췌장 덕질 선암종 환자에서 CTDNA 발현에 대한 췌장 분비의 영향 : 췌장 덕질 선암종의 예후를 결정하는 데있어 바이오 마커의 역할

배경 췌장 덕질 선암종 (PDAC)은 예후가 좋지 않고 생존율이 낮은 공격적인 종양 질환입니다. 생물학적 특성으로 인해 일반적으로 조기 진단을 달성하여 성공적인 치료 결과를 달성하는 것은 어려운 일입니다.

최근 전 세계의 많은 시험과 연구는 종양 생물학에 대한 이해를 높이고 진단, 질병 모니터링 및 표적 요법 개발을위한 새로운 도구를 제공하는 것을 목표로합니다. 관심있는 주제 중 하나는 소위 액체 생검입니다.

이러한 생검으로부터 miRNA, 종양 억제제 유전자 또는 아미노산과 같은 바이오 마커의 분리, 그들의 분석, 정량화 및 임상 종양학으로의 통합은 추가 연구가 필요한 복잡한 문제를 나타낸다. 대상, 재료, 방법 바이오 마커 분석을위한 중요한 전제 조건은 충분한 양의 유전자 정보입니다. 우리의 연구에서, PDAC 환자에서 CTDNA 방출에 대한 정맥 내 비밀 투여의 효과가 분석 될 것이다. PDAC 환자의 90% 이상의 KRAS 돌연변이 속도는 과학적으로 입증되었으므로 말초 혈장에서 긍정적 인 KRAS 돌연변이가있는 환자가 연구에 포함될 것입니다.

PDAC 진단을받은 36 명의 환자의 말초 혈장 혈장은 수술의 첫 2 시간 동안 특정 간격으로 수집됩니다. 샘플에서 CTDNA의 플라스마틱 수준이 정량화 될 것이다. 표준화 된 바이오 마커 패널은 수술 전 및 수술 후 특정 간격으로 PDAC 환자에서 설계 및 검사됩니다. 결과는 질병의 예후를 결정하기 위해 최소 잔류 질환, 생존율 및 기타 지표와 상관 관계로 분석 될 것입니다. 통계 평가는 생물 정보학 및 생물 의학 통계에서 경험 한 전문가와 협력하여 이루어질 것입니다.

소개:

췌장 덕트 선암종 (PDAC)은 바람직하지 않은 예후와 높은 사망률을 가진 가장 심각하고 공격적인 악성 질환 중 하나입니다 [1,2]. PDAC 환자의 5 년 생존율은 10 %이고 10 년 생존율은 6 %입니다 [3]. 체코 공화국의 건강 정보 연구소 (Institute of Health Information) 및 통계에 따르면 체코의 PDAC 발생률은 21.9/10 만 주민이며, 유병률은 23,2/10 만 주민입니다. 전신 화학 요법에 대한 반응이 충분하지 않은 것 외에도,이 통계는 종종 무증상 기간으로 인해 질병의 조기 발견의 어려움에 크게 기여하는 반면, 치료 방법은 진단시 상당히 제한 될 수 있습니다. 잠재적으로 치료적인 방법으로서 외과 적 치료의 표시는 질병의 확립 된 범위에 분명히 의존한다 [4]. 현재, 전세계 모니터링 된 마커는 수술 전 및 수술 후 예후의 결정과 관련하여 혈청의 CA19-9 수준입니다 [5]. 그러나 PDAC에 대한 충분한 감도와 특이성이 없기 때문에 CA19-9는 충분한 예측 값을 가진 특정 마커로 분류 될 수 없습니다 [6]. 스크리닝, 조기 진단, 치료 및 예후에 대한 반응을위한 다양한 생물학적 물질 (혈액, 소변, 대변, 타액, 담즙, 췌장 주스 등)에서 300 개가 넘는 마커가 제안되었지만 현재 더 넓은 바이오 마커는 없습니다. 일일 임상 실습에 적용 [6,7].

최근의 연구에 따르면, 몇몇 바이오 마커 [6]는 예후 평가와의 상관 관계에 대한 추가 조사 및 일반 인구의 스크리닝에서의 향후 사용 [6,7,8] 조기 진단의 핵심 부분으로 확인되었습니다. PDAC의 치료 옵션 및 예후 개선, 따라서이 프로젝트를 분석하기 위해 실질적인 임상 사용 가능성이 상당한 일련의 바이오 마커가 선택되었다. 그 중 하나는 RAS 패밀리의 크라스 프로토코 젠 (Kras protooncogene)이며, 이는 PDAC에서 자주 돌연변이됩니다 [9, 10, 11, 12]. 돌연변이 된 KRAS 유전자는 췌장 분비를 담당하는 호르몬 인 분비와 정맥 자극 전후에 환자의 혈장으로부터 분리 된 CTDNA로부터 검출 될 예정이다 [13]. 우리는 분비 자극이 ctDNA의 방출을 강화시킬 것이라고 가정한다.

