Évaluation de l'absorption et du métabolisme du folate colique

Le folate de vitamine est nécessaire au métabolisme à un seul carbone dans des processus tels que la synthèse des acides aminés et des nucléotides. Comme le folate ne peut pas être synthétisé par les mammifères, il doit provenir de l'alimentation et des compléments alimentaires ou être généré par des espèces bactériennes présentes dans le côlon. Il existe un certain nombre d'effets néfastes bien établis sur la santé associés à une carence en folate chez l'homme, notamment des malformations congénitales du tube neural chez les nouveau-nés et le cancer colorectal chez les adultes. Il a été proposé que le statut supra-physiologique en folates puisse également être préjudiciable car il peut entraîner des modifications de la fonction immunitaire et le masquage d'une carence en vitamine B12. On pense généralement que les sources alimentaires de folate sont principalement absorbées dans l'intestin grêle, mais des preuves récentes de notre équipe et d'autres suggèrent que le côlon pourrait jouer un rôle plus important dans l'absorption du folate qu'on ne le pensait auparavant. Plus précisément, la quantité de folate dans le côlon, dont une grande partie est générée par le microbiome, peut dépasser les apports alimentaires en folate provenant de sources naturelles. Il existe un certain nombre de lacunes dans les connaissances concernant l'absorption colique du folate chez l'homme. On ne sait pas dans quelle mesure des transporteurs spécifiques de folate tels que le transporteur de folate couplé au proton (PCFT) et le transporteur de folate réduit (RFC) sont présents dans le côlon d'humains sains. À ce jour, la majorité des études menées identifiant la présence de RFC et de PCFT dans les colonocytes ont été réalisées à l'aide de lignées cellulaires ou de tissus prélevés sur des donneurs d'organes. À notre connaissance, aucune étude n'a étudié les concentrations d'ARNm et de protéines de RFC et de PCFT présentes dans les tissus coliques humains récupérés sous forme de biopsies. Il reste également à déterminer si le statut en folate influence l'expression des RFC et PCFT au niveau du côlon. Deuxièmement, on ne sait toujours pas dans quelle mesure les deux folates hydrolases intestinales, la glutamate carboxypeptidase II (GCPII) et la γ-glutamyl hydrolase (GGH) sont présentes dans la muqueuse colique. Pour mieux comprendre les processus fondamentaux impliqués dans l'absorption des folates dans le côlon de l'homme, les trois objectifs suivants sont proposés. L'objectif principal est d'évaluer l'impact de 0 et 400 µg d'acide folique supplémentaire sur les concentrations totales de folate dans la muqueuse colique en mesurant les niveaux de folate. Les objectifs secondaires incluent l'évaluation de l'impact de 0 et 400 µg d'acide folique supplémentaire sur la régulation de la PCFT et de la RFC dans l'iléon et le côlon en évaluant l'expression des transcrits d'ARNm et des protéines, et en déterminant le degré de présence de GCPII et de GGH dans le lumière de l'iléon et du côlon en quantifiant l'activité enzymatique et l'expression des transcrits d'ARNm et des protéines. Pour ce faire, un essai clinique randomisé ouvert longitudinal de 16 semaines sera mené. Le recrutement et la sélection nécessiteront trois étapes distinctes comprenant une invitation initiale à participer, suivie d'une séance de sélection téléphonique pour déterminer l'éligibilité et enfin d'une visite d'étude en personne avant l'inscription à la phase d'intervention de l'étude. Une fois inscrits, les participants seront invités à suivre un régime pauvre en acide folique synthétique pendant toute la durée de l'étude. Lors de l'inscription, les sujets seront randomisés pour recevoir un supplément de multivitamines et 0 ou 400 µg d'acide folique. Des visites d'étude de suivi auront lieu à la semaine 8 et à la semaine 16 où des mesures anthropométriques, des biopsies de sang et de tissu colique (semaine 16 uniquement) de l'iléon terminal, du caecum, du côlon ascendant et du côlon descendant seront collectées pour analyse. Des rappels alimentaires de 24 heures seront collectés tout au long de l'étude pour observer l'apport en folate et en calories. Les taux plasmatiques, les taux de folates érythrocytaires et la teneur en folates de la muqueuse colique seront déterminés par dosage microbien. L'activité enzymatique GCPII et GGH sera déterminée selon la méthode de Krumdieck et Baugh avec modification. L'expression de PCFT et de RFC sera déterminée par PCR semi-quantitative en temps réel et des échantillons de protéines seront extraits dans une analyse Western Blot à l'aide d'un tampon de lyse et d'extraction RIPA. L'étude proposée approfondira notre compréhension des processus fondamentaux du métabolisme et de l'absorption des folates dans le côlon. Les résultats de cette étude peuvent aider à établir les apports optimaux en folate alimentaire, répondant aux besoins de l'homme, sans les risques potentiels pour la santé liés à une surexposition au folate.