Proteominen malli naisten stressiinkontinenssissa: pilottitutkimus
Tavoite: Tutkimuksen ensisijaisena tavoitteena on verrata proteiinipitoisuuksia stressiinkontinenssipotilaiden (SUI) ja terveiden kontrollien välillä.
Tavoite: Tämän pilottitutkimuksen tavoitteena on määrittää mahdollinen muuttunut proteiiniprofiili SUI:sta kärsivillä naisilla verrattuna terveisiin naisiin ja siten erottaa mahdollinen proteiinin biomarkkeri SUI:lle.
Päätulosmitta: virtsan proteomisen erityksen massaspektrometrinen mittaus sairailla ja terveillä henkilöillä (sekvenssin kattavuus ja tunnistettujen proteiinien lukumäärä)
Kokeilun suunnittelu: Prospektiivinen tapaus-verrokkitutkimus
Asetus: Wienin lääketieteellisen yliopiston gynekologian ja synnytysten osasto yhteistyössä Wienin lääketieteellisen yliopiston Core Facilities Proteomicsin kanssa
Populaatio: 20 naispotilasta, joilla on SUI, ja 20 tervettä potilasta, jotka käyvät Wienin lääketieteellisen yliopiston synnytys- ja gynekologian laitoksen poliklinikalla (näytteen koon laskelma FDR 0,05, teho 80 %, oletettu osuus todellisesta H0:sta 0,95, oletettu standardoitu vaikutus koko 1)
Menetelmät: Suoritettavat tutkimukset: potilashistoria, provosoiva stressitesti, ICIQ-lyhytmuotoinen kyselylomake, jäännösvirtsan tilavuus (ultraääni) ja virtsan analyysi (mittatikkutesti). Potilaalta otetaan spontaanin virtsaamisen jälkeen virtsanäyte, johon lisätään välittömästi proteaasi-inhibiittoria. Kaksi seerumiveripulloa (kukin 9 ml) otetaan potilaan ääreislaskimosta rutiinilaboratorio- ja lisätutkimuksia varten.
Proteomiikka-analyysi suoritetaan käyttämällä kromatografista erotusta (LC) ja massaspektrometristä ilmaisua (MS).
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Menetelmät:
Näytteen valmistelu ja analyysi sisältävät:
- Näytteenotto ja välitön proteaasi-inhibiittoricocktail (Roche, Complete Protease Inhibitor Cocktail) lisääminen.
- Virtsan sentrifugointi ja suodatus solujätteen poistamiseksi.
- Proteiinisaostus käyttämällä metanoli/kloroformierotusta kaikkien mahdollisten ei-proteiinisten aineiden poistamiseksi.
- Proteiinin pilkkominen käyttämällä liuoksessa olevaa trypsiiniä, pepsiiniä ja Glu-C:tä.
Peptidien erotus nano-HPLC:llä ja erilaisilla kromatografisilla lähestymistavoilla.
- Peptidien käänteisfaasierotus (RP) ja MS-detektio
- Peptidien erottaminen HILIC:llä (hydrophilic Interaction Liquid Chromatography) polaaristen peptidien erottamiseksi.
- MS:ään suoraan kytkettyjen RP:n ja HILIC:n lisäksi pilkotut peptidit erotetaan käyttämällä moniulotteisia lähestymistapoja. Heikkoja anioninvaihtopylväitä, joita käytetään HILIC-olosuhteissa, käytetään erottamaan peptidit, jotka sisältävät translaation jälkeisiä modifikaatioita, kuten fosforylaatiota tai asetylaatiota, mikä lisää havaitsemisen dynaamista aluetta. Tämän erotuksen aikana fraktiot kerätään ja injektoidaan uudelleen RP:hen ja HILIC:iin MS-detektiolla.
- Kaikki nano-HPLC-erotukset suoritetaan bioyhteensopivalla erotusjärjestelmällä.
Digestoitujen peptidien massaspektrometrinen analyysi suoritetaan käyttämällä kahta erilaista havainnointimenetelmää: ioniloukkua ja lentoajan (qToF) MS:ää. qToF-massaspektrometristä havaitsemista ja analyysiä käytetään myös näytteistä havaittujen peptidien ja proteiinien leimattomaan kvantifiointiin. Kaikki mittaukset suoritetaan kolmena kappaleena erotuksen ja ionisaation teknisen vaihtelun korjaamiseksi.
Yleinen tietokantahaku suoritetaan käyttämällä Human SwissProt -tietokantaa sen todellisessa versiossa analyysihetkellä. Tietojen haku suoritetaan Mascotilla (http://www.matrixscience.com/) ja X!Tandem (http://www.thegpm.org/tandem/) hakukoneet ja lopullinen tietojen allokointi ja suodatus Scaffoldin (www.proteomsoftware.com) avulla.
