用于眼表移植的自体体外结膜上皮细胞扩增

在人羊膜 (HAM) 上进行离体自体结膜扩张，然后进行临床移植手术

火腿的制备。 供人使用的人羊膜 (HAM) 将从新加坡眼库获得。 HAM 将在 37oC 水浴中快速解冻，并用磷酸盐缓冲盐水洗涤。 使用分散酶消化和机械刮擦的组合去除羊膜上皮。 羊膜上皮细胞的完全去除将通过显微镜确认。 然后将 HAM 置于培养板上，基底膜面朝上，并在使用前与 DMEM 在 37oC、5% CO2 和 95% 空气的气氛中孵育过夜。

结膜细胞在 HAM 上的离体扩增。 接受翼状胬肉手术的患者将进行穹窿结膜活检。 使用上述方法，组织将作为细胞悬浮液或外植体在 HAM 上培养。 每 2 天更换一次培养基，培养 2-3 周。 细胞将形成汇合片并开始分层和分化。 然后将组织提升到气液界面以促进分化。

组织学分析。 羊膜上的结膜上皮细胞片将通过光学显微镜检查。 组织样本将使用标准组织学程序进行固定和处理，并用 H&E 和 PAS 试剂染色。 将对组织进行电子显微镜检查。 还将对切片进行细胞角蛋白标记物的免疫组织化学分析。

HAM上培养的结膜上皮细胞的临床移植

在羊膜上制备培养的结膜细胞 将选择患有各种眼表疾病的患者进行最初的系列移植。 所有患者都将接受全面咨询，以获得对手术的知情同意。 将对对侧健康眼进行穹窿结膜活检。 PI将为这些患者进行在人羊膜上生长的自体结膜片的移植。 将使用标准手术技术切除患病区域。 缺陷将被 HAM 上培养的结膜细胞覆盖，上皮面朝上。 用间断的 8/0 薇乔缝线将移植物固定到相邻的结膜上。 放置平面治疗绷带隐形眼镜以保护组织免受眼睑创伤。 将每天施用局部类固醇和抗生素滴眼液以减少眼部炎症。 将密切监测羊膜上结膜的存活，患者将以 3 个月的间隔随访长达一年。 在这些就诊期间，这些患者将拍摄眼前节照片并进行荧光素染色以监测愈合进程。

也可以对选定的患有眼表疾病的患者进行移植，例如眼瘢痕性类天疱疮、Stevens Johnson 综合征和碱损伤。 对于这些严重的情况，该程序可能被证明是其他程序（例如角膜缘干细胞移植）的重要辅助手段。 如果初步研究成功，将计划进行一项随机临床试验，将此手术与传统结膜自体移植和传统羊膜移植进行比较。 因此，如果发现成功，将培养的结膜细胞移植到 HAM 上最终可能会用作主要程序或作为这些视觉衰弱条件的辅助程序。