Veelzijdige versterking Detectie van één molecuul in vloeibare biopsie (VerSiLiB)

Robuuste detectie van afzonderlijke moleculen in complexe biologische vloeistoffen is het ultieme doel op het gebied van biomarkeranalyse voor ziekten.

Conventioneel, om de kwantitatieve analyse van individuele moleculen in macroscopische volumes mogelijk te maken, is preconcentratie van analyt en monsterverdeling in fL-nL-compartimenten gecombineerd met de amplificatie van de specifieke herkenningsgebeurtenissen. In deze opstellingen wordt de positieve of negatieve detectie van het fluorescentiesignaal geactiveerd door enzymatische reacties die in elk compartiment plaatsvinden.

Binaire uitlezing op basis van Poisson-statistieken kwantificeert ultralage concentraties van analytmoleculen. Deze benadering is toegepast voor nucleïnezuuranalyse in de huidige digitale PCR, en is ook beschikbaar voor eiwitten in een techniek die bekend staat als digitale ELISA.

Het doel van VerSiLiB is om een ​​enzymvrije amplificatiestrategie te ontwikkelen voor de analyse van zowel eiwit- als nucleïnezuuranalyten met het enkele digitale platform dat middelen biedt om toegang te krijgen tot aanvullende informatie over doelanalyten die met de huidige technologieën niet haalbaar is. Methode is gebaseerd op nieuwe affiniteitsgemedieerde transportamplificatie, waarbij affiniteitsinteractie van doelanalyt met een specifiek ligand dat aan een magnetische nanodeeltjestransporter is bevestigd, gepaard gaat met snelle pendelen van fluorescerende tracers die als reporters dienen. Door een extern magnetisch veld aan te leggen, worden tracers alleen getransporteerd van de traceropslagzijde (waar ze donker zijn) naar de tracer-actieve kant (waar ze helder worden) als de doelanalyt aanwezig is in het kleine reactiecompartiment. Op maat gemaakte plasmonische nanostructuren zullen worden voorbereid aan de opslag- en actieve zijden van het compartiment om de tracer donker of helder te maken. Het doel is om technologievalidatie uit te voeren voor het nieuwe VerSiLiB proteogenomics-amplificatieplatform bij de behandeling van kanker met behulp van biobanked vloeibare biopsiemonsters.