膵管腺癌患者におけるCtDNA発現に対するセクレチン刺激膵臓分泌の影響：膵管腺癌の予後を決定する際のバイオマーカーの役割

バックグラウンド膵管腺癌（PDAC）は、予後不良と生存率が低い攻撃的な腫瘍疾患です。 その生物学的性質のため、一般的に早期診断を達成し、したがって治療結果を成功させることは困難です。

最近、世界中の多くの試験と研究は、腫瘍生物学をよりよく理解し、診断、病気の監視、標的療法の開発のための新しいツールを提供することを目指しています。 関心のある被験者の1つは、たまたまいわゆる液体生検です。

これらの生検からのmiRNA、腫瘍抑制遺伝子、アミノ酸などのバイオマーカーの分離は、その分析、定量化、臨床腫瘍学への取り込みは、さらなる研究が非常に必要な複雑な問題を表しています。 被験者、材料、方法バイオマーカー分析のための重要な前提条件は、十分な量の遺伝情報です。 私たちの研究では、PDAC患者におけるCtDNA放出に対する静脈内のセクレチン投与の効果を分析します。 PDAC患者の90％を超えるKRAS変異率が科学的に証明されているため、末梢血血漿にKRAS変異陽性を有する患者と外科療法が予定されている患者が研究に含まれます。

PDAC診断の36人の患者の末梢血血漿は、手術の最初の2時間中に特定の間隔で収集されます。 サンプル中のctDNAのプラスマティックレベルが定量化されます。 バイオマーカーの標準化されたパネルは、手術前および手術後の特定の間隔でPDAC患者で設計およびテストされます。 結果は、疾患の予後を決定するために、最小限の残存疾患、生存率、およびその他の指標と相関して分析されます。 統計評価は、バイオインフォマティクスと生物医学統計を経験した専門家と協力して行われます。

導入：

膵管腺癌（PDAC）は、不利な予後と高い死亡率を伴う最も深刻で攻撃的な悪性疾患の中にランク付けされています[1,2]。 PDAC患者の5年生存率は10％で、10年生存率は6％です[3]。 チェコ共和国の健康情報統計研究所によると、チェコのPDACの発生率は21.9/100000人の住民であり、有病率は23,2/100000人の住民です。 全身化学療法に対する反応が不十分であることに加えて、この統計は、しばしば無症候性期間のために疾患の早期発見の難しさにも大きく寄与しますが、治療方法は診断時に有意に制限される場合があります。 潜在的に治癒的な方法としての外科的治療の兆候は、明らかに疾患の確立程度に依存しています[4]。 現在、世界的な監視マーカーは、術前および術後予後の決定に関連して、血清のCA19-9のレベルです[5]。 ただし、PDACに十分な感度と特異性がないため、CA19-9は十分な予測値を持つ特定のマーカーとして分類することはできません[6]。 スクリーニング、早期診断、治療および予後への反応のために、さまざまな生物学的材料（血液、尿、糞便、唾液、胆汁、膵臓ジュースなど）で300を超えるマーカーが提案されていますが、現在、バイオマーカーはより広いものではありません毎日の臨床診療における応用[6,7]。

最近の研究によると、いくつかのバイオマーカー[6]が、一般集団のスクリーニングにおける予後の評価と将来の使用との相関におけるさらなる調査のための高い可能性を高く評価している[6,7,8]早期診断はの重要な部分です。治療オプションとPDACの予後の改善は、このプロジェクトを分析するために、実用的な臨床使用の可能性のある重要な可能性を秘めたバイオマーカーのセットを選択しました。 それらの1つは、PDACで頻繁に変異しているRASファミリーのKras Protoonceeneです[9、10、11、12]。 変異したKRAS遺伝子は、膵臓分泌の原因となるホルモンであるセクレチンによる静脈内刺激の前後に患者の血漿から分離されたCtDNAから検出されようとしています[13]。 セクレチン刺激がCtDNAの放出を増強すると仮定します。

したがって、変異KRA、mRNA、miRNA、siRNA、siRNA、exorna、およびアミノ酸の分析は、診断プロセス中にPDACモニタリングの効率的な特徴になる可能性があります。

目的：

このプロジェクトの目的は、PDAC患者のCtDNA放出に対する静脈内セクレチン刺激の増強の影響を証明し、それにより、さらなる分析のために潜在的に使用できるCtDNAのより高いプラスマティックレベルを媒介することです。 それに加えて、ctDNA、mRNA、miRNA、siRNA、exorna、S100タンパク質、アミノ酸におけるKRAS変異の役割は、治療プロセス全体で分析しようとしています。一度に人生など。

ゼロ仮説：

静脈内のセクレチン投与後のctDNAのプラスマティックレベルは、投与前よりも有意に高くはありません。 mRNA、miRNA、外生性RNA、およびS100タンパク質の形質型レベルは、手術前よりも手術後よりも有意に低くはなく、術後の経過との相関は示されません。

方法論と統計評価：

第1段階では、PDACと診断され、外科療法を示す年齢層の男性と女性の両方の患者が選択されます。 短期間で複数の血液サンプルの収集、セクレチンの生理学的影響、およびプロセスのロジスティックの最適化を考慮すると、手術を指定する患者を関与させることにしました。

腫瘍の重複患者は除外されます。 研究への参加に署名された同意のある患者のみが含まれます。 これらの患者の血漿は、手術前の外来患者の訪問中に末梢静脈から収集され、変性毛細血管の電気泳動を使用したヘテロドゥプレックス分析を伴う変異KRAS遺伝子の陽性についてテストされます。

KRAS陽性血漿サンプルの36人の患者は、手術のために定期的に準備されます。 外科的処置の最初の2時間では、16マイクログラムの静脈内セクレチンが適用されます。 この期間中、患者への静脈内のセクレチン投与は安全であり、膵臓切除の外科段階に干渉しません。 Secretinアプリケーションから3分3倍5分の間に、麻酔職員によって末梢静脈からも血液サンプルが収集されます。 すべての血液サンプルは、さらなる技術処理を必要とせずに調製されたサンプリングキットに収集され、実験室に輸送され、他の候補マーカーの分析と定量化のために服従します。 プロジェクトの第2フェーズでは、現在の知識と予備的な結果に基づいて、最も有望なマーカーパネルが確立されます。 外科的療法に示されたPDACと診断された患者の血漿は、外来検査中の手術後3、6、12か月後、解雇前に術前および術後のマーカーレベルについてテストされます。 その後、結果を分析し、最小限の残存疾患、生存率、生活の質、およびその他の標準化された指標と相関して統計的に評価され、疾患の予後を監視します。 統計評価は、バイオインフォマティクスと生物医学統計の幅広い経験を持つ専門家と協力して実現されます。

結果と重要性：

私たちのプロジェクトは、PDACと診断された患者における液体生検とバイオマーカー分析とその臨床腫瘍学への取り込みに関する体系的な文献レビューを提供します。 革新的な方法としてPDAC患者へのctDNA放出に対するセクレチンの静脈内投与の効果を分析し、これらの患者のバイオマーカー分析のためにかなり多くの遺伝情報を調達する可能性があります。 さらに、結果と結果は、バイオマーカーのパネルを設計し、疾患の監視と予後評価における臨床的意味を評価するのに役立ちます。