Detecção de Molécula Única de Amplificação Versátil em Biópsia Líquida (VerSiLiB)

A detecção robusta de moléculas únicas em fluidos biológicos complexos é o objetivo final no campo da análise de biomarcadores de doenças.

Convencionalmente, para permitir a análise quantitativa de moléculas individuais em volumes macroscópicos, a pré-concentração do analito e o particionamento da amostra em compartimentos fL-nL foram combinados com a amplificação dos eventos de reconhecimento específicos. Nessas configurações, a detecção positiva ou negativa do sinal de fluorescência é desencadeada por reações enzimáticas que ocorrem em cada compartimento.

A leitura binária baseada em estatísticas de Poisson quantifica concentrações ultrabaixas de moléculas de analito. Essa abordagem foi adotada para análise de ácidos nucleicos na PCR digital atual e também está disponível para proteínas em uma técnica cunhada como ELISA digital.

O objetivo do VerSiLiB é desenvolver uma estratégia de amplificação livre de enzimas para a análise de analitos de proteínas e ácidos nucleicos com a plataforma digital única que oferece meios para acessar informações adicionais sobre analitos alvo não alcançáveis ​​com as tecnologias atuais. O método é baseado em uma nova amplificação por transporte mediado por afinidade, em que a interação de afinidade do analito alvo com um ligante específico ligado a um transportador de nanopartículas magnéticas é acompanhada de transporte rápido de marcadores fluorescentes que servem como repórteres. Ao aplicar um campo magnético externo, os traçadores são transportados do lado de armazenamento do traçador (onde são escuros) para o lado ativo do traçador (onde se tornam brilhantes) somente se o analito alvo estiver presente no pequeno compartimento de reação. Nanoestruturas plasmônicas personalizadas serão preparadas no armazenamento e nos lados ativos do compartimento para tornar o traçador escuro ou claro. O objetivo é realizar a validação da tecnologia para a nova plataforma de amplificação proteogenômica VerSiLiB no tratamento do câncer usando amostras de biópsia líquida armazenadas em biobancos.