Идарубицин преодолевает химиорезистентность, вызванную MDR1, с более высокой частотой и качеством индукционной ремиссии, чем даунорубицин, у пациентов с острым миелоидным лейкозом

Долгосрочная выживаемость при остром миелоидном лейкозе (ОМЛ) была значительно увеличена благодаря совершенствованию химиотерапевтических протоколов и трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. Однако примерно у 20-40% пациентов с рефрактерным ОМЛ не удается достичь полной ремиссии (ПР), и примерно у 50% пациентов с ПР в конечном итоге возникает рецидив. 1-3 Пациенты с рефрактерным и рецидивирующим ОМЛ имеют очень плохой прогноз, поэтому рефрактерность и рецидив являются основными проблемами для химиотерапии ОМЛ.

Химиорезистентность является одним из основных препятствий на пути к успеху лечения ОМЛ.4 Одним из основных медиаторов химиорезистентности ОМЛ является ген множественной лекарственной устойчивости-1 (MDR1) и белок MDR1, также известный как гликопротеин проницаемости или P-gp.5,6,7 Исследования на лейкемических бластных клетках продемонстрировали связь экспрессии MDR1 с более низким внутриклеточным удержанием цитостатических препаратов, что приводит к устойчивости раковых клеток к нескольким широко используемым противоопухолевым препаратам в химиотерапии. Несколько последующих исследований показали влияние уровней экспрессии MDR1 на ответ на лечение и выживаемость больных лейкемией, частота резистентности к химиотерапии увеличивалась с увеличением экспрессии MDR1.8,9,10 Предыдущие методы определения экспрессии MDR1 включали демонстрацию P-гликопротеина с помощью проточной цитометрии и/или иммуногистохимии, а также анализ экспрессии РНК на основе молекулярной полимеразной цепной реакции (ПЦР). Однако оказалось, что эти тесты либо сложно стандартизировать, либо утомительно выполнять, и они в основном ориентированы на качественные или полуколичественные анализы. 11,12 Количественная ПЦР с флуоресценцией в реальном времени повысит чувствительность, а также сохранит высокую специфичность. Ложное срабатывание, вызванное загрязнением производства амплификации, также может быть уменьшено с помощью операции герметизации. RQ-PCR — это новая методология, которая позволяет проводить точные и количественные измерения экспрессии генов. 12 Мы разработали метод RQ-PCR для определения экспрессии гена MDR1. Мы провели пилотное исследование с небольшой группой пациентов с ОМЛ, чтобы определить взаимосвязь экспрессии MDR1 и уровня CR у пациентов с ОМЛ. Данные показывают, что экспрессия MDR1 была обнаружена в большинстве случаев ОМЛ. Однако уровни экспрессии MDR1 сильно различаются от случая к случаю. Этот результат показал, что метод RQ-PCR обеспечит точное количественное измерение для определения уровня экспрессии MDR1 в различных случаях AML, которые оба были положительными с помощью качественного метода RT-PCR. 13,14 Экспериментальные результаты показали, что частота полного ответа на индукционную терапию была снижена из-за экспрессии высоких уровней MDR1. 15

Минимальная остаточная болезнь (МОБ) является основной причиной рецидива лейкемии. Сообщалось, что интенсивность лечения лейкемии человека можно оценить по статусу экспрессии гена MRD. Однако более чем в 50% острых лейкозов, особенно при ОМЛ, отсутствуют известные генетические повреждения или клоногенные маркеры, подходящие для мониторинга МОБ. Ген WT1 расположен на хромосоме 11p13, кодирующей фактор транскрипции цинковых пальцев, идентифицированный у большинства пациентов с ОМЛ. Сообщалось, что обнаружение уровней WT1 может эффективно контролировать статус экспрессии MRD при ОМЛ.16,17 Таким образом, экспрессию WT1 можно использовать для мониторинга МОБ и оценки качества ремиссии у пациентов с ОМЛ. Определяя уровни WT1, мы можем оценить эффективность различных методов индукционной терапии.

