Avaliação da Absorção e Metabolismo do Folato no Cólon

A vitamina folato é necessária para o metabolismo de um carbono em processos como a síntese de aminoácidos e nucleotídeos. Como o folato não pode ser sintetizado por mamíferos, ele deve ser obtido da dieta e suplementos dietéticos ou gerado por espécies bacterianas presentes no cólon. Há uma série de resultados adversos à saúde bem estabelecidos associados à deficiência de folato em humanos, incluindo defeitos congênitos do tubo neural em recém-nascidos e câncer colorretal em adultos. Foi proposto que o estado supra-fisiológico do folato também pode ser prejudicial, pois pode levar a alterações na função imunológica e mascarar a deficiência de vitamina B12. Geralmente acredita-se que as fontes dietéticas de folato são absorvidas principalmente no intestino delgado, no entanto, evidências recentes de nossa equipe e de outros sugerem que o cólon pode desempenhar um papel maior na absorção de folato do que se pensava anteriormente. Especificamente, a quantidade de folato no cólon, grande parte gerada pelo microbioma, pode exceder a ingestão alimentar de folato de fontes naturais. Há uma série de lacunas no conhecimento sobre a absorção colônica de folato em humanos. Não se sabe até que ponto os transportadores específicos de folato, como o transportador de folato acoplado a prótons (PCFT) e o transportador de folato reduzido (RFC), estão presentes no cólon de humanos saudáveis. Até o momento, a maioria dos estudos conduzidos identificando a presença de RFC e PCFT em colonócitos foi realizada usando linhagens celulares ou tecidos colhidos de doadores de órgãos. Até onde sabemos, nenhum estudo investigou as concentrações de mRNA e proteínas de RFC e PCFT presentes em tecido colônico humano recuperado como biópsias. Também resta determinar se o status do folato influencia a expressão de RFC e PCFT no nível do cólon. Em segundo lugar, ainda não está claro até que ponto as duas folato hidrolases intestinais, glutamato carboxipeptidase II (GCPII) e γ-glutamil hidrolase (GGH) estão presentes na mucosa colônica. Para obter uma compreensão mais completa dos processos fundamentais envolvidos na absorção de folato no cólon de humanos, os três objetivos a seguir são propostos. O objetivo principal é avaliar o impacto de 0 e 400 µg de ácido fólico suplementar nas concentrações totais de folato na mucosa colônica, medindo os níveis de folato. Os objetivos secundários incluem avaliar o impacto de 0 e 400 µg de ácido fólico suplementar na regulação de PCFT e RFC no íleo e no cólon, avaliando a expressão de transcritos de mRNA e proteínas e determinando o grau em que GCPII e GGH estão presentes no lúmen do íleo e cólon pela quantificação da atividade enzimática e expressão de transcritos de mRNA e proteínas. Para conseguir isso, um ensaio clínico randomizado aberto longitudinal de 16 semanas será conduzido. O recrutamento e a triagem exigirão três etapas separadas, compostas por um convite inicial para participar, seguido por uma sessão de triagem por telefone para determinar a elegibilidade e, finalmente, uma visita de estudo pessoal antes da inscrição na fase de intervenção do estudo. Uma vez inscritos, os participantes serão solicitados a seguir uma dieta pobre em ácido fólico sintético durante o estudo. Na inscrição, os indivíduos serão randomizados para receber um suplemento multivitamínico e 0 ou 400 µg de ácido fólico. As visitas de estudo de acompanhamento ocorrerão na semana 8 e na semana 16, onde medidas antropométricas, sangue e biópsias de tecido colônico (somente na semana 16) do íleo terminal, ceco, cólon ascendente e cólon descendente serão coletados para análise. Recordatórios alimentares de 24 horas serão coletados ao longo do estudo para observar folato e ingestão calórica. O plasma, os níveis de folato nas hemácias e o conteúdo de folato na mucosa colônica serão determinados por meio de ensaio microbiano. A atividade das enzimas GCPII e GGH será determinada pelo método de Krumdieck e Baugh com modificações. A expressão de PCFT e RFC será determinada via PCR semi-quantitativo em tempo real e as amostras de proteínas serão extraídas em análise de Western Blot usando lise RIPA e tampão de extração. O estudo proposto aprofundará nossa compreensão dos processos fundamentais do metabolismo e absorção do folato no cólon. Os resultados deste estudo podem ajudar a estabelecer a ingestão ideal de folato na dieta, atendendo às necessidades dos seres humanos, sem os riscos potenciais à saúde relacionados à superexposição ao folato.