Biodisponibilidade de Aminoácidos de Favas (Leg4Life)

O objetivo é determinar a qualidade nutricional da proteína do feijão fava em humanos saudáveis, principalmente em termos de digestibilidade dos aminoácidos. A digestibilidade ileal é determinada em digesta ileal coletada pós-prandialmente com um tubo naso-ileal. As favas são intrinsecamente marcadas em 15N para rastrear o nitrogênio e os aminoácidos da dieta nas amostras.

Aspectos éticos e regulatórios:

O protocolo foi submetido ao Comitê de Ética para aprovação e à Agência Francesa de Medicamentos e Saúde para autorização administrativa. A gestão dos dados pessoais será feita de acordo com o regulamento de proteção de dados pessoais ( "regulamento n° 2018-493 de 20 de junho de 2018").

Refeição:

A refeição será composta por 250 g de fava cozida e descascada, para fornecer 20 g de proteína. Serão realizados testes sensoriais para otimizar as propriedades organolépticas da refeição. Feijão rotulado 15N será fervido em água com sal. Na manhã do experimento, a porção de fava será aquecida.

Voluntários:

Oito indivíduos serão incluídos no estudo. Os investigadores planejam recrutar cerca de 16 voluntários para acomodar os habituais 50% de desistências.

Uma semana antes do experimento, os voluntários seguirão uma dieta padrão adaptada ao seu peso corporal para controlar a ingestão de proteínas (1,3 g de proteína/kg de peso corporal). Eles serão solicitados a consumir de uma a 3 porções de favabean na semana.

Os voluntários chegarão ao Centro de Pesquisa em Nutrição Humana do Hospital Avicenne na manhã anterior ao dia do experimento. Eles serão equipados com um tubo intestinal de duplo lúmen que poderá progredir pelo trato intestinal por 24 horas. Um dos lúmens é rádio-opaco e serve para perfundir um marcador não absorvível no intestino (método do marcador lento). O outro lúmen é dedicado à aspiração contínua dos efluentes, 15 cm abaixo do local de perfusão. A medição do marcador não absorvível nos efluentes permite a determinação da vazão do efluente.

No dia do experimento, a posição do tubo será verificada por radiografia para verificar sua localização no íleo terminal. Um cateter será inserido na veia do antebraço para coleta de sangue. A perfusão do marcador não absorvível, PEG-4000 (20g/l), começará com uma taxa de fluxo de 1ml/min. O fluxo intestinal e a amostra ileal basal serão coletados durante 30 min. A amostra de plasma basal será amostrada.

Então, em t=0, os voluntários beberão a refeição-teste. Até t=8h, o conteúdo intestinal será continuamente coletado por aspiração e reunido a cada 30 minutos. Sangue será coletado a cada 30 minutos durante 4h e depois de hora em hora. A urina será coletada a cada 2 h durante 8 h.

Os sujeitos coletarão amostras de fezes em casa durante as 48 h após a refeição. As fezes serão enviadas para a Finlândia.

Medidas:

Na digesta:

PEG-4000 pelo método turbidimétrico, enriquecimento de N total e 15N por EA-IRMS, concentrações de aminoácidos por UPLC (após hidrólise ácida HCl 6N a 110°C por 24h), enriquecimento de aminoácidos 15N por GC-c-IRMS (após purificação em resina de troca catiônica e derivatização).

No plasma:

Glicose, uréia (métodos colorimétricos), insulina (ELISA), concentração de aminoácidos (UPLC), enriquecimento 15N em proteína plasmática, uréia e aminoácidos livres (EA-IRMS, após purificação em resina de troca catiônica e derivatização).

Na urina:

Uréia (método colorimétrico) e uréia 15N (EA-IRMS, após purificação em resina de troca catiônica e derivatização).

Nas fezes:

DNA microbiano.

Desfechos:

Digestibilidade ileal real de proteínas e aminoácidos (perdas digestivas), desaminação pós-prandial (perdas metabólicas), utilização líquida pós-prandial de proteínas, composição da microbiota.