歯科矯正治療中の歯肉溝液の特性評価

歯肉溝液採取の適格基準 イリノイ大学シカゴ校（UIC）歯学部の歯科矯正クリニックで、初回小臼歯抜歯による矯正治療を必要とする 11 ～ 35 歳の健康な非喫煙患者 100 名が、含まれること。 インフォームド・コンセントは患者および親（法定後見人）に提示され、処置前に署名されます。 患者は、同意時に包含基準に関してスクリーニングされます。 軽微な被験者からも書面による同意が得られます。 治療前に、犬歯ブラケット上の既成パワーアームが犬歯の抵抗の中心に近づくように、根の長さと形態を確認するために両方の上顎犬歯の根尖周囲X線写真が撮影されます。 固定式歯科矯正器具（0.018 インチ、MBT 処方）は、プレハブパワーアームを収容するために上顎犬歯ブラケット（Dentsply International、ニューヨーク州ヨーク）の補助垂直スロットとともに被験者に配置されます。 被験者は上顎第一小臼歯の抜歯のために紹介されます。 一時的な固定装置は、固定と参照の目的で、上顎の第 2 小臼歯と上顎の第 1 臼歯の間、歯槽頂から 5 mm の位置に配置されます。 犬歯を後退させる前に、上顎弓の歯を水平にして並べます。 1回 0.016x0.016 ステンレス鋼のアーチワイヤー (Dentsply International) が配置され、一時的な固定装置から犬歯ブラケット上のパワー アームに接続され、適用を可能にした校正済み 70 g ニッケルチタン閉鎖コイル スプリング (Dentsply International) を使用して犬歯の牽引が行われます。歯の抵抗の中心に近い力。

歯肉溝液の採取 患者は歯科用椅子に直立姿勢で座ります。 選択した部位を風乾し、綿ロールで隔離します。 辺縁歯肉に触れずに歯肉縁上のプラークを除去し、紙ストリップの汚染を防ぎます。 吸収紙片を歯溝に静かに置き、吸収された紙片をプールし、２００μｌのリン酸緩衝食塩水を含む滅菌エッペンドルフチューブに入れる。 収集されたサンプルは一意の ID 番号でコード化され、分析されるまで -80℃ で保管されます。 識別用のキーは、歯学部の Rm#237B にある施錠されたキャビネットに保管されます。 患者には、歯科矯正治療後にNSAIDsではなくパラセタモールを服用するように説明されます。 ＧＣＦの収集は、ブラケットの配置前、犬歯の牽引前、犬歯の牽引から２週間後、犬歯の牽引から５週間後、および犬歯の牽引から７週間後に行われる。

口腔内スキャン 患者の咬合と顎は、口腔内デジタル スキャナを使用してスキャンされます。 口腔内スキャンは、研究された各時点で最高の解像度で実行されます。 スキャン データは、ステレオリソグラフィー バイナリ ファイル形式 (.stl) としてエクスポートされ、高度な処理ソフトウェア パッケージ (Geomagic® Control 14、Geomagic®、Research Triangle Park、NC、USA) にインポートされます。 ミニスクリューと口蓋ひだの構造が基準点として使用されます。

ワイヤーの配置と矯正治療 患者はブラケットと 0.016x0.016 インチで固定されます。 ステンレス鋼ワイヤーが配置され、ゴムリングでブラケットに結紮されます。 患者は、サンプル収集時間に従って、研究後に月に1回、矯正治療のために再び来院するようにスケジュールされます。

ELISA GCF サンプルを最初に 30 秒間ホモジナイズし、1500 g で 5 分間遠心分離して溶出します。 溶出液は、GCF サンプルからの ELISA 推定用のサンプルとして使用されます。 GCF サンプルは OPG と RANKL で検出されます。 OPG と RANKL の比率が計算され、破骨細胞を活性化する PDL の可能性が決定されます。

マイクロＲＮＡ分析 総ＲＮＡは、ｍｉＲＮｅａｓｙ血清／血漿キット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を使用して保存されたＧＣＦサンプルから抽出される。 トータル RNA の量は NanoDrop 分光光度計 (Thermoscientific) によって測定されます。 hsa-miR-21、-29a、b、および c に特異的な Taqman® microRNA RT-PCR アッセイを使用して、全 RNA を定量的リアルタイム RT-PCR に供します。 hsa-let-7d、g、i は内部対照として使用されます。 各被験者からのサンプルは、7900HT リアルタイム PCR システム (Applied Biosystems) を使用して分析されます。