Patrón proteómico en la incontinencia urinaria de esfuerzo femenina: un estudio piloto
Objetivo: El objetivo principal del estudio es la comparación de las concentraciones de proteínas entre pacientes con incontinencia urinaria de esfuerzo (IUE) y controles sanos.
Objetivo: Este estudio piloto tiene como objetivo determinar un posible perfil proteico alterado en mujeres que padecen IUE, en comparación con mujeres sanas y, por lo tanto, discriminar un biomarcador proteico potencial para la IUE.
Medida de resultado principal: medición espectrométrica de masas del secretoma proteómico urinario en sujetos enfermos y sanos (cobertura de secuencia y número de proteínas identificadas)
Diseño del ensayo: estudio prospectivo de casos y controles
Ámbito: Departamento de Ginecología y Obstetricia de la Universidad de Medicina de Viena en cooperación con las Instalaciones Centrales de Proteómica de la Universidad de Medicina de Viena
Población: Veinte pacientes mujeres con IUE y veinte pacientes sanos que asisten a la consulta externa del Departamento de Obstetricia y Ginecología de la Universidad Médica de Viena (cálculo del tamaño de la muestra FDR 0,05, potencia del 80 %, proporción asumida de H0 real 0,95, efecto estandarizado asumido tamaño de 1)
Métodos: Exámenes a realizar: historia clínica, prueba de esfuerzo de provocación, cuestionario breve ICIQ, volumen de orina residual (ultrasonido) y análisis de orina (tira reactiva). Se obtiene una muestra de orina del paciente después de una micción espontánea, a la que se le añadirá inmediatamente un inhibidor de la proteasa. Se toman dos viales de suero sanguíneo (cada uno de 9 ml) de una vena periférica del paciente para el laboratorio de rutina y la investigación adicional.
El análisis proteómico se realizará mediante separación cromatográfica (LC) con detección espectrométrica de masas (MS).
Descripción general del estudio
Estado
Condiciones
Intervención / Tratamiento
Descripción detallada
Métodos:
La preparación y el análisis de la muestra incluirán:
- Toma de muestras y adición inmediata de cóctel inhibidor de proteasas (Roche, Complete Protease Inhibitor Cocktail).
- Centrifugación y filtración de orina para la eliminación de restos celulares.
- Precipitación de proteínas mediante la aplicación de separación de metanol/cloroformo para la eliminación de todas las posibles sustancias no proteicas.
- Digestión de proteínas aplicando tripsina, pepsina y Glu-C en solución.
Separación de péptidos mediante nano HPLC y diferentes enfoques cromatográficos.
- Separación de fase reversa (RP) de péptidos y detección de MS
- Separación de péptidos mediante HILIC (Cromatografía Líquida de Interacción Hidrofílica) para la discriminación de péptidos polares.
- Además de RP e HILIC acoplados directamente a MS, los péptidos digeridos se separarán mediante enfoques multidimensionales. Las columnas de intercambio aniónico débil operadas en condiciones HILIC se utilizarán para separar péptidos que llevan modificaciones postraduccionales como la fosforilación o la acetilación, aumentando así el rango dinámico de detección. Durante esta separación, las fracciones se recolectarán y reinyectarán en el RP y el HILIC con detección MS.
- Todas las separaciones de nano HPLC se realizarán utilizando un sistema de separación biocompatible.
El análisis espectrométrico de masas de los péptidos digeridos se realizará utilizando dos métodos de detección diferentes: trampa de iones y MS de tiempo de vuelo (qToF). La detección y el análisis espectrométrico de masas qToF también se utilizarán para la cuantificación sin etiquetas de péptidos y proteínas detectados en las muestras. Todas las mediciones se realizarán por triplicado para proporcionar correcciones por la variabilidad técnica de separación e ionización.
La búsqueda general en la base de datos se realizará utilizando la base de datos Human SwissProt en su versión real en el momento del análisis. La búsqueda de datos se realizará utilizando Mascot (http://www.matrixscience.com/) y X!Tándem (http://www.thegpm.org/tandem/) máquinas de búsqueda, y la asignación y filtrado final de datos mediante el uso de Scaffold (www.proteomsoftware.com).