Tilastollinen analyysi:
Tietojen analysointi suoritetaan biojohdepaketilla limma. Ennen tietojen analysointia tiedot suodatetaan sulkemalla pois proteiinit, joiden mittaukset ovat alhaisella kvartiilivälillä. Ryhmiä verrataan moderoiduilla parillisilla t-tilastoilla iän mukaan. Säätö useita testauksia varten tehdään Benjamini-Hochberg-korjauksella, joka ohjaa FDR:tä arvoon 0,05.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Todellinen)
Yhteystiedot ja paikat
Opiskelupaikat
-
-
-
Vienna, Itävalta, 1090
- Medical University of Vienna, Department of Obstetrics and Gynaecology
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Näytteenottomenetelmä
Tutkimusväestö
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- potilaat, joilla on stressiinkontinenssi: anamneesissa stressiinkontinenssin oireita vähintään 3 kuukauden ajan (mukaan lukien anamnestiset valitukset tahattomasta vuotamisesta ponnistuksen tai rasituksen tai aivastelun tai yskimisen yhteydessä) ja positiivinen provosoiva stressitesti (määritelty havaittavaksi transuretraaliseksi virtsa, joka oli samanaikaisesti yskän tai Valsalva-liikkeen kanssa virtsarakon tilavuudessa 300 ml tai vähemmän)
- itsenäiseen työskentelyyn kykeneviä potilaita
- potilaat, jotka pystyvät ymmärtämään täysin kaikki tutkimusmenettelyt ja antamaan kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen tutkimukseen osallistumiseen
- ikä ≥ 18
- potilaille emättimen synnytyksen jälkeen
Poissulkemiskriteerit:
- potilaat, joita on aiemmin hoidettu SUI:n vuoksi (sekä kirurgisesti että lääkehoidolla)
- potilaat, joilla on lääketieteellinen anamneesissa hallitsematon yliaktiivinen virtsarakko (OAB) tai muu virtsanpidätyskyvyttömyys kuin SUI (mukaan lukien anamnestiset valitukset tahattomasta virtsanvuodosta, johon liittyy tai välittömästi edeltää kiireellisyys, ei stressin aiheuttamaa)
- potilailla, joilla on vakiintunut neurologinen häiriö (esim. MS-tauti, Parkinsonin tauti, Alzheimerin tauti)
- potilaat, joilla on lantion elimen prolapsi vaihe ≥ II (ICS-luokitus)
- potilaat, joilla on kliinisesti merkittävä virtsarakon ulostulotukos ja/tai potilaat, joiden jäännöstilavuus (PVR) > 100 ml
- potilaat, joilla on ollut akuuttia virtsanpidätystä tai toistuvia katetrointeja akuutin virtsan pidättymisen vuoksi viimeisten 3 kuukauden aikana ennen tietoisen suostumuksen päivää
- potilaat, joilla on pysyvä katetri ja potilaat, jotka harjoittavat ajoittaista itsekatetrointia
- potilaat, joille on tehty virtsarakon biopsia tai mikä tahansa muu pieni lantion alueen kirurginen toimenpide alle 30 päivää ennen tietoisen suostumuksen päivää
- potilailla, joilla on ollut virtsarakon syöpä
- potilailla, joilla on akuutti tai toistuva virtsatieinfektio ja/tai selittämätön hematuria
- potilaat, joilla on kiviä virtsarakossa tai virtsaputkessa ja ylempien teiden kivitauti, joka aiheuttaa oireita
- potilaat, joilla on merkkejä munuaisten vajaatoiminnasta (kreatiniini > 1,5x normaalin yläraja)
- potilaat, joilla on merkkejä maksasairaudesta (kokonaisbilirubiini > 1,5x normaalin yläraja tai ASAT tai ALAT tai alkalinen fosfataasi > 2x normaalin yläraja)
- potilaat, joilla on ollut alkoholin ja/tai muiden huumeiden väärinkäyttöä
- potilaat, jotka eivät pysty ja/tai eivät todennäköisesti ymmärrä ja noudattaa tutkimusmenettelyjä ja ohjeita
- raskaana oleville tai imettäville potilaille
- potilaat, joilla on vakavia sairauksia ja joiden ei tutkijoiden mielestä pitäisi osallistua tähän tutkimukseen
Kontrolliryhmää edustavat potilaat, joilla on samat sisällyttämis- ja poissulkemiskriteerit kuin tapausryhmässä, paitsi stressiinkontinenssi.