따라서 돌연변이 크라스, mRNA, miRNA, siRNA, 엑토 나, S100 단백질 및 아미노산의 분석은 진단 - 치료 과정에서 PDAC 모니터링에서 효율적인 특징이 될 수있다.

목표 :

이 프로젝트의 목표는 PDAC 환자에서 CTDNA 방출에 대한 정맥 내 비밀 자극의 강력한 영향을 입증하고, 따라서 추가 분석을 위해 잠재적으로 사용할 수있는 CTDNA의 더 높은 혈장 수준을 매개하는 것이다. 그 외에도, CTDNA, mRNA, miRNA, siRNA, ExOna, S100 단백질 및 아미노산에서 KRAS 돌연변이의 역할은 치료 과정 전체에서 마커 수준의 수명, 품질의 표준화 된 지표와의 상관 관계를 모니터링하기 위해 분석 될 예정이다. 한 번에 생명 등.

제로 가설 :

정맥 내 분비 투여 후 CTDNA의 혈장 수준은 투여 전보다 상당히 높지 않을 것이다. mRNA, miRNA, 외인성 RNA 및 S100 단백질의 혈장 수준은 수술 전보다 수술 후 유의하게 낮지 않을 것이며 질병의 수술 후 과정과 어떤 상관 관계도 보이지 않을 것이다.

방법론 및 통계 평가 :

첫 번째 단계에서, PDAC로 진단 된 모든 연령 범위의 남성 및 여성 환자는 모두 수술 요법으로 표시됩니다. 단기간에 여러 혈액 샘플 수집, 비밀의 생리 학적 효과 및 과정의 물류 최적화를 고려할 때, 우리는 수술을 위해 지시 된 환자를 관여하기로 결정했습니다.

종양 중복 환자는 제외됩니다. 연구 참여에 대한 서명 동의가있는 환자 만 포함됩니다. 이들 환자의 혈액 혈장은 수술 전 외래 환자 방문 동안 말초 정맥으로부터 수집되며 모세관 전기 영동을 사용한 이종 흡수성 분석으로 돌연변이 된 KRAS 유전자의 양성을 테스트 할 것이다.

KRA 양성 혈장 샘플을 가진 36 명의 환자는 일상적으로 수술을 준비합니다. 수술 절차의 첫 2 시간 동안, 16 마이크로 그램의 정맥 내 분비가 적용될 것이다. 이 기간 동안, 환자에 대한 정맥 내 분비 투여는 안전하며 췌장 절제술의 외과 적 단계를 방해하지 않을 것이다. Secretin 적용으로부터 3 분 및 3 배 5 분 간격으로, 혈액 샘플은 말초 정맥으로부터 마취 직원에 의해 수집됩니다. 모든 혈액 샘플은 추가 기술 처리가 필요하지 않고 제조 된 샘플링 키트로 수집되고, 실험실로 운송되고, CTDNA ant 다른 후보 마커의 분석 및 정량화에 적용됩니다. 프로젝트의 두 번째 단계에서 가장 유망한 마커 패널은 현재 지식과 예비 결과를 기반으로 설정됩니다. 수술 요법으로 표시된 PDAC로 진단 된 환자의 혈장 혈장은 외래 환자 검사 중 수술 후 3, 6 및 12 개월 후에 해고 전 및 수술 전 마커 수준에 대해 테스트됩니다. 그런 다음 결과는 최소 잔류 질환, 생존율, 삶의 질 및 기타 표준화 된 지표와 질병의 예후를 모니터링하기 위해 통계적으로 분석 및 평가됩니다. 통계 평가는 생물 정보학 및 생물 의학 통계에 대한 광범위한 경험을 가진 전문가와 협력하여 실현 될 것입니다.

결과와 중요성 :

우리의 프로젝트는 액체 생검 및 바이오 마커 분석에 관한 체계적인 문헌 검토와 PDAC 진단을받은 환자의 임상 종양학에 대한 통합을 제공 할 것입니다. 혁신적인 방법으로서 PDAC 환자에 대한 CTDNA 방출에 대한 비밀 틴의 정맥 내 투여의 효과는 분석되어 잠재적으로 이들 환자에서 바이오 마커 분석을위한 상당히 많은 양의 유전자 정보를 조달 할 것이다. 또한, 결과와 결과는 바이오 마커 패널을 설계하고 질병 모니터링 및 예후 평가에서 임상 적 영향을 평가하는 데 도움이 될 것입니다.