A szekretin stimulált hasnyálmirigy -szekréció hatása a ctDNS expressziójára hasnyálmirigy -ductalis adenocarcinoma esetén: A biomarkerek szerepe a hasnyálmirigy -ductalis adenocarcinoma prognózisának meghatározásában

Háttér A hasnyálmirigy ductalis adenocarcinoma (PDAC) egy agresszív onkológiai betegség, amelynek rossz prognózisával és alacsony túlélési arányával jár. Biológiai jellege miatt általában kihívást jelent a korai diagnosztika megvalósítása és ennélfogva a sikeres terápiás eredmények elérése.

A közelmúltban számos vizsgálat és tanulmány világszerte célja a tumorbiológia jobb megértése, valamint a diagnosztika, a betegségfigyelés és a célzott terápia fejlesztésének új eszközének biztosítása. Az egyik érdeklődő alany az úgynevezett folyékony biopsziák.

A biomarkerek, például a miRNS, a tumorszuppresszor gének vagy az aminosavak izolálása ezekből a biopsziákból, elemzésük, számszerűsítésük és a klinikai onkológiába történő beépülés komplex kérdést jelent, ahol további kutatásokra szükség van. Tárgyak, anyagok, módszerek A biomarker elemzés kritikus előfeltétele elegendő mennyiségű genetikai információ. Vizsgálatunkban elemezzük az intravénás szekretin beadásának a CTDNS felszabadulására gyakorolt ​​hatását a PDAC -ban szenvedő betegeknél. A PDAC -ban szenvedő betegeknél több mint 90% KRAS mutációs arányt tudományosan bebizonyították, ezért a pozitív KRAS mutációval rendelkező betegeket perifériás vérplazmájukban és műtéti terápiára tervezik a vizsgálatba.

36 PDAC -diagnózisban szenvedő beteg perifériás vérplazmáját ezután a műtét első két órájában specifikus időközönként gyűjtik. A mintákban a ctDNS plazmatikus szintjét számszerűsítjük. A műtét előtt és a műtét utáni specifikus időközönként egy standardizált biomarker panelet terveznek és tesztelnek a PDAC -ban szenvedő betegeknél. Az eredményeket a betegség prognózisának meghatározása érdekében a minimális maradék betegséggel, a túlélési sebességgel és más mutatókkal való összefüggésben elemezzük. A statisztikai értékelést a bioinformatikai és orvosbiológiai statisztikákban tapasztalt szakemberekkel együttműködve végzik.

Bevezetés:

A hasnyálmirigy -ductalis adenocarcinoma (PDAC) a legsúlyosabb és agresszív rosszindulatú betegségek közé tartozik, kedvezőtlen prognózissal és magas mortalitással [1,2]. A PDAC-ban szenvedő betegek ötéves túlélése 10 %, a tízéves túlélés pedig 6 % [3]. A Cseh Köztársaság Egészségügyi Információs Intézete és Statisztikái szerint a PDAC előfordulása csehül 21,9/100000 lakos, a prevalencia 23,2/100000 lakos. A szisztémás kemoterápiára adott elégtelen válasz mellett ez a statisztika jelentősen hozzájárul a betegség korai kimutatásának nehézségeihez gyakran tünetmentes időszak miatt, míg a kezelési módszerek a diagnózis idején jelentősen korlátozottak lehetnek. A műtéti kezelés mint potenciálisan gyógyító módszer jelzése egyértelműen a betegség megállapított mértékétől függ [4]. Jelenleg a világméretű megfigyelt marker a CA19-9 szint a szérumban, a preoperatív és posztoperatív prognózis meghatározásával is [5]. A PDAC-ra vonatkozó elegendő érzékenység és specifitás hiánya miatt azonban a CA19-9 nem minősíthető olyan specifikus markerként, amelynek elegendő prediktív értéke van [6]. Több mint háromszáz markert javasoltak különféle biológiai anyagokban (vér, vizelet, széklet, nyál, epe, hasnyálmirigylé stb.) Szűréshez, korai diagnosztizáláshoz, a kezelésre adott reakcióhoz és a prognózishoz, de a biomarkerek egyikének sem szélesebb Alkalmazás a napi klinikai gyakorlatban [6,7].

A legfrissebb tanulmányok szerint számos biomarkert [6] azonosítottak, nagy potenciállal a további vizsgálat során a prognózis értékelésével és a szűrés jövőbeni felhasználásával való korrelációban az általános populációban [6,7,8] A korai diagnózis kulcsfontosságú része annak, hogy A kezelési lehetőségek és a PDAC prognózisának javulása, ezért a projekt elemzéséhez a gyakorlati klinikai felhasználás jelentős potenciállal rendelkező biomarkerek sorozatát választották. Az egyik a Kras Protooncogene a RAS családból, amelyet gyakran mutálnak a PDAC -ban [9, 10, 11, 12]. A mutált KRAS gént a beteg plazmájából izolált ctDNS -ből kell kimutatni a szekretinnel való intravénás stimuláció előtt és után, amely a hasnyálmirigy szekrécióáért felelős hormon is [13]. Feltételezzük, hogy a szekretin stimuláció fokozni fogja a ctDNS felszabadulását.

