La influencia de la secreción pancreática estimulada en secretina en la expresión de ADNmt en pacientes con adenocarcinoma ductal pancreático: el papel de los biomarcadores en la determinación del pronóstico del adenocarcinoma ductal pancreático

Antecedentes El adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) es una enfermedad oncológica agresiva con un mal pronóstico y baja tasa de supervivencia. Debido a su naturaleza biológica, generalmente es difícil lograr el diagnóstico temprano y, por lo tanto, lograr resultados terapéuticos exitosos.

Recently, many trials and studies worldwide aim at better understanding of tumor biology and providing a novel tool for diagnostics, disease monitoring and developing a targeted therapy. Uno de los sujetos de interés es la llamada biopsias líquidas.

El aislamiento de biomarcadores como miRNA, genes supresores de tumores o aminoácidos de estas biopsias, su análisis, cuantificación e incorporación en oncología clínica representa un problema complejo donde se requiere más investigación. Sujetos, materiales, métodos Un requisito previo crucial para el análisis de biomarcadores es una cantidad suficiente de información genética. En nuestro estudio, se analizará el efecto de la administración de secretina intravenosa en la liberación de ADNc en pacientes con PDAC. Se ha probado científicamente más del 90% de la tasa de mutación KRAS en pacientes con PDAC, por lo tanto, los pacientes con mutación KRAS positiva en su plasma sanguíneo periférico y programados para la terapia quirúrgica se incluirán en el estudio.

El plasma sanguíneo periférico de 36 pacientes con diagnóstico de PDAC se recolectará en intervalos específicos durante las primeras dos horas de la operación. Se cuantificarán los niveles plasmáticos de ADNmt en las muestras. Un panel estandarizado de biomarcadores será diseñado y probado en pacientes con PDAC antes de la cirugía y en intervalos específicos después de la cirugía. Los resultados se analizarán en correlación con una enfermedad residual mínima, la tasa de supervivencia y otros indicadores para determinar el pronóstico de la enfermedad. La evaluación estadística se realizará en cooperación con especialistas experimentados en estadísticas bioinformáticas y biomédicas.

Introducción:

El adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) se ubica entre las enfermedades malignas más graves y agresivas con un pronóstico desfavorable y una alta mortalidad [1,2]. La supervivencia de cinco años para pacientes con PDAC es del 10 %, y la supervivencia de diez años es del 6 % [3]. Según el Instituto de Información de Salud y Estadísticas de la República Checa, la incidencia de PDAC en Checia es de 21.9/100000 habitantes, la prevalencia es de 23,2/100000 habitantes. Además de la respuesta insuficiente a la quimioterapia sistémica, esta estadística también contribuye significativamente a la dificultad de la detección temprana de la enfermedad debido a su período a menudo asintomático, mientras que los métodos de tratamiento pueden estar significativamente limitados en el momento del diagnóstico. La indicación del tratamiento quirúrgico como un método potencialmente curativo depende claramente de la extensión establecida de la enfermedad [4]. Actualmente, el marcador monitoreado en todo el mundo es el nivel de CA19-9 en el suero, también en relación con la determinación del pronóstico preoperatorio y postoperatorio [5]. Sin embargo, debido a la falta de suficiente sensibilidad y especificidad para PDAC, CA19-9 no puede clasificarse como un marcador específico con un valor predictivo suficiente [6]. Se han propuesto más de trescientos marcadores en varios materiales biológicos (sangre, orina, heces, saliva, bilis, jugo pancreático, etc.) para detectar, diagnóstico temprano, respuesta al tratamiento y pronóstico, pero ninguno de los biomarcadores actualmente tiene un más ancho Aplicación en la práctica clínica diaria [6,7].

Según estudios recientes, varios biomarcadores [6] se han identificado con un alto potencial para una mayor investigación en la correlación con la evaluación del pronóstico y el uso futuro en la detección en la población general [6,7,8] El diagnóstico temprano es una parte clave de Las opciones de tratamiento y la mejora del pronóstico en PDAC, por lo tanto, se eligió un conjunto de biomarcadores con un potencial significativo para el uso clínico práctico para que este proyecto se analice. Uno de ellos es KRAS Protooncogene de la familia Ras, que con frecuencia se muta en PDAC [9, 10, 11, 12]. El gen KRAS mutado está a punto de detectarse del ADNmt aislado del plasma del paciente antes y después de la estimulación intravenosa con secretina, una hormona responsable también de la secreción pancreática [13]. Suponemos que la estimulación de Secretin va a potenciar la liberación de ADNmt.

