女性の腹圧性尿失禁におけるプロテオミクス パターン: パイロット研究
目的: 研究の主な目的は、腹圧性尿失禁 (SUI) 患者と健康な対照者のタンパク質濃度を比較することです。
目的: このパイロット研究は、健康な女性と比較して、SUI に苦しむ女性のタンパク質プロファイルの変化の可能性を特定し、SUI の潜在的なタンパク質バイオマーカーを識別することを目的としています。
主な結果の測定: 疾患のある被験者と健康な被験者における尿中プロテオーム セクレトームの質量分析測定 (配列範囲と同定されたタンパク質の数)
試験デザイン: 前向き症例対照研究
設定: ウィーン医科大学の婦人科産科とウィーン医科大学の中核施設プロテオミクスの協力
母集団：ウィーン医科大学産科婦人科の外来診療に通うSUIの女性患者20名と健康な患者20名（サンプルサイズ計算FDR 0.05、検出力80%、真のH0の推定割合0.95、標準化効果の推定） 1)のサイズ
方法: 実施する検査: 患者病歴、誘発負荷試験、ICIQ 短形式質問表、残尿量 (超音波)、および尿分析 (ディップスティック検査)。 自然排尿後に患者から尿サンプルを採取し、これにプロテアーゼ阻害剤を直ちに添加します。 日常的な検査およびさらなる研究のために、患者の末梢静脈から 2 つの血清血液バイアル (各 9 ml) が採取されます。
プロテオミクス分析は、質量分析検出 (MS) を備えたクロマトグラフィー分離 (LC) を使用して実行されます。
調査の概要
詳細な説明
方法:
サンプルの準備と分析には以下が含まれます。
- サンプルを収集し、プロテアーゼ阻害剤カクテル (Roche、Complete Protease Inhibitor Cocktail) を直ちに添加します。
- 細胞破片を除去するための尿の遠心分離と濾過。
- メタノール/クロロホルム分離を適用してタンパク質を沈殿させ、考えられるすべての非タンパク質性物質を除去します。
- 溶液中のトリプシン、ペプシン、および Glu-C を適用するタンパク質消化。
ナノ HPLC およびさまざまなクロマトグラフィー アプローチを使用したペプチド分離。
- ペプチドの逆相 (RP) 分離と MS 検出
- 極性ペプチドの識別のための HILIC (親水性相互作用液体クロマトグラフィー) を使用したペプチドの分離。
- MS に直接結合した RP および HILIC に加えて、消化されたペプチドは多次元アプローチを使用して分離されます。 HILIC 条件下で操作される弱陰イオン交換カラムは、リン酸化やアセチル化などの翻訳後修飾を伴うペプチドの分離に使用され、検出のダイナミック レンジが増加します。 この分離中に、画分が収集され、MS 検出を備えた RP および HILIC に再注入されます。
- すべてのナノ HPLC 分離は、生体適合性分離システムを使用して実行されます。
消化されたペプチドの質量分析は、イオントラップと飛行時間 (qToF) MS という 2 つの異なる検出方法を使用して実行されます。 qToF 質量分析による検出および分析は、サンプル中で検出されたペプチドおよびタンパク質のラベルフリー定量にも使用されます。 分離とイオン化の技術的な変動を補正するために、すべての測定は 3 回実行されます。
一般的なデータベース検索は、分析時の実際のバージョンの Human SwissProt データベースを使用して実行されます。 データ検索はMascot（http://www.matrixscience.com/）を使用して行われます。 および X!Tandem (http://www.thegpm.org/tandem/) 検索マシン、および Scaffold (www.proteomsoftware.com) を使用した最終的なデータの割り当てとフィルタリング。
統計分析：
データ解析は生体伝導体パッケージlimmaを用いて行われます。 データ分析の前に、四分位間範囲が低い測定値を持つタンパク質を除外することによってデータがフィルター処理されます。 グループは、年齢を調整した調整されたペアの t 統計によって比較されます。 複数のテストの調整は、FDR を 0.05 に制御する Benjamini-Hochberg 補正によって行われます。
研究の種類
入学 (実際)
連絡先と場所
研究場所
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Vienna、オーストリア、1090
- Medical University of Vienna, Department of Obstetrics and Gynaecology
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
健康ボランティアの受け入れ
サンプリング方法
調査対象母集団
説明
包含基準:
- 腹圧性尿失禁の患者：少なくとも3か月にわたる腹圧性尿失禁の症状の病歴（努力や運動時、またはくしゃみや咳の際に不随意に漏れてしまうという既往歴の訴えを含む）および誘発性ストレス検査陽性（観察された経尿道的尿失禁として定義される）膀胱容量が300ml以下で咳またはバルサルバ操作と同時に行われた尿）
- 自立して働くことができる患者
- すべての研究手順を完全に理解し、研究参加に対して書面によるインフォームドコンセントを提供できる患者
- 年齢 18 歳以上
- 経膣分娩後の患者
除外基準:
- 以前にSUIの治療（外科的治療または薬物治療の両方）を受けた患者
- SUI以外の制御不能な過活動膀胱（OAB）または尿失禁の病歴がある患者（ストレス誘発性ではなく尿意切迫感を伴う、またはその直前に起こる不随意の尿漏れに関する既往歴の訴えを含む）
- 十分に確立された神経障害を有する患者（例： 多発性硬化症、パーキンソン病、アルツハイマー病）
- 骨盤臓器脱ステージ ≥ II (ICS 分類) の患者
- 臨床的に重大な膀胱出口閉塞のある患者および/または排尿後残存量（PVR）> 100mlの患者
- -インフォームドコンセントの日までの過去3か月以内に、急性尿閉の病歴または急性尿閉による繰り返しのカテーテル治療の病歴がある患者
- カテーテルが留置されている患者および断続的な自己カテーテル治療を行っている患者
- インフォームドコンセントの日から30日以内に膀胱生検またはその他の軽度の骨盤外科的介入を受けた患者
- 膀胱がんの病歴のある患者
- 急性または再発性の尿路感染症および/または原因不明の血尿のある患者
- 膀胱または尿道に結石があり、症状を引き起こす上部管結石疾患のある患者
- 腎不全の証拠がある患者（クレアチニンが正常の上限の1.5倍を超える）
- 肝疾患の証拠がある患者（総ビリルビンが正常の上限の1.5倍を超える、またはAST、ALT、またはアルカリホスファターゼが正常の上限の2倍を超える）
- アルコールおよび/またはその他の薬物乱用の履歴がある患者
