안구 표면 이식을 위한 자가 생체외 결막 상피 세포 확장

인간 양막(HAM)에서 생체 외 자가 결막 확장 후 임상 이식 수술

햄의 준비. 인간이 사용할 수 있도록 준비된 인간 양막(HAM)은 싱가포르 안구 은행에서 입수합니다. HAM은 37oC 수조에서 빠르게 해동하고 인산염 완충 식염수로 세척합니다. 양막 상피는 Dispase 소화와 기계적 스크래핑의 조합을 사용하여 제거됩니다. 양막 상피 세포의 완전한 제거는 현미경으로 확인됩니다. 그런 다음 HAM을 배양 플레이트에 놓고 기저막 면이 위로 향하게 하고 사용하기 전에 밤새 5% CO2 및 95% 공기 분위기에서 37oC에서 DMEM과 함께 배양합니다.

HAM에서 결막 세포의 생체 외 확장. 익상편 수술을 받는 환자에서 결막 생검을 시행합니다. 조직은 위에서 설명한 방법으로 HAM에서 세포 현탁액 또는 외식편으로 배양됩니다. 배지는 2일마다 교체하고 배양은 2-3주 동안 유지합니다. 세포는 합류 시트를 형성하고 층화 및 분화를 시작합니다. 그런 다음 조직을 공기-액체 경계면으로 올려 분화를 촉진합니다.

조직학적 분석. 양막의 결막 상피 세포 시트는 광학 현미경으로 검사됩니다. 조직 샘플은 표준 조직학적 절차를 사용하여 고정 및 처리되고 H&E 및 PAS 시약으로 염색됩니다. 전자 현미경 검사는 조직에 대해 수행됩니다. 섹션은 또한 사이토케라틴 마커에 대한 면역조직화학 분석을 받게 됩니다.

HAM에서 배양된 결막 상피 세포의 임상 이식

양막에 배양된 결막 세포의 준비 다양한 안구 표면 장애가 있는 환자를 초기 일련의 이식을 위해 선택합니다. 모든 환자는 절차에 대한 사전 동의를 위해 완전한 상담을 받게 됩니다. 반대쪽 건강한 눈에 결막 생검을 시행합니다. PI는 이러한 환자들에게 인간 양막에서 성장한 자가 결막 시트의 이식을 수행할 것입니다. 질병 부위는 표준 수술 기법을 사용하여 절제됩니다. 결함은 HAM에서 배양된 결막 세포 시트로 덮여 있으며 상피 쪽이 위로 향하게 됩니다. 이식편은 중단된 8/0 비크릴 봉합사로 인접한 결막에 고정됩니다. 눈꺼풀 외상으로부터 조직을 보호하기 위해 계획 치료 붕대 콘택트 렌즈를 배치합니다. 안구 염증을 줄이기 위해 국소 스테로이드 및 항생제 안약을 매일 투여합니다. 양막에서 결막의 생존을 면밀히 모니터링하고 환자를 최대 1년까지 3개월 간격으로 추적 관찰합니다. 이 방문 동안, 이 환자들은 치유의 진행을 모니터링하기 위해 전방 부분 사진을 찍고 플루오레세인 염색을 할 ​​것입니다.

이식은 안구 표면 질환, 예를 들어 안 반흔 유천포창, 스티븐스 존슨 증후군 및 알칼리 손상이 있는 선택된 환자에서 수행될 수도 있습니다. 이러한 심각한 상태의 경우, 이 절차는 윤부 줄기 세포 이식과 같은 다른 절차에 대한 중요한 부속물로 입증될 수 있습니다. 초기 연구가 성공하면 이 절차를 기존의 결막 자가 이식 및 기존 양막 이식과 비교하는 무작위 임상 시험을 계획할 예정입니다. 따라서 성공적인 것으로 밝혀지면 배양된 결막 세포를 HAM에 이식하는 것이 결국 이러한 시각적으로 쇠약해지는 조건에 대한 기본 절차 또는 보조 절차로 사용될 수 있습니다.