タクロリムス後のNFAT調節遺伝子発現

この試験は、前向き縦断研究として実施されます。 この研究は、グラーツ医科大学の外科部門、移植手術部門、およびグラーツ医科大学の血液型血清学および輸血医学部門で実施された単一施設研究です。

グラーツ医科大学移植外科部門の LT 待機リストに載っているすべての患者は、包含基準と除外基準の両方に従ってスクリーニングされます。 研究期間は1年間です。 1 つの NFAT-RGE ベースライン測定は、LT の直前に実行されます。 LT 後の NFAT-RGE 測定は、明確に定義された時点で実行されます。

調査対象母集団。 パイロット試験として、この研究はLTを受ける15人の患者で構成されています

目的:

• LT 後にミコフェノール酸モフェチル (MMF) とステロイドを投与された de-novo TAC 患者では、TAC 摂取の 1.5 時間後に NFAT-RGE と TAC ピークレベルに逆相関があるという仮説を検証する
• NFAT-RGE と TAC (トラフとピーク) レベルの両方を拒絶反応エピソードと TAC 副作用と相関させる

アプローチ：

NFAT-RGE は、LT の直前、LT の 1 日後、1 週間後、2 週間後、および 1、6、12 か月後に 15 人の患者で測定されます。

メソッド。 ヘパリン処理された末梢血は、100 ng/ml ホルボール 12-ミリステート 13-アセテート (PMA) および 5 mcg/ml イオノマイシン (Sigma-Aldrich Corp., St.Louis 、ミズーリ州、米国) 37 ° C で 3 時間。 ex vivo 免疫活性化の後、ACK バッファー (0.15 M NH4CL、1.0 mM KHCO3) で赤血球を溶解した後、1% (w/v) のジチオスリトール (RAS 、ドイツ、マンハイム)、サンプルを-70°Cで凍結します。 解凍後、mRNA は RNA Blood mini Kit (Quiagen) デバイスで、細胞の mRNA 標準プロトコルを使用して分離されます。 RNA は、RT-PCR 用の SuperScript III First-Strand Synthesis System (Invitrogen、life technologies) を使用して逆転写されます。 3 つの NFAT 制御遺伝子 (IFN-γ、IL-2、GM-CSF) は、以前の研究からこのエッセイに適した遺伝子として特定されました [18、26]。 ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦおよび３つの参照遺伝子の標的ｍＲＮＡ配列は、デジタルＰＣＲ（Ｂｉｏｒａｄ）による市販のＰｒｉｍｅＰＣＲ ｄｄＰＣＲ遺伝子発現プローブアッセイ（Ｂｉｏｒａｄ）を使用して増幅される。

TAC 摂取後の RGE は cpeak/c0x100 として計算されます。ここで、c0 は TAC 投与前レベルで調整された転写産物の数であり、cpeak は薬物摂取の 1.5 (c1.5) 時間後の転写産物の数です。