- 研究の手順や指示を理解して従うことができない、および/またはその可能性が低い患者
- 妊娠中または授乳中の患者
- 研究者らの意見ではこの研究に参加すべきでない重篤な病状を患っている患者
対照群は、腹圧性尿失禁を除き、症例群と同じ包含基準および除外基準を持つ患者で表されます。
研究計画
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
コホートと介入
グループ/コホート |
介入・治療 |
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腹圧性尿失禁
包含基準および除外基準に従って腹圧性尿失禁を呈する患者
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健康的なコントロール
腹圧性尿失禁を除き、症例グループと同じ包含基準および除外基準を持つ健康な女性
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この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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疾患のある被験者と健康な被験者における尿中プロテオーム セクレトームの質量分析測定 (配列範囲と同定されたタンパク質の数)
時間枠：主要評価項目は、募集後 4 ～ 7 日以内に各参加者に対して評価されます。
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腹圧性尿失禁患者と健康な対照者における、同定されたタンパク質の数と質量分析スペクトル数に基づくタンパク質濃度の比較。
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主要評価項目は、募集後 4 ～ 7 日以内に各参加者に対して評価されます。
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協力者と研究者
捜査官
- 主任研究者：Heinz Kölbl, Univ.-Prof.Dr.Dr.h.c.、Medical University of Vienna, Department of Obstetrics and Gynaecology
出版物と役立つリンク
一般刊行物
- Petricoin EF, Ardekani AM, Hitt BA, Levine PJ, Fusaro VA, Steinberg SM, Mills GB, Simone C, Fishman DA, Kohn EC, Liotta LA. Use of proteomic patterns in serum to identify ovarian cancer. Lancet. 2002 Feb 16;359(9306):572-7. doi: 10.1016/S0140-6736(02)07746-2.
- Chen B, Wen Y, Zhang Z, Guo Y, Warrington JA, Polan ML. Microarray analysis of differentially expressed genes in vaginal tissues from women with stress urinary incontinence compared with asymptomatic women. Hum Reprod. 2006 Jan;21(1):22-9. doi: 10.1093/humrep/dei276. Epub 2005 Aug 26.
- Mushkat Y, Bukovsky I, Langer R. Female urinary stress incontinence--does it have familial prevalence? Am J Obstet Gynecol. 1996 Feb;174(2):617-9. doi: 10.1016/s0002-9378(96)70437-4.
- Elia G, Bergman J, Dye TD. Familial incidence of urinary incontinence. Am J Obstet Gynecol. 2002 Jul;187(1):53-5. doi: 10.1067/mob.2002.124842.
- Hu S, Loo JA, Wong DT. Human body fluid proteome analysis. Proteomics. 2006 Dec;6(23):6326-53. doi: 10.1002/pmic.200600284.
- Ho L, Sharma N, Blackman L, Festa E, Reddy G, Pasinetti GM. From proteomics to biomarker discovery in Alzheimer's disease. Brain Res Brain Res Rev. 2005 Apr;48(2):360-9. doi: 10.1016/j.brainresrev.2004.12.025.
- Semmes OJ, Feng Z, Adam BL, Banez LL, Bigbee WL, Campos D, Cazares LH, Chan DW, Grizzle WE, Izbicka E, Kagan J, Malik G, McLerran D, Moul JW, Partin A, Prasanna P, Rosenzweig J, Sokoll LJ, Srivastava S, Srivastava S, Thompson I, Welsh MJ, White N, Winget M, Yasui Y, Zhang Z, Zhu L. Evaluation of serum protein profiling by surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry for the detection of prostate cancer: I. Assessment of platform reproducibility. Clin Chem. 2005 Jan;51(1):102-12. doi: 10.1373/clinchem.2004.038950.
研究記録日
主要日程の研究
研究開始
一次修了 (実際)
研究の完了 (実際)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (推定)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
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