Schema proteomico nell'incontinenza urinaria da sforzo femminile: uno studio pilota
Obiettivo: L'obiettivo primario dello studio è il confronto delle concentrazioni proteiche tra pazienti con incontinenza urinaria da sforzo (SUI) e controlli sani.
Obiettivo: Questo studio pilota mira a determinare un possibile profilo proteico alterato nelle donne affette da SUI, rispetto alle donne sane e quindi a discriminare un potenziale biomarcatore proteico per SUI.
Principale misura di esito: misurazione spettrometrica di massa del secretoma proteomico urinario in soggetti malati e sani (copertura della sequenza e numero di proteine identificate)
Disegno dello studio: studio prospettico caso-controllo
Ambiente: Dipartimento di Ginecologia e Ostetricia dell'Università di Medicina di Vienna in collaborazione con il Core Facilities Proteomics dell'Università di Medicina di Vienna
Popolazione: venti pazienti di sesso femminile con IUS e venti pazienti sani che frequentano la clinica ambulatoriale del Dipartimento di Ostetricia e Ginecologia, Università di Medicina di Vienna (calcolo della dimensione del campione FDR 0,05, potenza dell'80%, proporzione presunta di H0 reale 0,95, effetto standardizzato presunto dimensione di 1)
Metodi: Esami da effettuare: anamnesi, test da sforzo provocatorio, questionario ICIQ in forma abbreviata, volume residuo urinario (ecografia) e analisi delle urine (dipstick test). Un campione di urina viene prelevato dal paziente dopo la minzione spontanea, a cui verrà aggiunto immediatamente l'inibitore della proteasi. Due fiale di sangue di siero (ciascuna da 9 ml) vengono prelevate da una vena periferica del paziente per il laboratorio di routine e ulteriori ricerche.
L'analisi proteomica sarà eseguita mediante separazione cromatografica (LC) con rivelazione spettrometrica di massa (MS).
Panoramica dello studio
Stato
Condizioni
Intervento / Trattamento
Descrizione dettagliata
Metodi:
La preparazione e l'analisi del campione includeranno:
- Raccolta del campione e aggiunta immediata del cocktail di inibitori della proteasi (Roche, Complete Protease Inhibitor Cocktail).
- Centrifugazione e filtrazione delle urine per la rimozione dei detriti cellulari.
- Precipitazione delle proteine mediante separazione metanolo/cloroformio per la rimozione di tutte le possibili sostanze non proteiche.
- Digestione delle proteine applicando tripsina, pepsina e Glu-C in soluzione.
Separazione peptidica mediante nano HPLC e diversi approcci cromatografici.
- Separazione in fase inversa (RP) di peptidi e rilevamento MS
- Separazione di peptidi mediante HILIC (cromatografia liquida ad interazione idrofila) per la discriminazione dei peptidi polari.
- Oltre a RP e HILIC direttamente accoppiati a MS, i peptidi digeriti saranno separati utilizzando approcci multidimensionali. Colonne a scambio anionico debole operanti in condizioni HILIC saranno utilizzate per separare i peptidi portatori di modificazioni post-traduzionali come la fosforilazione o l'acetilazione, aumentando così il range dinamico di rivelazione. Durante questa separazione, le frazioni saranno raccolte e re-iniettate su RP e HILIC con rilevamento MS.
- Tutte le separazioni nano HPLC saranno eseguite utilizzando un sistema di separazione biocompatibile.
L'analisi spettrometrica di massa dei peptidi digeriti verrà eseguita utilizzando due diversi metodi di rivelazione: trappola ionica e MS a tempo di volo (qToF). Il rilevamento e l'analisi spettrometrica di massa qToF saranno utilizzati anche per la quantificazione label-free di peptidi e proteine rilevati nei campioni. Tutte le misurazioni saranno eseguite in triplicato per fornire correzioni per variabilità tecnica di separazione e ionizzazione.
La ricerca nel database generale verrà eseguita utilizzando il database Human SwissProt nella sua versione attuale al momento dell'analisi. La ricerca dei dati verrà eseguita utilizzando Mascot (http://www.matrixscience.com/) e X!Tandem (http://www.thegpm.org/tandem/) macchine di ricerca e l'allocazione finale dei dati e il filtraggio utilizzando Scaffold (www.proteomsoftware.com).