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
Kohortit ja interventiot
Ryhmä/Kohortti |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
stressiinkontinenssi
Potilaat, joilla on stressiinkontinenssi mukaanlukien ja poissulkemiskriteerien mukaan
|
|
|
terveet kontrollit
terveet naiset, joilla oli samat sisällyttämis- ja poissulkemiskriteerit kuin tapausryhmässä, lukuun ottamatta stressiinkontinenssia
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
virtsan proteomisen erityksen massaspektrometrinen mittaus sairailla ja terveillä henkilöillä (sekvenssin kattavuus ja tunnistettujen proteiinien lukumäärä)
Aikaikkuna: Ensisijainen tulosmittaus arvioidaan jokaisen osallistujan osalta 4-7 päivän kuluessa rekrytoinnin jälkeen
|
Proteiinipitoisuuksien vertailu tunnistettujen proteiinien lukumäärän ja massaspektrometrisen spektriluvun perusteella potilailla, joilla on stressiinkontinenssi ja terveet kontrollit.
|
Ensisijainen tulosmittaus arvioidaan jokaisen osallistujan osalta 4-7 päivän kuluessa rekrytoinnin jälkeen
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Tutkijat
- Päätutkija: Heinz Kölbl, Univ.-Prof.Dr.Dr.h.c., Medical University of Vienna, Department of Obstetrics and Gynaecology
Julkaisuja ja hyödyllisiä linkkejä
Yleiset julkaisut
- Petricoin EF, Ardekani AM, Hitt BA, Levine PJ, Fusaro VA, Steinberg SM, Mills GB, Simone C, Fishman DA, Kohn EC, Liotta LA. Use of proteomic patterns in serum to identify ovarian cancer. Lancet. 2002 Feb 16;359(9306):572-7. doi: 10.1016/S0140-6736(02)07746-2.
- Chen B, Wen Y, Zhang Z, Guo Y, Warrington JA, Polan ML. Microarray analysis of differentially expressed genes in vaginal tissues from women with stress urinary incontinence compared with asymptomatic women. Hum Reprod. 2006 Jan;21(1):22-9. doi: 10.1093/humrep/dei276. Epub 2005 Aug 26.
- Mushkat Y, Bukovsky I, Langer R. Female urinary stress incontinence--does it have familial prevalence? Am J Obstet Gynecol. 1996 Feb;174(2):617-9. doi: 10.1016/s0002-9378(96)70437-4.
- Elia G, Bergman J, Dye TD. Familial incidence of urinary incontinence. Am J Obstet Gynecol. 2002 Jul;187(1):53-5. doi: 10.1067/mob.2002.124842.
- Hu S, Loo JA, Wong DT. Human body fluid proteome analysis. Proteomics. 2006 Dec;6(23):6326-53. doi: 10.1002/pmic.200600284.
- Ho L, Sharma N, Blackman L, Festa E, Reddy G, Pasinetti GM. From proteomics to biomarker discovery in Alzheimer's disease. Brain Res Brain Res Rev. 2005 Apr;48(2):360-9. doi: 10.1016/j.brainresrev.2004.12.025.
- Semmes OJ, Feng Z, Adam BL, Banez LL, Bigbee WL, Campos D, Cazares LH, Chan DW, Grizzle WE, Izbicka E, Kagan J, Malik G, McLerran D, Moul JW, Partin A, Prasanna P, Rosenzweig J, Sokoll LJ, Srivastava S, Srivastava S, Thompson I, Welsh MJ, White N, Winget M, Yasui Y, Zhang Z, Zhu L. Evaluation of serum protein profiling by surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry for the detection of prostate cancer: I. Assessment of platform reproducibility. Clin Chem. 2005 Jan;51(1):102-12. doi: 10.1373/clinchem.2004.038950.
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus
Ensisijainen valmistuminen (Todellinen)
Opintojen valmistuminen (Todellinen)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Arvioitu)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
- Käyttäytymisoireet
- Mielenterveyshäiriöt
- Urologiset sairaudet
- Alempien virtsateiden oireet
- Urologiset ilmenemismuodot
- Virtsaamishäiriöt
- Eliminaatiohäiriöt
- Naisten virtsa- ja sukupuolielinten sairaudet
- Naisten virtsa- ja sukupuolielinten sairaudet ja raskauden komplikaatiot
- Urogenitaaliset sairaudet
- Miesten urogenitaaliset sairaudet
- Virtsankarkailu
- Enureesi
- Virtsankarkailu, stressi
Muut tutkimustunnusnumerot
- EK 1788/2013
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .