そら豆のアミノ酸バイオアベイラビリティ (Leg4Life)

目的は、特にアミノ酸消化率の観点から、健康なヒトのそら豆からのタンパク質の栄養上の品質を決定することです. 回腸消化率は、経鼻回腸チューブを用いて食後に収集された回腸消化物で決定される。 サンプル中の食物窒素とアミノ酸を追跡するために、そら豆は本質的に 15N で標識されています。

倫理的および規制的側面:

プロトコルは、承認のために倫理委員会に提出され、行政認可のためにフランス医薬品衛生庁に提出されました。 個人データの管理は、個人データ保護に関する規制 (「regulation n° 2018-493 du 20 juin 2018」) に従います。

お食事：

食事は、調理して皮をむいたそら豆 250 g で構成され、20 g のタンパク質を提供します。 食事の官能特性を最適化するための官能検査が実現されます。 15Nラベルの豆を塩ゆでします。 実験当日の朝、そら豆の部分を温めておきます。

ボランティア:

8つの被験者が研究に含まれます。 捜査官は、通常の 50% のドロップアウトに対応するために、約 16 人のボランティアを募集する予定です。

実験の 1 週間前に、ボランティアは、タンパク質摂取量を制御するために体重に合わせた標準的な食事に従います (1.3 g タンパク質/kg 体重)。 彼らは、週に 1 ～ 3 ポーションのそら豆を消費するように求められます。

ボランティアは、実験日の前日の朝にアヴィセンヌ病院の人間栄養研究センターに到着します。 彼らは、24時間腸管を通って進むことができるダブルルーメン腸管を備えています. ルーメンの 1 つは放射線不透過性で、腸内の非吸収性マーカーを灌流するのに役立ちます (スロー マーカー法)。 もう一方のルーメンは、灌流部位から 15 cm 下の廃液の連続吸引専用です。 流出液中の非吸収性マーカーの測定により、流出液の流量を決定できます。

実験当日、チューブの位置を X 線撮影で確認し、回腸末端での位置を確認します。 採血のためにカテーテルを前腕の静脈に挿入します。 非吸収性マーカー、PEG-4000 (20g/l) の灌流は、1ml/分の流速で開始します。 腸の流れと基底回腸サンプルは 30 分の間に収集されます。 基礎血漿サンプルがサンプリングされます。

次に、t=0 で、ボランティアは試験食を飲みます。 t = 8h まで、腸内容物は吸引によって継続的に収集され、30 分ごとにプールされます。 4 時間は 30 分ごとに、その後は 1 時間ごとに採血します。 尿は 8 時間 2 時間ごとに収集されます。

被験者は、食後 48 時間の間に自宅で便のサンプルを収集します。 スツールはフィンランドに送られます。

測定:

ダイジェスタで：

比濁法による PEG-4000、EA-IRMS による総 N および 15N の濃縮、UPLC によるアミノ酸濃度 (110°C で 24 時間、110°C で 6N の酸加水分解 HCl 後)、GC-c-IRMS による 15N アミノ酸の濃縮 (陽イオン交換樹脂および誘導体化)。

血漿中：

グルコース、尿素 (比色法)、インスリン (ELISA)、アミノ酸濃度 (UPLC)、血漿タンパク質の 15N 濃縮、尿素および遊離アミノ酸 (EA-IRMS、陽イオン交換樹脂での精製および誘導体化後)。

尿中：

尿素 (比色法) および 15N 尿素 (EA-IRMS、陽イオン交換樹脂での精製および誘導体化後)。

便中：

微生物 DNA。

結果:

タンパク質とアミノ酸の実際の回腸消化率 (消化による損失)、食後の脱アミノ化 (代謝による損失)、正味の食後のタンパク質利用率、微生物叢の組成。