Autológ ex vivo kötőhártya-hámsejt-tágítás szemfelszíni transzplantációhoz

Ex vivo autológ kötőhártya expanzió humán magzatvíz membránon (HAM), majd klinikai transzplantációs műtét

A HAM elkészítése. Az emberi használatra előkészített humán magzatvíz membránt (HAM) a szingapúri szembanktól szerzik be. A HAM-ot gyorsan felolvasztják 37 oC-os vízfürdőben, és foszfáttal pufferolt sóoldattal mossák. A magzatvízhám eltávolítása Dispase-emésztés és mechanikus kaparás kombinációjával történik. A magzatvíz hámsejtek teljes eltávolítását mikroszkóppal igazoljuk. A HAM-ot ezután tenyésztőlemezre helyezzük, az alapmembrán oldalával felfelé, és DMEM-mel inkubáljuk 37 °C-on 5% CO2 és 95% levegő atmoszférában egy éjszakán át felhasználás előtt.

Kötőhártyasejtek ex vivo expanziója HAM-on. Pterygium-műtéten átesett betegeknél fornicialis kötőhártya-biopsziát végeznek. A szövetet a HAM-on sejtszuszpenzióként vagy explantátumként tenyésztjük a fent leírt módszerekkel. A tápközeget 2 naponta cseréljük, és a tenyészetet 2-3 hétig fenntartjuk. A sejtek összefolyó lapot képeznek, és elkezdenek rétegezni és differenciálódni. A szövet ezután levegő-folyadék határfelületre kerül a differenciálódás elősegítése érdekében.

Szövettani elemzés. A magzatvíz membránján lévő kötőhártya hámrétegeit fénymikroszkóppal vizsgáljuk. A szövetmintákat rögzítik és standard szövettani eljárásokkal dolgozzák fel, és H&E és PAS reagensekkel festik meg. A szövet elektronmikroszkópos vizsgálatát végzik el. A metszeteket immunhisztokémiai elemzésnek is alávetjük a citokeratin markerek kimutatására.

Tenyésztett kötőhártya-hámsejtek klinikai transzplantációja HAM-on

Tenyésztett kötőhártya sejtek előállítása magzatvíz membránon Különböző szemfelszíni rendellenességekben szenvedő betegeket választunk ki a kezdeti transzplantációs sorozatra. Minden beteg teljes körű tanácsadáson megy keresztül, hogy beleegyezzen az eljárásokba. Fornicialis kötőhártya biopsziát végeznek az ellenoldali egészséges szemen. Ezeknél a betegeknél a PI elvégzi az emberi magzatvíz membránon növesztett autológ kötőhártya-lemez átültetését. A beteg területet a szokásos sebészeti technikával kivágják. A defektust a HAM-on lévő tenyésztett kötőhártya sejtekkel fedjük le, a hám oldalával felfelé. A graftot megszakított 8/0 vikril varratokkal rögzítjük a szomszédos kötőhártyához. Planoterápiás kötéses kontaktlencsét helyeznek el, hogy megvédjék a szövetet a szemhéj sérülésétől. A szemgyulladás csökkentése érdekében naponta helyi szteroid és antibiotikus szemcseppeket adunk. A kötőhártya túlélését az amniotikus membránon szorosan ellenőrizni fogják, és a betegeket 3 havi időközönként, legfeljebb egy évig követik nyomon. A látogatások során ezekről a betegekről fényképeket készítenek az elülső szegmensről, és fluoreszcein festést végeznek a gyógyulás előrehaladásának nyomon követése érdekében.

A transzplantáció olyan kiválasztott betegeken is elvégezhető, akiknek szemfelszíni betegségei vannak, például szemhártya-pemphigoid, Stevens Johnson-szindróma és lúgkárosodás. Ezeknél a súlyos állapotoknál ez az eljárás fontos kiegészítője lehet más eljárásoknak, például a limbális őssejt-transzplantációnak. Ha a kezdeti vizsgálat sikeres, véletlenszerű klinikai vizsgálatot terveznek, amely összehasonlítja ezt az eljárást a hagyományos kötőhártya-autografttal és a hagyományos magzatvíz-membrán-transzplantációval. Ezért, ha sikeresnek bizonyul, a tenyésztett kötőhártya-sejtek HAM-ra történő átültetése végső soron elsődleges vagy kiegészítő eljárásként használható ezekre a látást gyengítő állapotokra.