Sokoldalú erősítési egymolekula kimutatás folyadékbiopsziában (VerSiLiB)

A betegségek biomarkeranalízisének területén a végső cél az egyes molekulák robusztus kimutatása összetett biológiai folyadékokban.

Hagyományosan az egyes molekulák makroszkopikus térfogatú kvantitatív elemzésének lehetővé tétele érdekében az analit előkoncentrálását és a minta fL-nL rekeszekre történő felosztását kombinálták a specifikus felismerési események amplifikációjával. Ezekben a beállításokban a fluoreszcens jel pozitív vagy negatív detektálását az egyes kompartmentekben lezajló enzimatikus reakciók váltják ki.

A Poisson-statisztikán alapuló bináris leolvasás az elemzendő molekulák ultraalacsony koncentrációit méri. Ezt a megközelítést alkalmazták a nukleinsavak elemzésére a jelenlegi digitális PCR-ben, és fehérjék esetében is elérhető a digitális ELISA-ként megalkotott technikában.

A VerSiLiB célja egy enzimmentes amplifikációs stratégia kidolgozása a fehérje- és nukleinsav-analitok elemzésére az egyetlen digitális platformon keresztül, amely lehetőséget kínál további információk elérésére a célanalitokról, amelyek a jelenlegi technológiákkal nem érhetők el. A módszer új affinitás-mediált transzport amplifikáción alapul, ahol a célanalit és a mágneses nanorészecske transzporterhez kapcsolódó specifikus ligandum affinitási kölcsönhatása a riporterként szolgáló fluoreszcens nyomjelzők gyors ingadozásával jár együtt. Külső mágneses tér alkalmazásával a nyomjelzők csak akkor kerülnek a nyomjelző tároló oldaláról (ahol sötétek) a nyomjelző aktív oldalára (ahol fényessé válnak), ha a kis reakciótérben a célanalit jelen van. Testreszabott plazmonikus nanostruktúrák készülnek a rekesz tárolójában és aktív oldalán, hogy a nyomjelzőt sötétre vagy fényesre tegyék. A cél az új VerSiLiB proteogenomikai amplifikációs platform technológiai validálása a rákkezelésben biobankban tárolt folyékony biopsziás minták felhasználásával.