Ontwikkeling van een Aptameer-gebaseerde Laterale Flow Test voor Punt-van-zorg Detectie van Giftige Chinese Geneeskrachtige Kruiden (ALPTH Project) (ALPTH1)

In deze studie zullen we eerst een op aptameren gebaseerde LFD ontwikkelen voor point-of-care detectie van aconitine, benzoylaconine en aconine in humane urinemonsters. We zullen in vitro selectie van bindende aptameren voor elk van de doelalkaloïden (aconitine, benzoylaconine en aconine) uitvoeren met behulp van systematische evolutie van liganden door exponentiële verrijking (SELEX). Hoge doorvoer sequencing (HTS) en bioinformatica-analyse zullen worden uitgevoerd om de geselecteerde aptameren te karakteriseren. De geselecteerde aptameren zullen worden geïntegreerd in ELISA- en LFD-competitie-assays. Gespikte monsters (80 monsters, inclusief 20 voor elke doelalkaloïde en 20 controles) zullen worden gebruikt voor het kalibreren van de LFD-lezer en het bepalen van de afkapwaarden.

Vervolgens zullen we een cross-sectionele studie uitvoeren op opgeslagen humane urinemonsters om de diagnostische prestaties van de nieuw ontwikkelde LFD te evalueren. De gouden standaard zal de onafhankelijke laboratoriumanalyse zijn door het Centre for PanorOmic Sciences (CPOS) aan de Universiteit van Hong Kong.

Patiënturinemonsters worden opgeslagen bij 4°C in spoedeisende hulpafdelingen of klinieken voor Chinese geneeskunde. De monsters worden vervolgens binnen 12 uur na afname door ons onderzoekspersoneel getransporteerd naar het Laboratoriumblok van de School of Biomedical Sciences. LFD-assays worden in batches uitgevoerd met 5 replicaten. 150 µL aliquots van patiënturinemonsters worden ontdooid op ijs en toegevoegd aan de LFD-monsterpad. Nadat de stroming is voltooid (ongeveer 5 minuten), wordt een LFD-lezer gebruikt om de lijnintensiteiten te scannen voor statistische analyse en diagnose. De operators van de LFD-assays zijn geblindeerd voor de CPOS-analyseresultaten.

De primaire uitkomst is de nauwkeurigheid van de nieuw ontwikkelde LFD bij het detecteren van aconitine, benzoylaconine en aconine in humane urinemonsters. De secundaire uitkomsten omvatten andere diagnostische metrieken, zoals gevoeligheid, specificiteit, positieve en negatieve voorspellende waarden, positieve en negatieve likelihood ratio's, het gebied onder de receiver operating characteristic curve en hun respectievelijke 95% betrouwbaarheidsintervallen (BI's). We veronderstellen dat de LFD een hoge diagnostische nauwkeurigheid kan bereiken, met een som van de ondergrenzen van de gevoeligheid en specificiteit 95% BI's groter dan 1,75.

De studie wordt volledig uitgevoerd in overeenstemming met de Verklaring van Helsinki. De risico's van deelname aan deze studie zijn minimaal omdat de geworven deelnemers alleen urinemonsters hoeven in te leveren. Deze studie zal zich ook houden aan de veiligheidsrichtlijnen van het Biological Safety Policy van de Universiteit van Hong Kong.