Amplification polyvalente Détection d'une seule molécule dans la biopsie liquide (VerSiLiB)

La détection robuste de molécules uniques dans des fluides biologiques complexes est l'objectif ultime dans le domaine de l'analyse des biomarqueurs de maladies.

Classiquement, pour permettre l'analyse quantitative de molécules individuelles dans des volumes macroscopiques, la pré-concentration de l'analyte et le partitionnement de l'échantillon dans les compartiments fL-nL ont été combinés avec l'amplification des événements de reconnaissance spécifiques. Dans ces configurations, la détection positive ou négative du signal de fluorescence est déclenchée par des réactions enzymatiques se produisant dans chaque compartiment.

La lecture binaire basée sur les statistiques de Poisson quantifie les concentrations ultra-faibles de molécules d'analyte. Cette approche a été adoptée pour l'analyse des acides nucléiques dans la PCR numérique actuelle et est également disponible pour les protéines dans une technique appelée ELISA numérique.

L'objectif de VerSiLiB est de développer une stratégie d'amplification sans enzyme pour l'analyse des analytes de protéines et d'acides nucléiques avec la plate-forme numérique unique qui offre des moyens d'accéder à des informations supplémentaires sur les analytes cibles non réalisables avec les technologies actuelles. La méthode est basée sur une nouvelle amplification de transport médiée par affinité, où l'interaction d'affinité de l'analyte cible avec un ligand spécifique attaché à un transporteur de nanoparticules magnétiques s'accompagne d'une navette rapide de traceurs fluorescents qui servent de rapporteurs. En appliquant un champ magnétique externe, les traceurs sont transportés du côté de stockage du traceur (où ils sont sombres) au côté actif du traceur (où ils deviennent brillants) uniquement si l'analyte cible est présent dans le petit compartiment de réaction. Des nanostructures plasmoniques sur mesure seront préparées sur les côtés stockage et actif du compartiment pour rendre le traceur sombre ou brillant. L'objectif est d'effectuer la validation technologique de la nouvelle plateforme d'amplification protéogénomique VerSiLiB dans la gestion du cancer à l'aide d'échantillons de biopsie liquide biobanqués.