A mutáns KRAS, az mRNS, a miRNS, az siRNS, az exorna, az S100 fehérjék és az aminosavak elemzése tehát hatékony fémjelévé válhat a PDAC monitorozásában a diagnosztikai - terápiás folyamat során.

Célkitűzések:

Ennek a projektnek az a célja, hogy igazolja az intravénás szekretin stimuláció potenciális hatását a CTDNS felszabadulására a PDAC -ban szenvedő betegek esetében, és ezáltal elősegíti a további elemzéshez potenciálisan felhasználható ctDNS magasabb plazmatikus szintjét. Ezen túlmenően a KRAS mutáció szerepét a ctDNS -ben, az mRNS -ben, a miRNS -ben, az siRNS -ben, az exorna, az S100 fehérjékben és az aminosavakban a terápiás folyamat során kell elemezni, hogy figyelemmel kísérjék a marker szintek korrelációját a várható élettartam, a minőség standardizált mutatói és az élet stb. Egyszerre.

Nulla hipotézis:

A ctDNS plazmatikus szintje az intravénás szekretin beadása után nem lesz szignifikánsan magasabb, mint az alkalmazás előtt. Az mRNS, a miRNS, az exogén RNS és az S100 fehérjék plazmatikus szintje nem lesz szignifikánsan alacsonyabb a műtét után, mint a műtét előtt, és nem mutatnak korrelációt a betegség posztoperatív módszerével.

Módszertan és statisztikai értékelés:

Az első szakaszban mind a férfi, mind a női betegek esetében a PDAC-val diagnosztizált és műtéti terápiára jelzett életkor-tartományban választunk ki. Figyelembe véve a több vérminta -gyűjteményt rövid idő alatt, a szekretin fiziológiai hatásait és a folyamat logisztikai optimalizálását, úgy döntöttünk, hogy bevonjuk a műtétre jelzett betegeket.

A daganatos kettősségű betegeket kizárják. Csak azokat a betegeket veszik figyelembe, amelyek aláírt hozzájárulása van a vizsgálatban való részvételről. Ezeket a betegek vérplazmáját perifériás vénából gyűjtik a műtét előtti járóbeteg -látogatás során, és megvizsgálják a mutált KRAS gén pozitivitását heteroduplex elemzéssel, denaturáló kapilláris elektroforézis alkalmazásával.

36 KRAS pozitív plazmamintával rendelkező beteget rutinszerűen készítenek műtétre. A műtéti eljárás első két órájában 16 mikrogramm intravénás szkennit alkalmaznak. Ebben az időszakban a beteg intravénás szekretin beadása biztonságos, és nem zavarja a hasnyálmirigy -reszekció műtéti fázisát. A szekretin alkalmazástól 3 perc és 3x 5 perces időközönként a vérmintákat a perifériás vénából és az érzéstelenítés személyzetéből is összegyűjtik. Az összes vérmintát összegyűjtik az elkészített mintavételi készletekbe, amelyek nem szükségesek további műszaki feldolgozásra, a laboratóriumba szállították, és a CTDNS ANT más jelölt markerek elemzésére és számszerűsítésére vonatkoznak. A projekt második szakaszában a legígéretesebb marker paneleket a jelenlegi ismeretek és az előzetes eredmények alapján hozják létre. A PDAC -val diagnosztizált betegek vérplazmáját, amelyet a műtéti terápiára jeleznek, ezután a műtét előtti és posztoperatív módon a marker szinteket vizsgálják, a műtét utáni 3, 6 és 12 hónappal a járóbeteg -vizsgálat során. Az eredményeket ezután elemezzük és statisztikailag értékeljük a minimális maradék betegséggel, a túlélési aránygal, az életminőséggel és más szabványosított mutatókkal való összefüggésben a betegség előrejelzésének ellenőrzésére. A statisztikai értékelést a bioinformatika és az orvosbiológiai statisztikák széles tapasztalattal rendelkező szakemberekkel együttműködve valósítják meg.

Eredmények és jelentőség:

Projektünk szisztematikus irodalmi áttekintést nyújt a folyékony biopszia és a biomarker elemzésekről, valamint annak klinikai onkológiájába történő beépítéséről a PDAC -val diagnosztizált betegekben. A szekretin intravénás beadásának a ctDNS felszabadulására gyakorolt ​​hatását a PDAC mint innovatív módszerként szenvedő betegeknek elemezzük, és ezekben a betegekben potenciálisan szignifikánsan nagyobb mennyiségű genetikai információt szereznek a biomarker -elemzéshez. Ezenkívül az eredmények és az eredmények elősegítik a biomarkerek testületének megtervezését, valamint a betegségfigyelés és a prognózis értékelésében való klinikai következményeik kiértékelését.