Используя множественную количественную флуоресцентную ПЦР, можно одновременно и количественно амплифицировать несколько генов-мишеней. Поэтому количественная ПЦР с множественной флуоресценцией больше подходит для клинического применения. Эта технология не только обеспечит более высокую точность, специфичность и воспроизводимость, но также упростит процедуру и снизит стоимость измерений. В нашей группе были сконструированы рекомбинантные плазмиды гена MDR1 и WT1, а также разработана методика множественной флуоресцентной количественной ПЦР.14

Высокая экспрессия гена MDR1 является общим признаком резистентности ОМЛ к обычному химиотерапевтическому режиму.18,19 Одной из стратегий преодоления МЛУ является увеличение липорастворимости фармацевтических препаратов и повышение внутриклеточной концентрации лекарственного средства, чтобы противодействовать оттоку лекарственного средства, вызываемому Р-гликопротеином. Идарубицин (IDA), новый антрациклин, имеет более повышенную липорастворимость и может легко проникать через клеточную мембрану по сравнению с традиционным марцелломицином. Кроме того, метаболит ЖДА in vivo (4-ИДА) обладает той же противоопухолевой активностью, что и ЖДА, и более длительным периодом полувыведения in vivo. Он также может проникать через гематоэнцефалический барьер. В результате IDA обладает более сильной противолейкемической активностью, чем другие марцелломицины, и может частично преодолевать лекарственную устойчивость, опосредованную P-гликопротеином.20, 21 В нашем недавнем пилотном исследовании мы обнаружили экспрессию MDR1 в предварительно обработанных образцах костного мозга от 160 пациентов с ОМЛ de novo, и среднее значение отношения MDR1/GAPDH в случаях ОМЛ de novo составило 0,016 (0-81,865). Среднее значение экспрессии гена MDR1 принимали за точку отсечения высокого или низкого уровня экспрессии гена MDR1. У пациентов с высокой экспрессией MDR1 наблюдалась более низкая частота полного ответа (61,3%) по сравнению с пациентами с низкой экспрессией MDR1 (80,0%, Р = 0,009). В этом ретроспективном пилотном исследовании 123 пациента получали даунорубицин (DNR 35~45 мг/м2/сут, 3 дня) или идарубицин (IDA 6~8 мг/м2/сут, 3 дня) в комбинации с цитарабином (Ara-c100~200). мг/м2/сут, 7 дней) для индукции ремиссии, а значительная разница также наблюдалась после 2 курсов химиотерапии между теми, кто получал режим ИА (57 случаев) и режим ДА (66 случаев) в отношении частоты полного ответа (80,7% против 57,6% , Р=0,006). Значительная разница также может быть обнаружена между двумя группами лечения в отношении частоты полного ответа (75,9% против 43,6%, P = 0,011) у пациентов с ОМЛ с высокой экспрессией MDR1. Наши данные показывают, что IDA может преодолевать индуцированную MDR1 химиорезистентность с более высокой частотой CR, чем DNR, у пациентов с ОМЛ de novo с высокой экспрессией MDR1. novo пациентов с ОМЛ с высокой экспрессией MDR1 и определить, может ли идарубицин преодолевать индуцированную MDR1 химиорезистентность с более высокой частотой индукции ремиссии, чем даунорубицин у пациентов с острым миелоидным лейкозом de novo. Мы предположили, что более благоприятный исход в группе пациентов с высоким МЛУ-1 с режимом ИА может быть связан с более высокой частотой ремиссии.

Сообщалось, что пациенты с ОМЛ, достигшие более низкого уровня МОБ, имели чрезвычайно низкую частоту рецидивов. Также сообщалось, что пациенты, получавшие схему ИА, имели значительно более высокую долгосрочную выживаемость, чем пациенты, получавшие схему ДА [22–24]. Поэтому мы предположили, что более благоприятный исход в группе ИА может быть связан с более низким уровнем МОБ и более высоким качеством ремиссии. Это исследование также предназначено для проведения проспективного анализа изменения уровня экспрессии генов WT1 и MDR1 после индукционной терапии с ИА или ДА по отдельности, чтобы определить, имеет ли индукционная терапия со схемой ИА более низкий уровень МОБ и более высокое качество ремиссии, чем у схемы ДА. .