Az idarubicin felülmúlja az MDR1 által kiváltott kemorezisztenciát a daunorubicinnél magasabb indukciós remissziós aránnyal és minőséggel akut myeloid leukémiás betegekben

Az akut myeloid leukémia (AML) hosszú távú túlélési aránya jelentősen meghosszabbodott a kemoterápiás protokollok és a hemopoetikus őssejt-transzplantáció javulása miatt. Azonban a refrakter AML-ben szenvedő betegek körülbelül 20-40%-a nem éri el a teljes remissziót (CR), és a CR-betegek körülbelül 50%-a végül visszaesik. 1-3 A refrakter és relapszusos AML betegek prognózisa nagyon rossz, ezért az AML kemoterápiájában a refrakteritás és a relapszus jelenti a legnagyobb kihívást.

A kemorezisztencia az AML kezelés sikerének egyik fő akadálya.4 Az AML kemorezisztencia egyik fő mediátora a multi-drug rezisztencia-1 (MDR1) gén és az MDR1 fehérje, más néven permeabilitás-glikoprotein vagy P-gp.5,6,7 A leukémiás blasztsejteken végzett vizsgálatok kimutatták, hogy az MDR1 expressziója összefüggést mutat a citosztatikus gyógyszerek alacsonyabb intracelluláris retenciójával, ami a rákos sejtek rezisztenciájához vezet számos, a kemoterápiában általánosan használt rákellenes szerrel szemben. Számos későbbi tanulmány kimutatta az MDR1 expressziós szintjének hatását a leukémiás betegek kezelési válaszára és túlélésére, a kemoterápiával szembeni rezisztencia gyakorisága nőtt az MDR1 expresszió növekedésével.8,9,10 Az MDR1 expressziójának meghatározására szolgáló korábbi módszerek közé tartozott a P-glikoprotein kimutatása áramlási citometriával és/vagy immunhisztokémiával, valamint molekuláris polimeráz láncreakció (PCR) alapú RNS-expressziós vizsgálatokkal. Ezek a vizsgálatok azonban vagy nehezen szabványosíthatónak, vagy unalmasnak bizonyultak, és főként a kvalitatív vagy félkvantitatív vizsgálatokra összpontosítanak. 11,12 A valós idejű fluoreszcens kvantitatív PCR növeli az érzékenységet és megőrzi a magas specificitást. Az amplifikációs termelés szennyezéséből adódó téves pozitivitás hermetizálással is csökkenthető. Az RQ-PCR egy új módszer, amely lehetővé teszi a génexpresszió érzékeny és kvantitatív mérését. 12 Kidolgoztunk egy RQ-PCR módszert az MDR1 gén expressziójának meghatározására. Pilóta vizsgálatot végeztünk AML-betegek kis csoportjával, hogy meghatározzuk az MDR1 expressziója és az AML-es betegek CR-aránya közötti összefüggést. Az adatok azt mutatják, hogy az AML legtöbb esetben MDR1 expressziót találtak. Az MDR1 expressziós szintje azonban esetenként nagymértékben változik. Ez az eredmény azt jelzi, hogy az RQ-PCR módszer pontos kvantitatív mérést biztosít az MDR1 expressziós szintjének kimutatására különböző AML esetekben, amelyek mindketten pozitívak voltak kvalitatív RT-PCR módszerrel. 13,14 A kísérleti eredmények azt mutatták, hogy az indukciós terápiára adott teljes válaszarányt veszélyeztette az MDR1 magas szintű expressziója. 15

A minimális reziduális betegség (MRD) a leukémia visszaesésének fő oka. Beszámoltak arról, hogy a humán leukémia kezelésének intenzitása az MRD gén expressziós állapota alapján értékelhető. Azonban az akut leukémiák több mint 50%-ában, különösen az AML-ben, hiányoznak az ismert genetikai léziók vagy az MRD monitorozására alkalmas klonegén markerek. A WT1 gén a 11p13 kromoszómán található, amely cink-ujj transzkripciós faktort kódol, és a legtöbb AML-es betegben azonosították. Beszámoltak arról, hogy a WT1 szintek kimutatása hatékonyan nyomon követheti az MRD expressziós állapotát az AML-ben.16,17 Ezért a WT1 expresszió felhasználható az MRD monitorozására és a remisszió minőségének értékelésére AML betegekben. A WT1 szintek kimutatásával értékelhetjük a különböző indukciós terápiák hatékonyságát.

