L'influence de la sécrétine a stimulé la sécrétion pancréatique sur l'expression de l'ADNmt chez les patients atteints d'adénocarcinome canalaire pancréatique: le rôle des biomarqueurs dans la détermination du pronostic de l'adénocarcinome canalaire pancréatique

Contexte L'adénocarcinome canalaire pancréatique (PDAC) est une maladie oncologique agressive avec un mauvais pronostic et un faible taux de survie. En raison de sa nature biologique, il est généralement difficile d'accomplir des diagnostics précoces et donc d'obtenir des résultats thérapeutiques réussis.

Récemment, de nombreux essais et études dans le monde visent à mieux comprendre la biologie tumorale et à fournir un nouvel outil pour les diagnostics, la surveillance des maladies et le développement d'une thérapie ciblée. L'un des sujets d'intérêt se trouve être les soi-disant biopsies liquides.

L'isolement de biomarqueurs tels que le miARN, les gènes suppresseurs de tumeurs ou les acides aminés de ces biopsies, leur analyse, leur quantification et leur incorporation dans l'oncologie clinique représente un problème complexe où des recherches supplémentaires sont fortement nécessaires. Sujets, matériaux, méthodes Une condition préalable cruciale pour l'analyse des biomarqueurs est une quantité suffisante d'informations génétiques. Dans notre étude, l'effet de l'administration de sécrétine intraveineuse sur la libération d'ADNmt chez les patients atteints de PDAC sera analysé. Plus de 90% de taux de mutation de KRAS chez les patients atteints de PDAC ont été scientifiquement prouvés, donc les patients présentant une mutation de KRAS positive dans leur plasma sanguin périphérique et programmé pour un traitement chirurgical seront inclus dans l'étude.

Le plasma sanguin périphérique de 36 patients atteints de diagnostic de PDAC sera ensuite collecté à intervalles spécifiques pendant les deux premières heures de l'opération. Les niveaux plasmatiques de CTDNA dans les échantillons seront quantifiés. Un panel standardisé de biomarqueurs sera conçu et testé chez les patients atteints de PDAC avant la chirurgie et à intervalles spécifiques après la chirurgie. Les résultats seront analysés en corrélation avec une maladie résiduelle minimale, un taux de survie et d'autres indicateurs pour déterminer le pronostic de la maladie. L'évaluation des statistiques se fera en coopération avec des spécialistes expérimentés en bioinformatique et statistiques biomédicales.

Introduction:

L'adénocarcinome canalaire pancréatique (PDAC) se classe parmi les maladies malignes les plus graves et les plus agressives avec un pronostic défavorable et une mortalité élevée [1,2]. La survie à cinq ans pour les patients atteints de PDAC est de 10% et la survie à dix ans est de 6% [3]. Selon l'Institut d'information sur la santé et les statistiques de la République tchèque, l'incidence du PDAC en Tchéchie est de 21,9 / 100000 habitants, la prévalence est des habitants de 23,2 / 100000. En plus de la réponse insuffisante à la chimiothérapie systémique, cette statistique contribue également de manière significative à la difficulté de détection précoce de la maladie en raison de sa période souvent asymptomatique, tandis que les méthodes de traitement peuvent être considérablement limitées au moment du diagnostic. L'indication du traitement chirurgical en tant que méthode potentiellement curative dépend clairement de l'étendue établie de la maladie [4]. Actuellement, le marqueur surveillé mondial est le niveau de CA19-9 dans le sérum, également en relation avec la détermination du pronostic préopératoire et postopératoire [5]. Cependant, en raison de l'absence de sensibilité et de spécificité suffisantes pour PDAC, CA19-9 ne peut pas être classée comme marqueur spécifique avec une valeur prédictive suffisante [6]. Plus de trois cents marqueurs ont été proposés dans divers matériaux biologiques (sang, urine, excréments, salive, bile, jus pancréatique, etc.) pour le dépistage, le diagnostic précoce, la réponse au traitement et le pronostic, mais aucun des biomarqueurs n'a actuellement de plus large Application dans la pratique clinique quotidienne [6,7].

Selon des études récentes, plusieurs biomarqueurs [6] ont été identifiés avec un potentiel élevé pour une enquête plus approfondie en corrélation avec l'évaluation du pronostic et de l'utilisation future dans le dépistage de la population générale [6,7,8] Le diagnostic précoce est un élément clé de Les options de traitement et l'amélioration du pronostic dans le PDAC, donc un ensemble de biomarqueurs ayant un potentiel significatif pour une utilisation clinique pratique a été choisi pour que ce projet soit analysé. L'un d'eux est le protooncogène Kras de la famille Ras, qui est fréquemment muté dans PDAC [9, 10, 11, 12]. Le gène KRAS muté est sur le point d'être détecté à partir de l'ADNmt isolé du plasma du patient avant et après une stimulation intraveineuse avec la sécrétine, une hormone responsable également de la sécrétion pancréatique [13]. Nous supposons que la stimulation de la sécrétine va potentialiser la libération d'ADNmt.

