Desarrollo de un Dispositivo de Flujo Lateral Basado en Aptámeros para la Detección en el Punto de Atención de Hierbas de Medicina China Tóxicas (Proyecto ALPTH) (ALPTH1)

En este estudio, primero desarrollaremos una LFD basada en aptámeros para la detección en el punto de atención de aconitina, benzoylaconina y aconina en muestras de orina humana. Realizaremos una selección in vitro de aptámeros de unión para cada uno de los alcaloides objetivo (aconitina, benzoylaconina y aconina) utilizando la evolución sistemática de ligandos por enriquecimiento exponencial (SELEX). Se llevará a cabo secuenciación de alto rendimiento (HTS) y análisis bioinformático para caracterizar los aptámeros seleccionados. Los aptámeros seleccionados se integrarán en ensayos de competición ELISA y LFD. Se utilizarán muestras espiculadas (80 muestras, incluidas 20 para cada alcaloide objetivo y 20 controles) para calibrar el lector LFD y determinar los puntos de corte.

Luego realizaremos un estudio transversal en muestras de orina humana almacenadas para evaluar el rendimiento diagnóstico de la LFD recién desarrollada. El estándar de oro será el análisis de laboratorio independiente realizado por el Centro de Ciencias PanorOmicas (CPOS) de la Universidad de Hong Kong.

Las muestras de orina de pacientes se almacenarán a 4°C en departamentos de emergencia o clínicas de medicina china. Las muestras serán transportadas al Laboratorio de la Escuela de Ciencias Biomédicas por nuestro personal de investigación dentro de las 12 horas posteriores a la recolección. Los ensayos LFD se realizarán en lotes con 5 réplicas. Se descongelarán alícuotas de 150 µL de la muestra de orina de los pacientes en hielo y se agregarán a la almohadilla de muestra de la LFD. Una vez completado el flujo (aproximadamente 5 minutos), se utilizará un lector LFD para escanear las intensidades de línea para el análisis estadístico y el diagnóstico. Los operadores de los ensayos LFD estarán cegados a los resultados analíticos del CPOS.

El resultado principal es la precisión de la LFD recién desarrollada en la detección de aconitina, benzoylaconina y aconina en muestras de orina humana. Los resultados secundarios incluyen otras métricas diagnósticas, como sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivo y negativo, cocientes de verosimilitud positivo y negativo, el área bajo la curva característica de operación del receptor y sus respectivos intervalos de confianza del 95% (IC). Hipótesis que la LFD puede alcanzar una alta precisión diagnóstica, con una suma de los límites inferiores de los IC del 95% de sensibilidad y especificidad que exceda 1.75.

El estudio se llevará a cabo en pleno cumplimiento de la Declaración de Helsinki. Los riesgos de participar en este estudio serán mínimos, ya que los participantes reclutados solo necesitan enviar muestras de orina. Este estudio también se adherirá a las pautas de seguridad de la Política de Seguridad Biológica de la Universidad de Hong Kong.