Padrão Proteômico na Incontinência Urinária de Esforço Feminina: um Estudo Piloto
Objetivo: O objetivo primário do estudo é a comparação das concentrações de proteínas entre pacientes com incontinência urinária de esforço (IUE) e controles saudáveis.
Objetivo: Este estudo piloto visa determinar um possível perfil proteico alterado em mulheres com IUE, em comparação com mulheres saudáveis e, portanto, discriminar um potencial biomarcador proteico para IUE.
Principal medida de resultado: medição espectrométrica de massa do secretoma proteômico urinário em indivíduos doentes e saudáveis (cobertura da sequência e número de proteínas identificadas)
Desenho do estudo: estudo de caso-controle prospectivo
Local: Departamento de Ginecologia e Obstetrícia da Universidade Médica de Viena em cooperação com o Core Facilities Proteomics da Universidade Médica de Viena
População: Vinte pacientes do sexo feminino com IUE e vinte pacientes saudáveis que frequentam o ambulatório do Departamento de Obstetrícia e Ginecologia, Medical University of Vienna (cálculo do tamanho da amostra FDR 0,05, poder de 80%, proporção assumida de H0 verdadeiro 0,95, efeito padronizado assumido tamanho de 1)
Métodos: Exames a serem realizados: anamnese, teste de estresse provocativo, questionário ICIQ short form, volume residual de urina (ultrassom) e análise de urina (teste reagente). Uma amostra de urina é obtida do paciente após a micção espontânea, à qual o inibidor de protease será adicionado imediatamente. Dois frascos de sangue sérico (cada 9ml) são retirados de uma veia periférica do paciente para laboratório de rotina e pesquisas posteriores.
A análise proteômica será realizada por separação cromatográfica (LC) com detecção por espectrometria de massas (MS).
Visão geral do estudo
Status
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
Métodos:
A preparação e análise da amostra incluirão:
- Coleta de amostras e adição imediata de coquetel de inibidores de protease (Roche, Complete Protease Inhibitor Cocktail).
- Centrifugação e filtração da urina para remoção de detritos celulares.
- Precipitação de proteínas aplicando separação de metanol/clorofórmio para remoção de todas as possíveis substâncias não proteicas.
- Digestão de proteínas aplicando tripsina, pepsina e Glu-C em solução.
Separação de peptídeos usando nano HPLC e diferentes abordagens cromatográficas.
- Separação de fase reversa (RP) de peptídeos e detecção de MS
- Separação de peptídeos usando HILIC (Cromatografia Líquida de Interação Hidrofílica) para discriminação de peptídeos polares.
- Além de RP e HILIC diretamente acoplados a MS, peptídeos digeridos serão separados usando abordagens multidimensionais. Colunas de troca aniônica fraca operadas sob condições HILIC serão utilizadas para separar peptídeos portadores de modificações pós-traducionais como fosforilação ou acetilação, aumentando assim a faixa dinâmica de detecção. Durante esta separação, as frações serão coletadas e reinjetadas no RP e HILIC com detecção de MS.
- Todas as separações nano HPLC serão realizadas usando sistema de separação biocompatível.
A análise por espectrometria de massa dos peptídeos digeridos será realizada usando dois métodos de detecção diferentes: ion-trap e time-of-flight (qToF) MS. A detecção e análise por espectrometria de massa qToF também serão usadas para a quantificação livre de marcadores de peptídeos e proteínas detectados nas amostras. Todas as medições serão realizadas em triplicata para fornecer correções para variabilidade técnica de separação e ionização.
A pesquisa geral do banco de dados será realizada usando o banco de dados Human SwissProt em sua versão atual no momento da análise. A pesquisa de dados será realizada usando o Mascot (http://www.matrixscience.com/) e X!Tandem (http://www.thegpm.org/tandem/) máquinas de busca e alocação e filtragem de dados finais usando Scaffold (www.proteomsoftware.com).
Análise estatística:
A análise dos dados será realizada com o pacote de biocondutores limma. Antes da análise dos dados, os dados serão filtrados excluindo proteínas com medições com um baixo intervalo interquartílico. Os grupos serão comparados por estatísticas t pareadas moderadas com ajuste para idade. O ajuste para testes múltiplos será feito pela correção de Benjamini-Hochberg controlando o FDR em 0,05.