L'analyse des kras mutantes, de l'ARNm, de l'ARNm, de l'ARNsi, de l'exorna, des protéines S100 et des acides aminés pourrait donc devenir une caractéristique efficace de la surveillance PDAC pendant le processus thérapeutique diagnostique.

Objectifs:

L'objectif de ce projet est de prouver l'influence potentialisée de la stimulation par sécrétine intraveineuse sur la libération d'ADNmt chez les patients atteints de PDAC et de médier ainsi des niveaux plasmatiques plus élevés d'ADNmt potentiellement utilisables pour une analyse plus approfondie. Besides that, the role of KRAS mutation in ctDNA, mRNA, miRNA, siRNA, exoRNA, S100 proteins and amino acids is about to be analyzed throughout the therapeutic process to monitor the correlation of the marker levels to the standardized indicators of life expectancy, quality de la vie, etc. à la fois.

Zéro hypothèse:

Le niveau plasmatique d'ADNma après administration intraveineuse de sécrétine ne sera pas significativement plus élevé qu'avant l'administration. Les niveaux plasmatiques d'ARNm, de miARN, d'ARN exogénique et de protéines S100 ne seront pas significativement plus bas après la chirurgie qu'avant la chirurgie et ils ne montreront aucune corrélation avec le cours postopératoire de la maladie.

Méthodologie et évaluation des statistiques:

Dans la première phase, les patients masculins et féminins dans tout âge d'âge diagnostiqué avec PDAC et indiqués pour le traitement chirurgical seront sélectionnés. Compte tenu de plusieurs collections d'échantillons de sang en peu de temps, des effets physiologiques de la sécrétine et de l'optimisation logistique du processus, nous avons décidé d'impliquer les patients indiqués pour la chirurgie.

Les patients atteints de duplicité tumorale seront exclus. Seuls les patients ayant un consentement signé de participation à l'étude seront inclus. Le plasma sanguin de ces patients sera collecté dans une veine périphérique lors d'une visite ambulatoire avant la chirurgie et testé pour la positivité du gène KRAS muté avec une analyse hétéroduplex en utilisant une électrophorèse capillaire dénaturant.

36 patients avec un échantillon de plasma positif KRAS seront ensuite régulièrement préparés à la chirurgie. Au cours des deux premières heures de la procédure chirurgicale, 16 microgrammes de sécrétine intraveineux seront appliqués. Pendant cette période, l'administration de sécrétine intraveineuse au patient est sûre et n'interférera pas avec la phase chirurgicale de la résection pancréatique. Dans l'intervalle de 3 minutes et 3x 5 minutes de l'application de sécrétine, des échantillons de sang seront également prélevés dans la veine périphérique par le personnel de l'anesthésie. Tous les échantillons de sang seront prélevés sur les kits d'échantillonnage préparés sans avoir besoin de traitement technique supplémentaire, transporté au laboratoire et soumis à l'analyse et à la quantification des autres marqueurs candidats de la fourmi d'ADNm. Dans la deuxième phase du projet, les panneaux de marqueurs les plus prometteurs seront établis sur la base des connaissances actuelles et des résultats préliminaires. Le plasma sanguin des patients diagnostiqués avec PDAC, indiqué pour le traitement chirurgical, sera ensuite testé pour les niveaux de marqueur en préopératoire et en postopératoire avant le licenciement, 3, 6 et 12 mois après la chirurgie pendant l'examen ambulatoire. Les résultats seront ensuite analysés et évalués statistiquement en corrélation avec une maladie résiduelle minimale, un taux de survie, une qualité de vie et d'autres indicateurs standardisés pour surveiller le pronostic de la maladie. L'évaluation des statistiques sera réalisée en coopération avec des spécialistes ayant une large expérience en bioinformatique et en statistiques biomédicales.

Résultats et signification:

Notre projet fournira une revue de littérature systématique concernant la biopsie liquide et l'analyse des biomarqueurs et son incorporation à l'oncologie clinique chez les patients diagnostiqués avec PDAC. L'effet de l'administration intraveineuse de sécrétine sur la libération d'ADNmt aux patients atteints de PDAC comme méthode innovante sera analysée, procurant potentiellement une quantité significativement plus importante d'informations génétiques pour l'analyse des biomarqueurs chez ces patients. De plus, les résultats et les résultats aideront à concevoir un panel de biomarqueurs et à évaluer leur implication clinique dans la surveillance des maladies et l'évaluation du pronostic.