Développement d'un dispositif à flux latéral basé sur un aptamère pour la détection au point de soin des herbes médicinales chinoises toxiques (Projet ALPTH) (ALPTH1)

Dans cette étude, nous développerons d'abord un test de diagnostic rapide (LFD) basé sur des aptamères pour la détection au point de soin de l'aconitine, de la benzoylaconine et de l'aconine dans des échantillons d'urine humaine. Nous effectuerons une sélection in vitro d'aptamères de liaison pour chacun des alcaloïdes cibles (aconitine, benzoylaconine et aconine) en utilisant l'évolution systématique de ligands par enrichissement exponentiel (SELEX). Un séquençage à haut débit (HTS) et une analyse bioinformatique seront réalisés pour caractériser les aptamères sélectionnés. Les aptamères sélectionnés seront intégrés dans des dosages par compétition ELISA et LFD. Des échantillons dopés (80 échantillons, comprenant 20 pour chaque alcaloïde cible et 20 témoins) seront utilisés pour étalonner le lecteur LFD et déterminer les seuils de coupure.

Nous mènerons ensuite une étude transversale sur des échantillons d'urine humaine stockés pour évaluer les performances diagnostiques du LFD nouvellement développé. La référence standard sera l'analyse de laboratoire indépendante effectuée par le Centre for PanorOmic Sciences (CPOS) de l'Université de Hong Kong.

Les échantillons d'urine des patients seront stockés à 4°C dans les services d'urgence ou les cliniques de médecine chinoise. Les échantillons seront ensuite transportés au Laboratoire Block de la School of Biomedical Sciences par notre personnel de recherche dans les 12 heures suivant le prélèvement. Les dosages LFD seront effectués par lots avec 5 répétitions. Des aliquotes de 150 µL d'échantillon d'urine des patients seront décongelées sur glace et ajoutées au tampon d'échantillon du LFD. Après l'achèvement de l'écoulement (environ 5 minutes), un lecteur LFD sera utilisé pour scanner les intensités des lignes pour l'analyse statistique et le diagnostic. Les opérateurs des dosages LFD seront en aveugle par rapport aux résultats analytiques du CPOS.

Le critère d'évaluation principal est la précision du LFD nouvellement développé dans la détection de l'aconitine, de la benzoylaconine et de l'aconine dans les échantillons d'urine humaine. Les critères d'évaluation secondaires incluent d'autres mesures diagnostiques, telles que la sensibilité, la spécificité, les valeurs prédictives positive et négative, les rapports de vraisemblance positif et négatif, l'aire sous la courbe ROC et leurs intervalles de confiance à 95 % respectifs. Nous faisons l'hypothèse que le LFD peut atteindre une haute précision diagnostique, avec une somme des bornes inférieures des IC à 95 % de la sensibilité et de la spécificité dépassant 1,75.

L'étude sera menée en pleine conformité avec la Déclaration d'Helsinki. Les risques liés à la participation à cette étude seront minimes puisque les participants recrutés doivent uniquement fournir des échantillons d'urine. Cette étude respectera également les directives de sécurité de la politique de biosécurité de l'Université de Hong Kong.