Autologinen ex vivo sidekalvon epiteelisolujen laajennus silmän pintasiirtoa varten

Ex-vivo autologinen sidekalvon laajeneminen ihmisen amnionkalvolla (HAM), jota seuraa kliininen siirtoleikkaus

HAM:n valmistus. Ihmisten käyttöön valmistettu ihmisen lapsivesikalvo (HAM) hankitaan Singaporen silmäpankista. HAM sulatetaan nopeasti 37°C vesihauteessa ja pestään fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella. Lapsivesiepiteeli poistetaan käyttämällä Dispase-digestiota ja mekaanista kaapimista. Lapsiveden epiteelisolujen täydellinen poistuminen varmistetaan mikroskopialla. HAM asetetaan sitten viljelylevylle kellarikalvopuoli ylöspäin ja inkuboidaan DMEM:n kanssa 37 °C:ssa 5 % CO2:ta ja 95 % ilmaa sisältävässä ilmakehässä yön yli ennen käyttöä.

Sidekalvon solujen ex vivo -laajeneminen HAM:lla. Potilaille, joille tehdään pterygiumleikkaus, tehdään sidekalvobiopsia. Kudosta viljellään HAM:lla joko solususpensiona tai eksplantteina edellä kuvatuilla menetelmillä. Elatusaine vaihdetaan 2 päivän välein ja viljelmää ylläpidetään 2-3 viikkoa. Solut muodostavat yhtenäisen levyn ja alkavat kerrostua ja erilaistua. Kudos nostetaan sitten ilma-neste-rajapinnalle erilaistumisen edistämiseksi.

Histologinen analyysi. Lapsikalvon sidekalvon epiteelisolulevyt tutkitaan valomikroskopialla. Kudosnäytteet kiinnitetään ja käsitellään tavanomaisilla histologisilla menetelmillä ja värjätään H&E- ja PAS-reagensseilla. Kudokselle suoritetaan elektronimikroskooppinen tutkimus. Leikkeet alistetaan myös immunohistokemialliseen analyysiin sytokeratiinimarkkerien varalta.

Viljeltyjen sidekalvon epiteelisolujen kliininen siirto HAM:lla

Viljeltyjen sidekalvosolujen valmistaminen lapsivesikalvolla Potilaat, joilla on erilaisia ​​silmän pintahäiriöitä, valitaan ensimmäiseen siirtosarjaan. Kaikki potilaat käyvät läpi täyden neuvonnan tietoisen suostumuksen saamiseksi toimenpiteisiin. Vastapuoliselle terveelle silmälle tehdään sidekalvobiopsia. PI suorittaa näille potilaille ihmisen amnionkalvolle kasvatetun autologisen sidekalvon siirrot. Sairas alue leikataan normaalilla kirurgisella tekniikalla. Vika peitetään viljeltyjen sidekalvosolujen levyllä HAM:ssa epiteelipuoli ylöspäin. Siirrännäinen kiinnitetään viereiseen sidekalvoon katkennetuilla 8/0 vikryyliompeleilla. Planoterapeuttinen sidospiilolinssi asetetaan suojaamaan kudosta silmäluomivaurioilta. Paikallisia steroideja ja antibioottisia silmätippoja annetaan päivittäin silmätulehduksen vähentämiseksi. Lapsikalvon sidekalvon eloonjäämistä seurataan tarkasti ja potilaita seurataan kolmen kuukauden välein vuoden ajan. Näiden käyntien aikana näille potilaille otetaan etuosan valokuvat ja fluoreseiinivärjäys paranemisen edistymisen seuraamiseksi.

Transplantaatioita voidaan tehdä myös valituille potilaille, joilla on silmän pintasairaus, esimerkiksi silmän pomfigoidi, Stevens Johnsonin oireyhtymä ja alkalivaurio. Näissä vaikeissa olosuhteissa tämä toimenpide voi osoittautua tärkeäksi lisäykseksi muihin toimenpiteisiin, kuten limbaalikantasolujen siirtoon. Jos ensimmäinen tutkimus onnistuu, suunnitellaan satunnaistettu kliininen tutkimus, jossa tätä menettelyä verrataan tavanomaiseen sidekalvon omasiirtoon ja tavanomaiseen lapsivesikalvon siirtoon. Siksi, jos se todetaan onnistuneeksi, viljeltyjen sidekalvosolujen siirtoa HAM:iin voidaan lopulta käyttää ensisijaisena menettelynä tai lisätoimenpiteenä näissä visuaalisesti heikentävissä tiloissa.