Rilevamento di una singola molecola di amplificazione versatile nella biopsia liquida (VerSiLiB)

Il rilevamento affidabile di singole molecole in fluidi biologici complessi è l'obiettivo finale nel campo dell'analisi dei biomarcatori delle malattie.

Convenzionalmente, per consentire l'analisi quantitativa di singole molecole in volumi macroscopici, la pre-concentrazione dell'analita e la suddivisione del campione in compartimenti fL-nL sono state combinate con l'amplificazione degli eventi di riconoscimento specifici. In queste configurazioni, il rilevamento positivo o negativo del segnale di fluorescenza viene attivato dalle reazioni enzimatiche che si verificano in ciascun compartimento.

La lettura binaria basata sulle statistiche di Poisson quantifica le concentrazioni ultra basse di molecole di analita. Questo approccio è stato adottato per l'analisi degli acidi nucleici nell'attuale PCR digitale ed è disponibile anche per le proteine ​​in una tecnica denominata ELISA digitale.

L'obiettivo di VerSiLiB è quello di sviluppare una strategia di amplificazione priva di enzimi per l'analisi di analiti di proteine ​​e acidi nucleici con un'unica piattaforma digitale che offra mezzi per accedere a informazioni aggiuntive sugli analiti target non ottenibili con le attuali tecnologie. Il metodo si basa su una nuova amplificazione del trasporto mediato dall'affinità, in cui l'interazione di affinità dell'analita target con un ligando specifico collegato a un trasportatore di nanoparticelle magnetiche è accompagnata da un rapido spostamento di traccianti fluorescenti che fungono da reporter. Applicando un campo magnetico esterno, i traccianti vengono trasportati dal lato di stoccaggio del tracciante (dove sono scuri) al lato attivo del tracciante (dove diventano luminosi) solo se l'analita target è presente nel piccolo compartimento di reazione. Sui lati attivi e di stoccaggio del compartimento verranno preparate nanostrutture plasmoniche su misura per rendere il tracciante scuro o luminoso. L'obiettivo è eseguire la convalida della tecnologia per la nuova piattaforma di amplificazione della proteogenomica VerSiLiB nella gestione del cancro utilizzando campioni di biopsia liquida raccolti in biobanca.