Analisi statistica:
L'analisi dei dati sarà condotta con il pacchetto di bioconduttori limma. Prima dell'analisi dei dati, i dati verranno filtrati escludendo le proteine con misurazioni con un basso range interquartile. I gruppi saranno confrontati mediante statistiche t accoppiate moderate aggiustate per età. L'adeguamento per i test multipli verrà effettuato mediante la correzione di Benjamini-Hochberg che controlla il FDR a 0,05.
Tipo di studio
Iscrizione (Effettivo)
Contatti e Sedi
Luoghi di studio
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Vienna, Austria, 1090
- Medical University of Vienna, Department of Obstetrics and Gynaecology
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Criteri di partecipazione
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
Accetta volontari sani
Metodo di campionamento
Popolazione di studio
Descrizione
Criterio di inclusione:
- pazienti con incontinenza urinaria da sforzo: una storia di sintomi di incontinenza urinaria da sforzo per almeno 3 mesi (incluse lamentele anamnestiche di perdite involontarie da sforzo o sforzo o da starnuti o tosse) e un test da sforzo provocatorio positivo (definito come una perdita transuretrale osservata di urina simultanea a tosse o manovra di Valsalva con un volume della vescica di 300 ml o inferiore)
- pazienti capaci di lavorare in modo indipendente
- pazienti in grado di comprendere appieno tutte le procedure dello studio e di fornire il consenso informato scritto alla partecipazione allo studio
- età ≥ 18 anni
- pazienti dopo il parto vaginale
Criteri di esclusione:
- pazienti che sono stati precedentemente trattati per IUS (trattamento sia chirurgico che farmacologico)
- pazienti con anamnesi di vescica iperattiva incontrollata (OAB) o incontinenza urinaria diversa dalla IUS (inclusi disturbi anamnestici relativi a perdite urinarie involontarie accompagnate o immediatamente precedute da urgenza, non indotta da stress)
- pazienti con disturbi neurologici ben definiti (ad es. sclerosi multipla, morbo di Parkinson, morbo di Alzheimer)
- pazienti con stadio di prolasso degli organi pelvici ≥ II (classificazione ICS)
- pazienti con un'ostruzione dello sbocco vescicale clinicamente significativa e/o pazienti con un volume residuo post-minzionale (PVR) > 100 ml
- pazienti con storia di ritenzione urinaria acuta o storia di cateterizzazioni ripetute dovute a ritenzione urinaria acuta negli ultimi 3 mesi prima del giorno del consenso informato
- pazienti con un catetere a permanenza e pazienti che praticano l'autocateterismo intermittente
- pazienti che hanno subito una biopsia della vescica o qualsiasi altro intervento chirurgico pelvico minore meno di 30 giorni prima del giorno del consenso informato
- pazienti con una storia di cancro alla vescica
- pazienti con infezione acuta o ricorrente del tratto urinario e/o ematuria inspiegabile
- pazienti con calcoli nella vescica o nell'uretra e malattie del tratto superiore dei calcoli che causano sintomi
- pazienti con evidenza di insufficienza renale (creatinina > 1,5 volte il limite superiore della norma)
- pazienti con evidenza di malattia epatica (bilirubina totale > 1,5 volte il limite superiore della norma, o AST o ALT o fosfatasi alcalina > 2 volte il limite superiore della norma)
- pazienti con una storia di abuso di alcol e/o altre droghe
- pazienti che non sono in grado e/o difficilmente comprendono e seguono le procedure e le istruzioni dello studio
- pazienti in gravidanza o in allattamento
- pazienti con gravi condizioni mediche che, a parere dei ricercatori, non dovrebbero partecipare a questo studio
Il gruppo di controllo è rappresentato da pazienti con gli stessi criteri di inclusione ed esclusione del gruppo dei casi, ad eccezione dell'incontinenza urinaria da sforzo.