Análisis estadístico:
El análisis de datos se realizará con el paquete de bioconductores limma. Antes del análisis de datos, los datos se filtrarán excluyendo proteínas con mediciones con un rango intercuartílico bajo. Los grupos se compararán mediante estadísticas t pareadas moderadas ajustadas por edad. El ajuste para pruebas múltiples se realizará mediante la corrección de Benjamini-Hochberg controlando el FDR en 0,05.
Tipo de estudio
Inscripción (Actual)
Contactos y Ubicaciones
Ubicaciones de estudio
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Vienna, Austria, 1090
- Medical University of Vienna, Department of Obstetrics and Gynaecology
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Criterios de participación
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
Acepta Voluntarios Saludables
Método de muestreo
Población de estudio
Descripción
Criterios de inclusión:
- Pacientes con incontinencia urinaria de esfuerzo: antecedentes de síntomas de incontinencia urinaria de esfuerzo durante al menos 3 meses (incluidas quejas anamnésicas de fugas involuntarias por esfuerzo o esfuerzo o al estornudar o toser) y una prueba de esfuerzo de provocación positiva (definida como una pérdida transuretral observada de orina simultánea con tos o maniobra de Valsalva con un volumen vesical de 300 ml o menos)
- pacientes capaces de trabajar de forma independiente
- Pacientes que pueden comprender completamente todos los procedimientos del estudio y dar su consentimiento informado por escrito para participar en el estudio.
- edad ≥ 18
- pacientes después del parto vaginal
Criterio de exclusión:
- pacientes que han sido tratados previamente por IUE (tanto tratamiento quirúrgico como farmacológico)
- pacientes que tienen antecedentes médicos de vejiga hiperactiva no controlada (OAB) o incontinencia urinaria distinta de IUE (incluidas las quejas anamnésicas sobre pérdidas involuntarias de orina acompañadas o inmediatamente precedidas de urgencia, no inducida por estrés)
- pacientes con trastorno neurológico bien establecido (p. Esclerosis múltiple, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer)
- pacientes con prolapso de órganos pélvicos estadio ≥ II (clasificación ICS)
- pacientes con una obstrucción de la salida de la vejiga clínicamente significativa y/o pacientes con un volumen residual posmiccional (PVR) > 100 ml
- pacientes con antecedentes de retención urinaria aguda o antecedentes de cateterismos repetidos debido a retención urinaria aguda en los últimos 3 meses anteriores al día del consentimiento informado
- pacientes con un catéter permanente y pacientes que practican el autocateterismo intermitente
- pacientes que se han sometido a una biopsia de vejiga o cualquier otra intervención quirúrgica pélvica menor menos de 30 días antes del día del consentimiento informado
- pacientes con antecedentes de cáncer de vejiga
- pacientes con infección aguda o recurrente del tracto urinario y/o hematuria inexplicable
- pacientes con cálculos en la vejiga o la uretra y cálculos en el tracto superior que causan síntomas
- pacientes con evidencia de insuficiencia renal (creatinina > 1,5 veces el límite superior de lo normal)
- pacientes con evidencia de enfermedad hepática (bilirrubina total >1,5x límite superior normal, o AST o ALT o fosfatasa alcalina >2x límite superior normal)
- pacientes con antecedentes de abuso de alcohol y/u otras drogas
- Pacientes que no pueden o es poco probable que comprendan y sigan los procedimientos e instrucciones del estudio.
- pacientes embarazadas o lactantes
- pacientes con afecciones médicas graves que, en opinión de los investigadores, no deberían participar en este estudio
El grupo control está representado por pacientes con los mismos criterios de inclusión y exclusión que el grupo de casos, excepto la incontinencia urinaria de esfuerzo.