El análisis de KRAS mutantes, ARNm, miRNA, siRNA, exORNA, proteínas S100 y aminoácidos podría convertirse en un sello eficiente en el monitoreo de PDAC durante el proceso terapéutico diagnóstico.

Objetivos:

El objetivo de este proyecto es demostrar la influencia potenciadora de la estimulación de secretina intravenosa en la liberación de ADNmt en pacientes con PDAC y, por lo tanto, mediar niveles plasmáticos más altos de ADNmt potencialmente utilizables para un análisis posterior. Además de eso, el papel de la mutación KRAS en el ADNmt, ARNm, miRNA, siRNA, exORNA, proteínas S100 y aminoácidos está a punto de analizarse durante todo el proceso terapéutico para monitorear la correlación de los niveles marcadores con los indicadores estandarizados de esperanza de vida, calidad de calidad, calidad. de la vida, etc. a la vez.

Hipótesis cero:

El nivel plasmático de ADNmt después de la administración intravenosa de secretina no será significativamente más alto que antes de la administración. Los niveles plasmáticos de ARNm, miRNA, ARN exogénico y proteínas S100 no serán significativamente más bajos después de la cirugía que antes de la cirugía y no mostrarán ninguna correlación con el curso postoperatorio de la enfermedad.

Metodología y evaluación estadística:

En la primera fase, se seleccionará pacientes hombres y mujeres en cualquier rango de edad diagnosticado con PDAC e indicados para la terapia quirúrgica. Teniendo en cuenta múltiples colecciones de muestras de sangre en un corto período de tiempo, los efectos fisiológicos de la secretina y la optimización logística del proceso, hemos decidido involucrar a los pacientes indicados para la cirugía.

Los pacientes con duplicidad de tumores serán excluidos. Solo se incluirán los pacientes con consentimiento firmado de participación en el estudio. El plasma sanguíneo de estos pacientes se recolectará de una vena periférica durante una visita ambulatoria antes de la cirugía y se analizará la positividad del gen KRAS mutado con análisis heteroduplex utilizando electroforesis capilar con desnaturalización.

36 pacientes con una muestra de plasma positiva de KRAS se prepararán de manera rutinaria para la cirugía. En las primeras dos horas del procedimiento quirúrgico, se aplicarán 16 microgramos de secretina intravenosa. Durante este período de tiempo, la administración de secretina intravenosa al paciente es segura y no interferirá con la fase quirúrgica de la resección pancreática. En el intervalo de 3 minutos y 3x 5 minutos de la aplicación Secretin, el personal de anestesia también recolectará muestras de sangre de la vena periférica. Todas las muestras de sangre se recolectarán a los kits de muestreo preparados sin necesidad de un mayor procesamiento técnico, transportado al laboratorio y sometidas para el análisis y cuantificación de los otros marcadores candidatos de ADNmt ADNmt. En la segunda fase del proyecto, los paneles marcadores más prometedores se establecerán en función del conocimiento actual y los resultados preliminares. El plasma sanguíneo de los pacientes diagnosticados con PDAC, indicado para la terapia quirúrgica, se analizará los niveles de marcador preoperatorios y después de la operación antes del despido, 3, 6 y 12 meses después de la cirugía durante el examen ambulatorio. Los resultados se analizarán y evaluarán estadísticamente en correlación con una enfermedad residual mínima, tasa de supervivencia, calidad de vida y otros indicadores estandarizados para monitorear el pronóstico de la enfermedad. La evaluación estadística se realizará en cooperación con especialistas con una amplia experiencia en bioinformática y estadísticas biomédicas.

Resultados y significado:

Nuestro proyecto proporcionará una revisión de literatura sistemática con respecto a la biopsia líquida y el análisis de biomarcadores y su incorporación a la oncología clínica en pacientes diagnosticados con PDAC. Se analizará el efecto de la administración intravenosa de secretina en la liberación de ADNc a pacientes con PDAC como método innovador, lo que puede obtener una cantidad significativamente mayor de información genética para el análisis de biomarcadores en estos pacientes. Además, los resultados y el resultado ayudarán a diseñar un panel de biomarcadores y evaluar su implicación clínica en el monitoreo de la enfermedad y la evaluación del pronóstico.