Desenvolvimento de um Dispositivo de Fluxo Lateral Baseado em Aptâmero para Deteção de Ervas Medicinais Chinesas Tóxicas em Ponto de Cuidado (Projeto ALPTH) (ALPTH1)

Neste estudo, desenvolveremos primeiro um LFD baseado em aptâmeros para deteção de aconitina, benzolaconina e aconina em amostras de urina humana no ponto de atendimento. Realizaremos a seleção in vitro de aptâmeros de ligação para cada um dos alcaloides-alvo (aconitina, benzolaconina e aconina) utilizando a evolução sistemática de ligantes por enriquecimento exponencial (SELEX). Será realizado sequenciamento de alto débito (HTS) e análise bioinformática para caracterizar os aptâmeros selecionados. Os aptâmeros selecionados serão integrados em ensaios de competição ELISA e LFD. Amostras enriquecidas (80 amostras, incluindo 20 para cada alcaloide-alvo e 20 controlos) serão utilizadas para calibrar o leitor de LFD e determinar os pontos de corte.

Em seguida, conduziremos um estudo transversal em amostras de urina humana armazenadas para avaliar o desempenho diagnóstico do LFD recém-desenvolvido. O padrão de ouro será a análise laboratorial independente pelo Centro de Ciências PanorOmicas (CPOS) da Universidade de Hong Kong.

As amostras de urina dos pacientes serão armazenadas a 4°C em departamentos de emergência ou clínicas de medicina chinesa. As amostras serão então transportadas para o Bloco Laboratorial da Escola de Ciências Biomédicas pela nossa equipa de investigação dentro de 12 horas após a recolha. Os ensaios de LFD serão realizados em lote com 5 réplicas. Alíquotas de 150 µL da amostra de urina dos pacientes serão descongeladas em gelo e adicionadas ao bloco de amostra do LFD. Após a conclusão do fluxo (aproximadamente 5 minutos), um leitor de LFD será utilizado para digitalizar as intensidades das linhas para análise estatística e diagnóstico. Os operadores dos ensaios de LFD não terão conhecimento dos resultados analíticos do CPOS.

O resultado primário é a precisão do LFD recém-desenvolvido na deteção de aconitina, benzolaconina e aconina em amostras de urina humana. Os resultados secundários incluem outras métricas de diagnóstico, como sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivos e negativos, rácios de verosimilhança positivos e negativos, a área sob a curva de características de operação do recetor e os respetivos intervalos de confiança de 95% (ICs). Hipotetizamos que o LFD pode alcançar uma elevada precisão diagnóstica, com uma soma dos limites inferiores dos ICs de 95% de sensibilidade e especificidade superior a 1,75.

O estudo será conduzido em total conformidade com a Declaração de Helsínquia. Os riscos de participar neste estudo serão mínimos, uma vez que os participantes recrutados apenas precisam de submeter amostras de urina. Este estudo também aderirá às diretrizes de segurança da Política de Segurança Biológica da Universidade de Hong Kong.