Plan de estudios
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
Cohortes e Intervenciones
Grupo / Cohorte |
Intervención / Tratamiento |
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incontinencia urinaria de esfuerzo
Pacientes que presentan incontinencia urinaria de esfuerzo según los criterios de inclusión y exclusión
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controles saludables
mujeres sanas con los mismos criterios de inclusión y exclusión que el grupo de casos, excepto incontinencia urinaria de esfuerzo
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¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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medición espectrométrica de masas del secretoma proteómico urinario en sujetos enfermos y sanos (cobertura de secuencia y número de proteínas identificadas)
Periodo de tiempo: La medida de resultado primaria se evaluará para cada participante en un período de tiempo de 4 a 7 días después del reclutamiento.
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Comparación de concentraciones de proteínas según el número de proteínas identificadas y el recuento espectral espectrométrico de masas para pacientes con incontinencia urinaria de esfuerzo y controles sanos.
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La medida de resultado primaria se evaluará para cada participante en un período de tiempo de 4 a 7 días después del reclutamiento.
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Investigadores
- Investigador principal: Heinz Kölbl, Univ.-Prof.Dr.Dr.h.c., Medical University of Vienna, Department of Obstetrics and Gynaecology
Publicaciones y enlaces útiles
Publicaciones Generales
- Petricoin EF, Ardekani AM, Hitt BA, Levine PJ, Fusaro VA, Steinberg SM, Mills GB, Simone C, Fishman DA, Kohn EC, Liotta LA. Use of proteomic patterns in serum to identify ovarian cancer. Lancet. 2002 Feb 16;359(9306):572-7. doi: 10.1016/S0140-6736(02)07746-2.
- Chen B, Wen Y, Zhang Z, Guo Y, Warrington JA, Polan ML. Microarray analysis of differentially expressed genes in vaginal tissues from women with stress urinary incontinence compared with asymptomatic women. Hum Reprod. 2006 Jan;21(1):22-9. doi: 10.1093/humrep/dei276. Epub 2005 Aug 26.
- Mushkat Y, Bukovsky I, Langer R. Female urinary stress incontinence--does it have familial prevalence? Am J Obstet Gynecol. 1996 Feb;174(2):617-9. doi: 10.1016/s0002-9378(96)70437-4.
- Elia G, Bergman J, Dye TD. Familial incidence of urinary incontinence. Am J Obstet Gynecol. 2002 Jul;187(1):53-5. doi: 10.1067/mob.2002.124842.
- Hu S, Loo JA, Wong DT. Human body fluid proteome analysis. Proteomics. 2006 Dec;6(23):6326-53. doi: 10.1002/pmic.200600284.
- Ho L, Sharma N, Blackman L, Festa E, Reddy G, Pasinetti GM. From proteomics to biomarker discovery in Alzheimer's disease. Brain Res Brain Res Rev. 2005 Apr;48(2):360-9. doi: 10.1016/j.brainresrev.2004.12.025.
- Semmes OJ, Feng Z, Adam BL, Banez LL, Bigbee WL, Campos D, Cazares LH, Chan DW, Grizzle WE, Izbicka E, Kagan J, Malik G, McLerran D, Moul JW, Partin A, Prasanna P, Rosenzweig J, Sokoll LJ, Srivastava S, Srivastava S, Thompson I, Welsh MJ, White N, Winget M, Yasui Y, Zhang Z, Zhu L. Evaluation of serum protein profiling by surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry for the detection of prostate cancer: I. Assessment of platform reproducibility. Clin Chem. 2005 Jan;51(1):102-12. doi: 10.1373/clinchem.2004.038950.
Fechas de registro del estudio
Fechas importantes del estudio
Inicio del estudio
Finalización primaria (Actual)
Finalización del estudio (Actual)
Fechas de registro del estudio
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Más información
Términos relacionados con este estudio
Palabras clave
Términos MeSH relevantes adicionales
- Síntomas de comportamiento
- Desordenes mentales
- Enfermedades urológicas
- Síntomas del tracto urinario inferior
- Manifestaciones Urológicas
- Trastornos de la micción
- Trastornos de Eliminación
- Enfermedades urogenitales femeninas
- Enfermedades urogenitales femeninas y complicaciones del embarazo
- Enfermedades urogenitales
- Enfermedades urogenitales masculinas
- Incontinencia urinaria
- Enuresis
- Incontinencia Urinaria, Estrés
Otros números de identificación del estudio
- EK 1788/2013
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