A influência da secretina estimulou a secreção pancreática na expressão de ctDNA em pacientes com adenocarcinoma ductal pancreático: o papel dos biomarcadores na determinação do prognóstico de adenocarcinoma ductal pancreático

Antecedentes O adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) é uma doença oncológica agressiva com um prognóstico ruim e baixa taxa de sobrevivência. Devido à sua natureza biológica, geralmente é desafiador realizar diagnósticos precoces e, portanto, alcançar resultados terapêuticos bem -sucedidos.

Recentemente, muitos ensaios e estudos em todo o mundo buscam uma melhor compreensão da biologia tumoral e fornecendo uma nova ferramenta para diagnóstico, monitoramento de doenças e desenvolvimento de uma terapia direcionada. Um dos sujeitos de interesse é as chamadas biópsias líquidas.

O isolamento de biomarcadores como miRNA, genes supressores de tumores ou aminoácidos dessas biópsias, sua análise, quantificação e incorporação na oncologia clínica representa uma questão complexa em que mais pesquisas são altamente necessárias. Assuntos, materiais, métodos Um pré -requisito crucial para a análise de biomarcadores é uma quantidade suficiente de informações genéticas. Em nosso estudo, será analisado o efeito da administração de secretina intravenosa na liberação de ctDNA em pacientes com PDAC. Mais de 90% da taxa de mutação KRAS em pacientes com PDAC tem sido comprovada cientificamente; portanto, pacientes com mutação KRAS positiva no plasma sanguíneo periférico e programados para terapia cirúrgica serão incluídos no estudo.

O plasma sanguíneo periférico de 36 pacientes com diagnóstico de PDAC será coletado em intervalos específicos durante as duas primeiras horas da operação. Os níveis plasmáticos de ctDNA nas amostras serão quantificados. Um painel padronizado de biomarcadores será projetado e testado em pacientes com PDAC antes da cirurgia e em intervalos específicos após a cirurgia. Os resultados serão analisados ​​em correlação com doenças residuais mínimas, taxa de sobrevivência e outros indicadores para determinar o prognóstico da doença. A avaliação estatística será feita em cooperação com especialistas com experiência em bioinformática e estatística biomédica.

Introdução:

O adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) está entre as doenças malignas mais graves e agressivas com um prognóstico desfavorável e alta mortalidade [1,2]. A sobrevivência de cinco anos para pacientes com PDAC é de 10 % e a sobrevida em dez anos é de 6 % [3]. De acordo com o Instituto de Informações e Estatísticas da Saúde da República Tcheca, a incidência de PDAC em Tchechia é de 21,9/100000 habitantes, a prevalência é de 23,2/100000 habitantes. Além da resposta insuficiente à quimioterapia sistêmica, essa estatística também contribui significativamente para a dificuldade de detecção precoce da doença devido ao seu período frequentemente assintomático, enquanto os métodos de tratamento podem ser significativamente limitados no momento do diagnóstico. A indicação do tratamento cirúrgico como método potencialmente curativo depende claramente da extensão estabelecida da doença [4]. Atualmente, o marcador monitorado mundial é o nível de CA19-9 no soro, também em relação à determinação do prognóstico pré-operatório e pós-operatório [5]. No entanto, devido à falta de sensibilidade e especificidade suficientes para o PDAC, o CA19-9 não pode ser classificado como um marcador específico com valor preditivo suficiente [6]. Mais de trezentos marcadores foram propostos em vários materiais biológicos (sangue, urina, fezes, saliva, bile, suco de pâncreas, etc.) para triagem, diagnóstico precoce, resposta ao tratamento e prognóstico, mas nenhum dos biomarcadores atualmente possui mais amplo Aplicação na prática clínica diária [6,7].

De acordo com estudos recentes, vários biomarcadores [6] foram identificados com um alto potencial para uma investigação mais aprofundada em correlação com a avaliação do prognóstico e o uso futuro na triagem na população em geral [6,7,8] o diagnóstico precoce é uma parte essencial da parte principal da As opções de tratamento e a melhoria do prognóstico no PDAC, portanto, um conjunto de biomarcadores com potencial significativo para uso clínico prático foi escolhido para que este projeto seja analisado. Um deles é o Kras Protooncogene da família RAS, que freqüentemente é mutado no PDAC [9, 10, 11, 12]. O gene KRAS mutado está prestes a ser detectado do ctDNA isolado do plasma do paciente antes e após a estimulação intravenosa com a secretina, um hormônio responsável também pela secreção pancreática [13]. Supomos que a estimulação da secretina vai potencializar a liberação de ctDNA.

