor klinische oncologie bij patiënten met de diagnose PDAC. Het effect van intraveneuze toediening van secretine op ctDNA -afgifte aan patiënten met PDAC als een innovatieve methode zal worden geanalyseerd, waardoor mogelijk een significant grotere hoeveelheid genetische informatie wordt verkregen voor biomarkeranalyse bij deze patiënten. Bovendien zullen de resultaten en het resultaat helpen om een ​​panel van biomarkers te ontwerpen en hun klinische implicatie bij de monitoring van ziekten en prognose -evaluatie te evalueren.