Identificazione e caratterizzazione dei fattori predittivi dell'insorgenza di metastasi ossee nei pazienti oncologici (PreMetOn)

MATERIALI E METODI: 1) Prelievo di sangue intero dalla vena periferica e separazione del plasma da pazienti con tumore metastatico arruolati; 2) Isolamento degli esosomi tumorali circolanti dal plasma di pazienti oncologici (Kit Invitrogen: Total Exosome Isolation Reagent); 3) Saranno utilizzati metodi di sequenziamento di nuova generazione (NGS) per valutare i profili di espressione di miRNA isolati da esosomi tumorali circolanti (MiSeq Illumina System); 4) Verranno utilizzati metodi di spettrometria di massa per l'analisi del proteoma di esosomi circolanti isolati dal plasma di pazienti oncologici (Triple TOFF 5600 Plus System E analisi HPLC di peptidi bioattivi e biomarcatori); 5) Colture 3D per lo studio del cross-talk tra esosomi tumorali circolanti (isolati dal plasma dei pazienti) e cellule del tessuto osseo (utilizzando linee cellulari commerciali) come parte del processo metastatico (Cellec perfusion bioreactor BioteK AG).

Procedure di arruolamento: I pazienti ritenuti eleggibili saranno arruolati nello studio, dopo aver fornito un consenso informato scritto.

Raccolta dati: i dati clinici verranno recuperati dal documento di origine del paziente. Verrà fornita una CRF specifica del protocollo che riporterà i risultati delle analisi. È richiesto un CRF e dovrebbe essere compilato per ogni soggetto incluso.

Etica: Il protocollo della sperimentazione clinica ei suoi documenti saranno inviati prima dell'inizio dello studio alle Autorità competenti e ai Comitati etici di ciascun paese partecipante per la loro approvazione. Il ricercatore responsabile assicurerà che questo studio sia condotto in accordo con la Dichiarazione di Helsinki più aggiornata e tutte le leggi internazionali e locali che si applicano alle sperimentazioni cliniche e alla protezione del paziente. Il protocollo è stato scritto e lo studio sarà condotto secondo i principi della linea guida tripartita armonizzata ICH per la buona pratica clinica (rif: http://www.emea.eu.int/pdfs/human/ich/013595en.pdf ).

Consenso informato: tutti i pazienti saranno informati, dallo sperimentatore, degli obiettivi dello studio, dei possibili rischi e benefici che deriveranno dalla partecipazione allo studio. Lo Sperimentatore deve informare chiaramente che il paziente è libero di rifiutare la partecipazione allo studio e che può revocare il consenso in qualsiasi momento e per qualsiasi motivo. Saranno informati della stretta riservatezza dei dati dei loro pazienti, ma che le loro cartelle cliniche possono essere riviste ai fini della sperimentazione da persone autorizzate diverse dal loro medico curante. La procedura di consenso informato deve essere conforme alle linee guida ICH sulla buona pratica clinica. Ciò implica che "il modulo di consenso informato scritto deve essere firmato e datato personalmente dal paziente o dal suo rappresentante legalmente riconosciuto".

Lo sperimentatore deve anche firmare il modulo di consenso informato e conserverà l'originale presso il sito e una copia dell'originale dovrà essere consegnata al paziente.

Il comitato etico competente per ciascuna istituzione partecipante allo studio deve convalidare i documenti di consenso informato locali prima che lo studio possa essere aperto. Si sottolinea che la partecipazione è volontaria e che il paziente può rifiutare un'ulteriore partecipazione allo studio ogni volta che lo desidera. Ciò non pregiudicherà le successive cure del paziente.

Principi generali per la raccolta di materiale biologico umano (HBM): La raccolta di materiale biologico umano (HBM) prevede la raccolta e lo stoccaggio di materiale biologico, materiale biologico residuo o derivati ​​nel rispetto dei requisiti etici e tecnici. Il materiale biologico (prelievi di sangue) sarà centralizzato e conservato presso l'Istituto Ortopedico Rizzoli - Dipartimento Rizzoli-Sicilia, Bagheria (Palermo). Da qui, il materiale biologico verrà utilizzato e conservato secondo le caratteristiche del campione e la normativa applicabile.

Il plasma e gli esosomi circolanti ottenuti dal sangue saranno conservati all'interno di contenitori sterili (falcon, tubi, eppendorf) in un congelatore alla temperatura di -80 °C presso l'Istituto Ortopedico Rizzoli -Dipartimento Rizzoli Sicilia.

I seguenti principi si applicano allo stoccaggio di HBM: (a) L'Istituto Ortopedico Rizzoli avrà una persona designata responsabile della raccolta e fungerà da punto di comunicazione; (b) L'HBM raccolto dovrebbe essere documentato, vale a dire la quantità rimanente e la sua ubicazione. fungere da punto di comunicazione; e (c) Lo stoccaggio e l'uso del materiale biologico avverrà in conformità con gli standard di buona pratica di laboratorio (BPL) e la legislazione applicabile.

Riservatezza: al fine di garantire la riservatezza dei dati della sperimentazione clinica come disposto dalla normativa nazionale ed europea applicabile, i dati saranno accessibili solo allo Sponsor della sperimentazione e ai suoi designati, per le procedure di monitoraggio/audit, allo Sperimentatore e ai collaboratori, al Comitato Etico di ciascun corrispondente sito e l'Azienda Sanitaria. L'investigatore e l'istituzione consentiranno l'accesso ai dati e alla documentazione di origine per il monitoraggio, l'audit, la revisione del comitato etico e le ispezioni dell'autorità sanitaria, ma mantenendo in ogni momento la riservatezza dei dati personali del soggetto come specificato nella normativa applicabile.

Lo Sperimentatore deve garantire che l'anonimato del paziente sia mantenuto in ogni momento e la sua identità deve essere protetta da persone e istituzioni non autorizzate.

Tutti i pazienti inclusi nello studio saranno identificati con un codice numerico, in modo che non vengano raccolti dati personali identificabili. Lo Sperimentatore deve avere e conservare un registro di inclusione dei pazienti dove inserisce i dati anagrafici del paziente: nome, cognome, indirizzo e codice identificativo corrispondente nello studio, questo registro sarà conservato nel Fascicolo dello Sperimentatore.

Politica di pubblicazione e proprietà dei dati: il ricercatore principale dello studio è responsabile della relazione finale, della pubblicazione pubblica tutti i dati raccolti come descritto nel protocollo e si assicurerà che i dati siano riportati in modo responsabile e coerente. In particolare, la pubblicazione dei dati derivanti dal presente studio avverrà indipendentemente dai risultati ottenuti. La trasmissione o diffusione dei dati, mediante pubblicazioni scientifiche e/o presentazione a convegni, congressi e seminari, avverrà esclusivamente a seguito dell'elaborazione meramente statistica degli stessi, ovvero in forma assolutamente anonima. Tutti i dati dello studio sono di proprietà dello sponsor.