Piano di studio
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
Coorti e interventi
Gruppo / Coorte |
Intervento / Trattamento |
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incontinenza urinaria da sforzo
Pazienti che presentano incontinenza urinaria da sforzo secondo i criteri di inclusione ed esclusione
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controlli sani
donne sane con gli stessi criteri di inclusione ed esclusione del gruppo dei casi, ad eccezione dell'incontinenza urinaria da sforzo
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Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
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misurazione spettrometrica di massa del secretoma proteomico urinario in soggetti malati e sani (copertura della sequenza e numero di proteine identificate)
Lasso di tempo: La misura dell'esito primario sarà valutata per ciascun partecipante in un lasso di tempo di 4-7 giorni dopo il reclutamento
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Confronto delle concentrazioni proteiche in base al numero di proteine identificate e alla conta spettrale spettrometrica di massa per pazienti con incontinenza urinaria da sforzo e controlli sani.
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La misura dell'esito primario sarà valutata per ciascun partecipante in un lasso di tempo di 4-7 giorni dopo il reclutamento
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Collaboratori e investigatori
Sponsor
Investigatori
- Investigatore principale: Heinz Kölbl, Univ.-Prof.Dr.Dr.h.c., Medical University of Vienna, Department of Obstetrics and Gynaecology
Pubblicazioni e link utili
Pubblicazioni generali
- Petricoin EF, Ardekani AM, Hitt BA, Levine PJ, Fusaro VA, Steinberg SM, Mills GB, Simone C, Fishman DA, Kohn EC, Liotta LA. Use of proteomic patterns in serum to identify ovarian cancer. Lancet. 2002 Feb 16;359(9306):572-7. doi: 10.1016/S0140-6736(02)07746-2.
- Chen B, Wen Y, Zhang Z, Guo Y, Warrington JA, Polan ML. Microarray analysis of differentially expressed genes in vaginal tissues from women with stress urinary incontinence compared with asymptomatic women. Hum Reprod. 2006 Jan;21(1):22-9. doi: 10.1093/humrep/dei276. Epub 2005 Aug 26.
- Mushkat Y, Bukovsky I, Langer R. Female urinary stress incontinence--does it have familial prevalence? Am J Obstet Gynecol. 1996 Feb;174(2):617-9. doi: 10.1016/s0002-9378(96)70437-4.
- Elia G, Bergman J, Dye TD. Familial incidence of urinary incontinence. Am J Obstet Gynecol. 2002 Jul;187(1):53-5. doi: 10.1067/mob.2002.124842.
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- Semmes OJ, Feng Z, Adam BL, Banez LL, Bigbee WL, Campos D, Cazares LH, Chan DW, Grizzle WE, Izbicka E, Kagan J, Malik G, McLerran D, Moul JW, Partin A, Prasanna P, Rosenzweig J, Sokoll LJ, Srivastava S, Srivastava S, Thompson I, Welsh MJ, White N, Winget M, Yasui Y, Zhang Z, Zhu L. Evaluation of serum protein profiling by surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry for the detection of prostate cancer: I. Assessment of platform reproducibility. Clin Chem. 2005 Jan;51(1):102-12. doi: 10.1373/clinchem.2004.038950.
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Inizio studio
Completamento primario (Effettivo)
Completamento dello studio (Effettivo)
Date di iscrizione allo studio
Primo inviato
Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità
Primo Inserito (Stimato)
Aggiornamenti dei record di studio
Ultimo aggiornamento pubblicato (Effettivo)
Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC
Ultimo verificato
Maggiori informazioni
Termini relativi a questo studio
Parole chiave
Termini MeSH pertinenti aggiuntivi
- Sintomi comportamentali
- Disordini mentali
- Malattie urologiche
- Sintomi del tratto urinario inferiore
- Manifestazioni urologiche
- Disturbi della minzione
- Disturbi di eliminazione
- Malattie urogenitali femminili
- Malattie urogenitali femminili e complicanze della gravidanza
- Malattie urogenitali
- Malattie urogenitali maschili
- Incontinenza urinaria
- Enuresi
- Incontinenza urinaria, Stress
Altri numeri di identificazione dello studio
- EK 1788/2013
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