Glucagone come il peptide-1 nel condizionamento ischemico remoto

Il meccanismo alla base dell'effetto cardioprotettivo del precondizionamento remoto non è completamente compreso. I dati di studi sperimentali suggeriscono che una combinazione di fattori umorali e neurogenici mediano la transizione dei segnali protettivi dai tessuti periferici al miocardio. Un importante passo avanti nella comprensione della segnalazione è stata l'osservazione che è coinvolta l'attivazione del nervo vagale. È probabile che le principali vie di segnalazione nell'organo bersaglio siano mediate dall'endotelio vascolare, che è noto per svolgere un ruolo importante durante il primo periodo di riperfusione. Pertanto, studi sugli animali hanno dimostrato che RIPC stimola la produzione endoteliale di ossido nitrico secondaria alla down-regulation dell'arginasi. Non è chiaro, tuttavia, se RIPC tramite l'attivazione dell'ossido nitrico endoteliale preservi la funzione endoteliale nell'uomo. Ulteriori dati indicano fortemente che il peptide-1 simile al glucagone (GLP-1) fornisce protezione contro il danno da ischemia-riperfusione nei modelli di animali da esperimento e negli studi clinici. Tuttavia, il ruolo del GLP-1 nell'effetto protettivo del RIPC non è stato precedentemente studiato. Il presente studio è stato quindi progettato per determinare il coinvolgimento di GLP-1 nella protezione indotta da RIPC tramite attivazione endoteliale nell'uomo. A tal fine utilizziamo un modello di danno da ischemia-riperfusione reversibile nell'avambraccio e l'antagonista GLP-1 exendin 9-39 (Ex 9-39).

Obiettivo Testare l'ipotesi che GLP-1 sia un mediatore della protezione della funzione endoteliale indotta da RIPC nell'ischemia-riperfusione.

Endpoint Primario: variazione della vasodilatazione endotelio-dipendente indotta da RIPC Secondario: variazione del GLP-1 plasmatico

Soggetti dello studio Lo studio è condotto su volontari sani di età compresa tra 18 e 60 anni. Tutti i soggetti saranno sottoposti a uno screening che includa la storia medica e l'esame clinico di routine e dovrebbero essere privi di farmaci. Un campione di sangue di screening include emoglobina, conta leucocitaria e piastrinica, glicemia a digiuno, HbA1c, colesterolo totale, colesterolo LDL, colesterolo HDL, trigliceridi.

Metodi La funzione endoteliale è determinata nell'arteria brachiale mediante dilatazione flusso-mediata (FMD). In breve, l'esame non invasivo dell'arteria radiale del braccio non dominante viene eseguito con un trasduttore lineare da 11 MHz (uscita 12 MHz) collegato a un Vivid E9. Il trasduttore è collegato a un treppiede flessibile per impedire il movimento della sonda. Le immagini vengono registrate e salvate ogni tre secondi alla fine della diastole. Il diametro basale dell'arteria radiale viene registrato per un minuto e definito come media di 20 immagini. Un bracciale per la pressione sanguigna viene posizionato intorno alla parte superiore dell'avambraccio, che viene gonfiato a 30 mmHg sopra la pressione sistolica o 200 mmHg per 5 min. Il diametro dell'arteria radiale viene registrato continuamente per 3 minuti durante l'iperemia dopo lo sgonfiamento della cuffia. I tre riquadri che mostrano la massima dilatazione alla fine della diastole (attivata dall'ECG) vengono utilizzati per calcolare un diametro medio. Tutte le immagini vengono analizzate con l'analizzatore brachiale (Medical Imaging Applications, Iowa City, IA, USA). L'afta epizootica viene calcolata come aumento percentuale del diametro rispetto al diametro basale secondo la seguente formula: diametro dopo lo sgonfiaggio della cuffia-diametro basale/diametro basale x 100. Tutte le valutazioni vengono eseguite in cieco. Una diminuzione della funzione endoteliale è un risultato stabilito del danno da riperfusione.

Protocollo di studio Dopo aver determinato l'afta epizootica basale, l'ischemia viene indotta gonfiando un bracciale a 200 mmHg sulla parte superiore del braccio per 20 minuti, seguito da riperfusione. L'afta epizootica viene determinata nuovamente 20 minuti dopo l'inizio della riperfusione. Ogni individuo viene esaminato in tre occasioni: A) ischemia-riperfusione senza intervento, B) ischemia-riperfusione con intervento di RIPC, C) ischemia-riperfusione con RIPC e somministrazione di Ex 9-39. L'ordine dell'esame viene assegnato casualmente estraendo uno dei tre numeri. La RIPC viene eseguita in cicli di 5 minuti di gonfiaggio (200 mmHg o 20 mmHg al di sopra della pressione arteriosa sistolica) e 5 minuti di sgonfiaggio di un bracciale automatico per la pressione sanguigna intorno alla coscia sinistra. Vengono eseguiti due cicli durante l'ischemia e 2 cicli immediatamente dopo la riperfusione. L'antagonista del recettore del GLP-1 Ex 9-39 viene somministrato in bolo di 7500 pmol/kg seguito da un'infusione endovenosa che inizia 15 minuti prima dell'afta epizootica iniziale e viene mantenuta fino alla seconda afta epizootica a una velocità di 500 pmol/kg/min. La dose si basa su precedenti esperienze di studi sull'uomo.

Durante i protocolli sperimentali vengono raccolti i seguenti campioni di sangue per l'analisi di glucosio, insulina, GLP-1.