腎移植急性拒絶反応の予測における Dd-cfDNA と Treg

バックグラウンド

免疫抑制の進歩にもかかわらず、腎移植後の移植片の 10 年生存率は約 50% で停滞しています。 腎移植レシピエントにおける急性拒絶反応のタイムリーな診断は、移植片の長期生存を改善するために不可欠です。 現在、急性拒絶反応の臨床的疑いは、血清クレアチニンの上昇のモニタリングと同種移植腎生検による診断確認に依存しています。 ただし、血清クレアチニン上昇は急性拒絶反応に特異的ではなく、同種移植片に重大な免疫学的損傷がすでに発生した後に検出されます。 生検による確認は侵襲的であり、重大な合併症の発生率は 1% であり、不十分なサンプリングと専門家の読者の差異に左右されます。 腎移植後の移植片の長期生存率を改善するために、非侵襲的な方法で免疫損傷の前に急性拒絶反応を監視および診断する新しい方法が必要です。 無細胞 DNA は通常、細胞がアポトーシスまたはネクローシスを起こすと血流に放出されます。 腎臓移植と同種移植片の存在のコンテキストでは、ドナー由来の無細胞 DNA (dd-cfDNA) は、同種移植片細胞の代謝回転の結果としてレシピエントの血流に継続的に流され、全細胞のわずかな割合を表します。フリー DNA (ドナー プラス レシピエント由来)。 Dd-cfDNA 画分は、虚血再灌流障害により最初は高く、通常、腎移植後 10 ～ 14 日でベースライン レベルに低下します。 その後、急性拒絶反応などの同種移植損傷のエピソードは、受信者の血流への dd-cfDNA 画分の増加につながります。 一塩基多型ベースの多重化ポリメラーゼ連鎖反応技術と高度なバイオインフォマティクスを使用して、ドナーまたはレシピエントの事前のジェノタイピングを必要とせずに、血漿 dd-cfDNA 画分を腎臓移植レシピエントで測定できるようになりました。 最近の研究では、血漿 dd-cfDNA は、生検で証明された急性拒絶反応の前に上昇するため、非侵襲的な方法で免疫学的損傷の前に急性拒絶反応を検出する有望な新しい方法であることが実証されています。 1% 以上のカットオフ dd-cfDNA 画分は、受信者動作特性 (ROC) 曲線分析で 0.59 ～ 0.97 の曲線下面積 (AUC) を持つこれらの研究で、中等度から良好なパフォーマンスで急性拒絶反応を予測することができました。 メカニズムによって急性拒絶反応を調べると、dd-cfDNA 分画は抗体媒介拒絶反応 (ABMR) の予測性能が優れているように見えますが、T 細胞媒介拒絶反応 (TCMR) を予測するその有用性は、特に重症度が低い場合 (バンフ1B)。 それにもかかわらず、重症度の低い TCMR (Banff 1A または無症状) では、0.5% 以上の dd-cfDNA 画分が、推定糸球体濾過率 (eGFR) の急激な低下のリスクがある腎移植レシピエントを潜在的に特定し、de-novo を発症することが示されました。ドナー特異的抗体、および将来の拒絶エピソード。 メディケアによって臨床使用が承認されているにもかかわらず、dd-cfDNA には急性拒絶反応の予測に関していくつかの制限が残っています。 まず、尿路感染症、全身感染症、BK ウイルス腎症などの他の医学的合併症も dd-cfDNA を増加させる可能性があるため、dd-cfDNA の上昇は拒絶反応に特異的なものではありません。 第二に、特に重症度の低い TCMR に対する dd-cfDNA の予測性能はあいまいなままです。 最後に、腎移植後の初期の dd-cfDNA 画分が将来の免疫学的移植片の損傷と機能を予測できるかどうかは不明です。 dd-cfDNA を急性拒絶反応に対してより特異的にし、TCMR の予測性能を改善し、それを将来の移植片機能と相関させる新しい方法は、その臨床的有用性をさらに向上させるでしょう。 制御性 T 細胞 (Treg) は、エフェクター免疫応答を抑制することにより、さまざまな腎臓移植動物モデルにおける寛容の誘導と維持に不可欠です。 Treg は CD4+ T 細胞の 5 ～ 10% を構成し、伝統的に CD25 の高発現、CD127 の低発現、およびマスター転写因子 FoxP3 の発現を伴う均一な集団として識別されます。 しかし、最近のデータは、Treg がより不均一であり、従来の CD25、CD127、および FoxP3 よりも追加の分子の発現がそれらの抑制機能活性に影響を与えることを示しています。 ヒト腎移植では、移植後の循環 CD4+CD25hiCD127lo/- Treg は、急性拒絶反応を起こしたレシピエントとそうでないレシピエントの間で同様でした。 しかし、移植後の循環 Treg での HLA-DR の高発現は、機能活性を最大限に抑制した集団を特定し、急性拒絶反応に苦しんでいるレシピエントでは低かった。 機能活性を最大限に抑制する Treg 集団を特定する別の分子は、TNFR2 です。 TNFR2 は、炎症誘発性サイトカイン TNF-α の生物学的機能を仲介します。TNF-α は、同種移植片拒絶時のエフェクター T 細胞の動員と活性化に関与しています。 興味深いことに、TNFR2 は、エフェクター T 細胞ではなく、Treg で優先的に発現されることが示されました。 マウスとヒトの両方の研究で、TNFR2 + Treg を介した TNF-α シグナル伝達は、それらの生存、増殖、および抑制機能活性を増加させました。

予備的結果 研究者らは以前、腎移植の特定の状況で TNFR2+ Treg を研究しました。 研究者らは、腎臓移植候補のコホートで、Treg 上の TNFR2 の発現が、Treg と刺激されたエフェクター T 細胞との従来の共培養アッセイによって測定された抑制機能と相関することを確認しました (r=0.63、 p<0.01)。 76人の死亡したドナー腎移植レシピエントのコホートにおいて、研究者らは、腎移植後の移植片機能の遅延および遅延の予測における、移植前の循環レシピエントTNFR2 + Tregの役割について発表しました。 移植片機能の遅延および遅延は、腎移植後の急性拒絶反応の発症の危険因子として知られているため、研究者らは次に、移植前に循環しているレシピエント TNFR2+ Treg が急性拒絶反応の予測における役割を調べた。特に重症度の低いTCMRで有望な結果が得られた利用可能な急性拒絶反応データ。

仮説

低重症度 TCMR を主に含むコホートでの以前の研究と研究者の予備結果は、急性拒絶反応の予測における HLA-DR+TNFR2+ Treg の役割を示唆しているため、研究者は、それを dd-cfDNA 画分と統合することで特異性と予測性が向上する可能性があるという仮説を立てています。急性拒絶反応、特にTCMRのパフォーマンス。 研究者らはまた、初期の dd-cfDNA 画分と移植前の HLA-DR+TNFR2+ Treg の測定により、急性拒絶反応や eGFR によって測定される移植片機能を含む腎移植後の将来の転帰を予測できるという仮説を立てています。

目的

1. dd-cfDNA 画分を HLA-DR + TNFR2 + Treg と事前に統合するか、同種移植損傷時に統合することで、腎移植後の急性拒絶反応の予測性能が向上するかどうかをテストします。
2. 移植後 2 週間の dd-cfDNA 画分を移植前の HLADR + TNFR2 + Treg と統合することで、将来の急性拒絶反応のエピソードと 1 年間の移植機能を予測できるかどうかをテストします。

治験責任医師は、dd-cfDNA 分画測定のための保険が適用される 150 人の成人腎移植レシピエントを募集します。