Többszörös fluoreszcens kvantitatív PCR alkalmazásával több célgén egyidejűleg és mennyiségileg amplifikálható. Ezért a többszörös fluoreszcens kvantitatív PCR alkalmasabb klinikai alkalmazásra. Ez a technológia nemcsak nagyobb pontosságot, specifikusságot és reprodukálhatóságot biztosít, hanem leegyszerűsíti az eljárást és csökkenti a mérési költségeket. Csoportunkban megalkottuk az MDR1 és WT1 gén rekombináns plazmidjait, és kidolgoztuk a többszörös fluoreszcens kvantitatív PCR módszertanát is.

A magas MDR1 génexpresszió az AML-rezisztencia általános jellemzője a hagyományos kemoterápiás kezelésekkel szemben.18,19 Az MDR leküzdésére szolgáló egyik stratégia a gyógyszeres zsíroldhatóság növelése és az intracelluláris gyógyszerkoncentráció emelése, hogy ellensúlyozzuk a P-glikoprotein által pumpált gyógyszerkiáramlást. Az idarubicin (IDA), egy új antraciklin, a hagyományos marcellomicinhez képest jobban átjárja a zsíroldhatóságot, és könnyen áthatol a sejtmembránon. Ezenkívül az IDA in vivo metabolitja (4-IDA) ugyanazzal az antineoplasztikus aktivitással rendelkezik, mint az IDA, és hosszabb in vivo felezési idejével. A vér-agy gáton is áthatolhat. Ennek eredményeként az IDA erősebb antileukémia aktivitással rendelkezik, mint más marcellomicin, és részben képes legyőzni a P-glikoprotein által közvetített gyógyszerrezisztenciát.20, 21 A közelmúltban végzett kísérleti vizsgálatunkban 160 de novo AML-es beteg előkezelt csontvelő-mintáiban mutattuk ki az MDR1 expresszióját, és a de novo AML-es esetekben az MDR1/GAPDH arány medián értéke 0,016 (0-81,865) volt. Az MDR1 génexpresszió medián értékét tekintettük a magas vagy alacsony MDR1 génexpressziós szintek határértékének. A magas MDR1-expressziójú betegeknél alacsonyabb CR-arányt (61,3%) figyeltek meg az alacsony MDR1-expressziójú betegekhez képest (80,0%). P=0,009). Ebben a retrospektív kísérleti vizsgálatban 123 beteg kapott daunorubicint (DNR 35-45 mg/m2/nap, 3 nap) vagy idarubicint (IDA 6-8 mg/m2/nap, 3 nap) citarabinnal (Ara-c100-200) kombinálva. mg/m2/d, 7 nap) a remisszió indukciója tekintetében, és szignifikáns különbséget figyeltek meg 2 kemoterápiás kúra után az IA kezelést (57 eset) és DA kezelést (66 eset) kapók között a CR arány tekintetében (80,7% vs 57,6% , P=0,006). Szignifikáns különbséget fedeztünk fel a két kezelési kar között a CR arány tekintetében is (75,9% vs 43,6%, P=0,011) azoknál, akiknél magas MDR1 expressziójú AML volt. Adataink azt mutatják, hogy az IDA képes legyőzni az MDR1 által kiváltott kemorezisztenciát magasabb CR aránnyal, mint a DNR de novo magas MDR1 expressziójú AML-es betegekben. Ezek az eredmények megalapozzák egy randomizált, prospektív vizsgálat kidolgozását, amely az IA-sémák és a DA-sémák CR-arányát hasonlítja össze de novo-ban. novo AML-betegek magas MDR1 expressziójával, és annak megállapítása, hogy az Idarubicin képes-e legyőzni az MDR1 által kiváltott kemorezisztenciát magasabb indukciós remissziós aránnyal, mint a daunorubicin de novo akut myeloid leukaemiás betegekben. Feltételeztük, hogy a magas MDR1-es betegek csoportjában az IA-kezelésben a kedvezőbb kimenetel magasabb remissziós aránnyal járhat.

Beszámoltak arról, hogy az alacsonyabb MRD-szintet elért AML-es betegeknél rendkívül alacsonyabb volt a visszaesési arány. Arról is beszámoltak, hogy az IA-sémával kezelt betegek hosszú távú túlélése szignifikánsan magasabb volt, mint a DA-sémával kezelt betegeknél 0,22-24 Ezért azt feltételeztük, hogy az IA csoportban a kedvezőbb kimenetel alacsonyabb MRD-szinttel és magasabb remissziós minőséggel járhat. Ennek a tanulmánynak az a célja, hogy prospektív elemzést végezzen a WT1 és MDR1 génexpressziós szintjének változásáról külön-külön indukciós IA vagy DA kezelés után, hogy megállapítsa, hogy az IA-sémával végzett indukciós terápia alacsonyabb MRD-szinttel és magasabb remissziós minőséggel rendelkezik-e, mint a DA-sémának. .