Análise de proteínas e aminoácidos do miRNA, SIRNA, Exorna, S100 podem se tornar uma marca registrada eficiente no monitoramento do PDAC durante o processo diagnóstico -terapêutico.

Objetivos:

O objetivo deste projeto é provar a influência potente da estimulação intravenosa da secretina na liberação de ctDNA em pacientes com PDAC e, assim, mediar níveis plasmáticos mais altos de ctDNA potencialmente utilizáveis ​​para análises posteriores. Além disso, o papel da mutação KRAS nos proteínas e aminoácidos de ctDNA, mRNA, miRNA, siRNA, Exorna, S100 está prestes a ser analisados ​​ao longo do processo terapêutico para monitorar a correlação dos níveis de marcadores com os indicadores padronizados da expectativa de vida, qualidade da vida etc. de cada vez.

Zero Hipótese:

O nível plasmático de ctDNA após a administração de secretina intravenosa não será significativamente maior do que antes da administração. Os níveis plasmáticos de mRNA, miRNA, RNA exogênico e proteínas S100 não serão significativamente menores após a cirurgia do que antes da cirurgia e não mostrarão nenhuma correlação com o curso pós -operatório da doença.

Metodologia e avaliação estatística:

Na primeira fase, pacientes do sexo masculino e feminino em qualquer faixa etária diagnosticados com PDAC e indicados para terapia cirúrgica serão selecionados. Considerando várias coleções de amostras de sangue em um curto período de tempo, efeitos fisiológicos da secretina e otimização logística do processo, decidimos envolver os pacientes indicados para a cirurgia.

Pacientes com duplicidade tumoral serão excluídos. Somente os pacientes com consentimento assinado de participação no estudo serão incluídos. O plasma sanguíneo desses pacientes será coletado de uma veia periférica durante uma visita ambulatorial antes da cirurgia e testada quanto à positividade do gene KRAS mutado com análise heteroduplex usando eletroforese capilar desnaturante.

36 pacientes com amostra plasmática positiva de KRAS serão rotineiramente preparados para a cirurgia. Nas duas primeiras horas do procedimento cirúrgico, 16 microgramas de secretina intravenosa serão aplicados. Durante esse período de tempo, a administração intravenosa da secretina ao paciente é segura e não interfere na fase cirúrgica da ressecção pancreática. No intervalo de 3 minutos e 3x 5 minutos da aplicação da secretina, as amostras de sangue serão coletadas da veia periférica também pelo pessoal da anestesia. Todas as amostras de sangue serão coletadas para os kits de amostragem preparados, sem necessidade de processamento técnico adicional, transportados para o laboratório e submetidos à análise e quantificação de outros marcadores candidatos. Na segunda fase do projeto, os painéis de marcadores mais promissores serão estabelecidos com base no conhecimento atual e nos resultados preliminares. O plasma sanguíneo dos pacientes diagnosticado com PDAC, indicado para terapia cirúrgico, será testado para os níveis de marcadores no pré -operatório e no pós -operatório antes da demissão, 3, 6 e 12 meses após a cirurgia durante o exame ambulatorial. Os resultados serão analisados ​​e avaliados estatisticamente em correlação com doenças residuais mínimas, taxa de sobrevivência, qualidade de vida e outros indicadores padronizados para monitorar o prognóstico da doença. A avaliação estatística será realizada em cooperação com especialistas com uma ampla experiência em bioinformática e estatística biomédica.

Resultados e significado:

Nosso projeto fornecerá uma revisão sistemática da literatura sobre biópsia líquida e análise de biomarcadores e sua incorporação à oncologia clínica em pacientes diagnosticados com PDAC. O efeito da administração intravenosa da secretina na liberação de ctDNA para pacientes com PDAC como método inovador será analisado, potencialmente adquirindo uma quantidade significativamente maior de informações genéticas para análise de biomarcadores nesses pacientes. Além disso, os resultados e o resultado ajudarão a projetar um painel de biomarcadores e avaliar sua implicação clínica no monitoramento de doenças e na avaliação de prognóstico.