眼表面移植のための自家ex Vivo結膜上皮細胞増殖

ヒト羊膜 (HAM) 上での ex-vivo 自家結膜拡張、その後の臨床移植手術

ハムの準備。 ヒト用に調製されたヒト羊膜 (HAM) は、シンガポール アイ バンクから入手します。 HAM は 37oC の水浴で急速に解凍し、リン酸緩衝生理食塩水で洗浄します。 羊膜上皮は、ディスパーゼ消化と機械的スクレーピングの組み合わせを使用して削除されます。 羊膜上皮細胞の完全な除去は、顕微鏡検査によって確認されます。 次に、HAM を基底膜側を上にして培養プレートに置き、使用前に 5% CO2 および 95% 空気の雰囲気中、37oC で DMEM とともに一晩インキュベートします。

HAM上での結膜細胞のエクスビボ増殖。 翼状片手術を受ける患者では、円蓋結膜生検が行われます。 組織は、上記の方法で、細胞懸濁液または外植片としてHAM上で培養されます。 メディアは 2 日ごとに変更され、文化は 2-3 週間維持されます。 細胞はコンフルエント シートを形成し、成層化と分化を開始します。 組織は、分化を促進するために気液界面に引き上げられます。

組織学的分析。 羊膜上の結膜上皮細胞シートを光学顕微鏡で調べます。 組織のサンプルは、標準的な組織学的手順を使用して固定および処理され、H&E および PAS 試薬で染色されます。 組織の電子顕微鏡検査が行われます。 切片は、サイトケラチン マーカーの免疫組織化学分析にもかけられます。

HAM上での培養結膜上皮細胞の臨床移植

羊膜上での培養結膜細胞の調製 様々な眼表面障害を有する患者が、最初の一連の移植のために選択される。 すべての患者は、手順のインフォームドコンセントのために完全なカウンセリングを受けます。 対側の健康な眼に対して円蓋結膜生検を行う。 PIは、これらの患者のヒト羊膜上で成長した自家結膜シートの移植を行います。 患部は、標準的な外科技術を使用して切除されます。 欠陥は、上皮側を上にしてHAM上の培養結膜細胞のシートで覆われます。 グラフトは、中断された 8/0 vicryl 縫合糸で隣接する結膜に固定されます。 眼瞼外傷から組織を保護するために、平面治療包帯コンタクト レンズが配置されます。 局所ステロイドと抗生物質の点眼薬を毎日投与して​​、眼の炎症を軽減します。 羊膜上の結膜の生存を綿密に監視し、患者を 3 か月間隔で最大 1 年間追跡調査します。 これらの訪問中に、これらの患者は、治癒の進行状況を監視するために前眼部の写真を撮り、フルオレセイン染色を受けます。

移植はまた、眼表面疾患、例えば、眼瘢痕性類天疱瘡、スティーブンス・ジョンソン症候群およびアルカリ損傷を有する選択された患者に対して実施され得る。 これらの重度の状態では、この手順は輪部幹細胞移植などの他の手順の重要な補助となる可能性があります。 最初の研究が成功した場合、この手順を従来の結膜自家移植および従来の羊膜移植と比較するランダム化臨床試験が計画されます。 したがって、成功することが判明した場合、HAM 上の培養結膜細胞の移植は、最終的にこれらの視覚衰弱状態の主要な手順または補助手順として使用される可能性があります。