Tipo de estudo
Inscrição (Real)
Contactos e Locais
Locais de estudo
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Vienna, Áustria, 1090
- Medical University of Vienna, Department of Obstetrics and Gynaecology
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Método de amostragem
População do estudo
Descrição
Critério de inclusão:
- pacientes com incontinência urinária de esforço: uma história de sintomas de incontinência urinária de esforço por pelo menos 3 meses (incluindo queixas anamnésticas de perda involuntária de esforço ou esforço ou ao espirrar ou tossir) e um teste de esforço provocativo positivo (definido como uma perda transuretral observada de urina simultânea com tosse ou manobra de Valsalva com volume vesical de 300ml ou menos)
- pacientes capazes de labuta independente
- pacientes que são capazes de entender completamente todos os procedimentos do estudo e fornecer consentimento informado por escrito para a participação no estudo
- idade ≥ 18
- pacientes após parto vaginal
Critério de exclusão:
- pacientes que foram previamente tratados para IUE (tratamento cirúrgico ou farmacológico)
- pacientes com histórico médico de bexiga hiperativa (OAB) descontrolada ou incontinência urinária diferente da IUE (incluindo queixas anamnésticas de perda involuntária de urina acompanhada ou imediatamente precedida por urgência, não induzida por estresse)
- pacientes com distúrbio neurológico bem estabelecido (por exemplo, Esclerose Múltipla, doença de Parkinson, doença de Alzheimer)
- pacientes com estágio de prolapso de órgãos pélvicos ≥ II (classificação ICS)
- pacientes com obstrução da saída da bexiga clinicamente significativa e/ou pacientes com volume residual pós-miccional (RVP) > 100ml
- pacientes com história de retenção urinária aguda ou história de cateterismos repetidos devido a retenção urinária aguda nos últimos 3 meses antes do dia do consentimento informado
- pacientes com cateter de demora e pacientes praticando autocateterismo intermitente
- pacientes que foram submetidos a uma biópsia da bexiga ou qualquer outra intervenção cirúrgica pélvica menor menos de 30 dias antes do dia do consentimento informado
- pacientes com história de câncer de bexiga
- pacientes com infecção aguda ou recorrente do trato urinário e/ou hematúria inexplicável
- pacientes com cálculo(s) na bexiga ou uretra e litíase do trato superior causando sintomas
- pacientes com evidência de insuficiência renal (creatinina > 1,5x limite superior da normalidade)
- pacientes com evidência de doença hepática (bilirrubina total >1,5x limite superior do normal, ou AST ou ALT ou fosfatase alcalina >2x limite superior do normal)
- pacientes com história de abuso de álcool e/ou outras drogas
- pacientes incapazes e/ou improváveis de compreender e seguir os procedimentos e instruções do estudo
- pacientes grávidas ou lactantes
- pacientes com condições médicas graves que, na opinião dos investigadores, não deveriam participar deste estudo
O grupo controle é representado por pacientes com os mesmos critérios de inclusão e exclusão do grupo caso, exceto incontinência urinária de esforço.
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
Coortes e Intervenções
Grupo / Coorte |
Intervenção / Tratamento |
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incontinência urinária de esforço
Pacientes com incontinência urinária de esforço de acordo com os critérios de inclusão e exclusão
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controles saudáveis
mulheres saudáveis com os mesmos critérios de inclusão e exclusão do grupo caso, exceto para incontinência urinária de esforço
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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medição por espectrometria de massa do secretoma proteômico urinário em indivíduos doentes e saudáveis (cobertura da sequência e número de proteínas identificadas)
Prazo: A medida do resultado primário será avaliada para cada participante em um período de 4 a 7 dias após o recrutamento
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Comparação das concentrações de proteínas com base no número de proteínas identificadas e contagem espectral de espectrometria de massa para pacientes com incontinência urinária de esforço e controles saudáveis.
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A medida do resultado primário será avaliada para cada participante em um período de 4 a 7 dias após o recrutamento
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Investigadores
- Investigador principal: Heinz Kölbl, Univ.-Prof.Dr.Dr.h.c., Medical University of Vienna, Department of Obstetrics and Gynaecology
Publicações e links úteis
Publicações Gerais
- Petricoin EF, Ardekani AM, Hitt BA, Levine PJ, Fusaro VA, Steinberg SM, Mills GB, Simone C, Fishman DA, Kohn EC, Liotta LA. Use of proteomic patterns in serum to identify ovarian cancer. Lancet. 2002 Feb 16;359(9306):572-7. doi: 10.1016/S0140-6736(02)07746-2.
- Chen B, Wen Y, Zhang Z, Guo Y, Warrington JA, Polan ML. Microarray analysis of differentially expressed genes in vaginal tissues from women with stress urinary incontinence compared with asymptomatic women. Hum Reprod. 2006 Jan;21(1):22-9. doi: 10.1093/humrep/dei276. Epub 2005 Aug 26.
- Mushkat Y, Bukovsky I, Langer R. Female urinary stress incontinence--does it have familial prevalence? Am J Obstet Gynecol. 1996 Feb;174(2):617-9. doi: 10.1016/s0002-9378(96)70437-4.
- Elia G, Bergman J, Dye TD. Familial incidence of urinary incontinence. Am J Obstet Gynecol. 2002 Jul;187(1):53-5. doi: 10.1067/mob.2002.124842.
- Hu S, Loo JA, Wong DT. Human body fluid proteome analysis. Proteomics. 2006 Dec;6(23):6326-53. doi: 10.1002/pmic.200600284.
- Ho L, Sharma N, Blackman L, Festa E, Reddy G, Pasinetti GM. From proteomics to biomarker discovery in Alzheimer's disease. Brain Res Brain Res Rev. 2005 Apr;48(2):360-9. doi: 10.1016/j.brainresrev.2004.12.025.
- Semmes OJ, Feng Z, Adam BL, Banez LL, Bigbee WL, Campos D, Cazares LH, Chan DW, Grizzle WE, Izbicka E, Kagan J, Malik G, McLerran D, Moul JW, Partin A, Prasanna P, Rosenzweig J, Sokoll LJ, Srivastava S, Srivastava S, Thompson I, Welsh MJ, White N, Winget M, Yasui Y, Zhang Z, Zhu L. Evaluation of serum protein profiling by surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry for the detection of prostate cancer: I. Assessment of platform reproducibility. Clin Chem. 2005 Jan;51(1):102-12. doi: 10.1373/clinchem.2004.038950.
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo
Conclusão Primária (Real)
Conclusão do estudo (Real)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Estimado)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Termos MeSH relevantes adicionais
- Sintomas Comportamentais
- Transtornos Mentais, Desordem Mental
- Doenças Urológicas
- Sintomas do Trato Urinário Inferior
- Manifestações Urológicas
- Distúrbios da micção
- Distúrbios de Eliminação
- Doenças Urogenitais Femininas
- Doenças urogenitais femininas e complicações na gravidez
- Doenças urogenitais
- Doenças Urogenitais Masculinas
- Incontinencia urinaria
- Enurese
- Incontinência Urinária, Estresse
Outros números de identificação do estudo
- EK 1788/2013
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